(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111533863.1 (22)申请日 2021.12.15 (71)申请人 北京市肿瘤防治研究所 地址 100082 北京市海淀区阜成路52号 (72)发明人 沈琳　赵兴旺　 (74)专利代理 机构 北京万思博知识产权代理有 限公司 1 1694 代理人 刘冀 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 抗人CD19与CD206双特异性抗体及其制备方 法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种抗人CD19与CD206双特异 性抗体及其制备方法和应用， 该抗体包括特异性 结合CD19的表位的第一多肽链以及特异性结合 CD206的表位的第二多肽链和第三多肽链； 第二 多肽链分别与第一多肽链、 第三多肽链彼此共价 结合。 本发 明的抗体能够在体内与体外同时靶向 人源CD20+B淋巴细胞表面的CD19分子与CD163+ M2巨噬细胞表面的CD206分子， 从而调节肿瘤微 环境中CD20+B细胞与CD163+M2巨噬细胞之间的 极性化距离， 诱发CD20+B细胞与CD163+M2巨噬细 胞共定位互作， 促进肿瘤微环境 中CD163+M2巨噬 细胞， 在CD20+B淋巴细胞分泌的TNF或者IFN ‑γ 诱导下， 极性分化为CD86+M1巨噬细 胞， 介导肿瘤 抑制与杀伤。 权利要求书2页 说明书7页 序列表11页 附图3页 CN 114316060 A 2022.04.12 CN 114316060 A 1.一种抗人CD19与CD206双 特异性抗体， 其特征在于， 所述抗体包括特异性结合CD19的 表位的第一多肽链以及特异性结合CD206的表位的第二多肽链和第三多肽链； 所述第二多 肽链分别与所述第一多肽链、 第三多肽链彼此共价结合， 其中： (1)所述第一多肽链依次包括Anti ‑CD19信号肽、 重链可变区Anti ‑CD19‑scFv、 轻链可 变区Anti ‑CD19‑scFv， Anti ‑CD19‑CH2和Anti ‑CD19‑CH3， 其中Anti ‑CD19‑scFv与Anti ‑ CD19‑scFv彼此通过肽接 头连接； (2)所述第二多肽链依次包括Anti ‑CD206重链信号肽、 Anti ‑CD206‑VH、 Anti‑CD206‑ CH1、 Anti‑CD206‑CH2和Anti ‑CD206‑CH3； (3)所述的第三多肽链依次包括Anti ‑CD206轻链信号肽、 Anti ‑CD206‑VL、 Anti‑CD206‑ CL； Anti‑CD19‑scFv氨基酸序列为SEQ  ID NO.3， Anti ‑CD19‑scFv氨基酸序列为SEQ  ID  NO.5， Anti ‑CD206‑VH氨基酸序列为SEQ  ID NO.13， Anti ‑CD206‑VL氨基酸序列为SEQ  ID  NO.23。 2.根据权利要求1所述的抗人CD19与CD20 6双特异性 抗体， 其特 征在于， (1)所述第一多肽链依次包括氨基酸序列为SEQ  ID NO.1的Anti ‑CD19信号肽、 氨基酸 序列为SEQ  ID NO.3的Anti ‑CD19‑scFv、 氨基酸序列 为SEQ ID NO.5的Anti ‑CD19‑scFv， 氨 基酸序列为SEQ  ID NO.7的Anti ‑CD19‑CH2以及氨基酸序列为SEQ  ID NO.9的Anti ‑CD19‑ CH3， 其中Anti ‑CD19‑scFv与Anti ‑CD19‑scFv彼此通过氨基酸序列为SEQ  ID NO.27的肽接 头连接； (2)所述第二多肽链依次包括氨基酸序列为SEQ  ID NO.11的Anti ‑CD206重链信号肽、 氨基酸序列为SEQ  ID NO.13的Anti ‑CD206‑VH、 氨基酸序列为SEQ  ID NO.15的Anti ‑CD206‑ CH1、 氨基酸序列为SEQ  ID NO.17的Anti ‑CD206‑CH2和氨基酸序列为SEQ  ID NO.19的Anti ‑ CD206‑CH3； (3)所述的第三多肽链依次包括氨基酸序列为SEQ  ID NO.21的Anti ‑CD206轻链信号 肽、 氨基酸序列为SEQ  ID NO.23的Anti ‑CD206‑VL、 氨基酸序列为SEQ  ID NO.25的Anti ‑ CD206‑CL。 3.权利要求2所述的抗人CD19与CD206双特异性抗体的制备方法， 其特征在于， 所述方 法包括： (1)根据权利要求2所述抗体的结构域的核酸片段序列构建双特异性抗体真核表达载 体； (2)将所述真核表达载体导入宿主细胞中表达 。 4.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述真核表达载体是利用自剪切 2A肽 系统构建的。 5.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述载体构建拼接顺序为第 一多肽链 的核酸片段 ‑2A肽‑第二多肽链的核酸片段 ‑2A肽‑第三多肽链的核酸片段。 6.根据权利要求5所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述2 A肽选自F2 A、 T2A或E2A。 7.根据权利要求3所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述的宿主细胞 是293F细胞。 8.含有权利 要求1或2所述的抗人CD19与CD206双 特异性抗体的核苷酸序列的重组表达 载体。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114316060 A 29.含有权利要求8所述的重组表达载体的宿主细胞。 10.权利要求1或2所述的抗体、 权利要求3 ‑7任一项所述的制备方法或权利要求8所述 的重组表达载体在制备抗肿瘤药物或药物组合物中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114316060 A 3