(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111459992.0 (22)申请日 2021.12.02 (66)本国优先权数据 202011398727.1 2020.12.02 CN (71)申请人 迈威 （上海） 生物科技股份有限公司 地址 201210 上海市浦东 新区李冰路576号 （创想园） 3号楼4楼 (72)发明人 焦莎莎　王荣娟　王双　张姣　 张畅　曾大地　 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 19/00(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 47/68(2017.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 抗人B7-H3抗体及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种抗人B7 ‑H3单克隆抗体及 其应用。 以重组人B7 ‑H3胞外区作为免疫原， 通过 杂交瘤技术制备鼠源抗人B7 ‑H3单克隆抗体， 鼠 源抗人B7 ‑H3抗体能够结合B7 ‑H3胞外区的各结 构域。 在鼠源抗体的基础上构建的人 ‑鼠嵌合抗 体能够特异性结合细胞表面的B7 ‑H3。 通过CDRs 移植和CDRs区突变制备的人源化抗体保留了特 异性结合人B7 ‑H3胞外区和细胞膜表面B7 ‑H3的 能力， 并且能够由细胞膜 表面B7‑H3介导内化。 权利要求书3页 说明书22页 序列表29页 附图9页 CN 114573695 A 2022.06.03 CN 114573695 A 1.一种抗人B7 ‑H3抗体或其片段， 其特 征在于， 包括： 重链可变区， 所述重链可变区(VH)包括抗原决定区(CDRs)1、 2和3， 其中， VHCDR1包含与 所选VH CDR1氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列； VH  CDR2包含与所选VH  CDR2 氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列； VH  CDR3与所选VHCDR3氨基酸序列具有至 少75％同一 性的氨基酸序列； 轻链可变区， 所述轻链可变区(VL)包括CDRs  1、 2和3， 其中， VL  CDR1包含与所选VL   CDR1氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列； VL  CDR2包含与所选VLCDR2氨基酸序 列具有至少75％同一性的氨基酸序列； VL  CDR3与所选VL  CDR3氨基酸序列具有至少75％同 一性的氨基酸序列； 其中， 所述所选VH  CDRs 1、 2和3的氨基酸序列以及所述所选VL  CDRs 1、 2和3的氨基酸 序列选自下列之一： (1)所述所选VH  CDRs 1、 2和3的氨基酸序列分别如SEQ  ID NO： 40、 41和42所示， 且所述 所选VL CDRs 1、 2和3的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 43、 44和45所示； (2)所述所选VH  CDRs 1、 2和3的氨基酸序列分别如SEQ  ID NO： 46、 47和48所示， 且所述 所选VL CDRs 1、 2和3的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 49、 50和51所示； (3)所述所选VH  CDRs 1、 2和3的氨基酸序列分别如SEQ  ID NO： 52、 53和54所示， 且所述 所选VL CDRs 1、 2和3的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 55、 56和57所示， 任选地， 与包含SEQ  ID NO： 51所示 的氨基酸序列的所选VL  CDR3具有至少75％同一性 的氨基酸序列为 QQWSX1X2PLT， 其中， X1为S或A， X2为N、 A、 S或Q。 2.如权利要求1所述抗人B7 ‑H3抗体或其片段， 其特征在于， 所述VH包括与SEQ  IDNO： 1 具有至少75％同一性氨基酸序列， 且所述VL包括与SEQ  ID NO： 2具有至少75％同一性氨基 酸序列， 任选地， 所述VH包括与SEQ  ID NO： 3具有至少75％同一性氨基酸序列， 且所述VL包括与 SEQ ID NO： 4具有至少75％同一 性氨基酸序列， 任选地， 所述VH包括与SEQ  ID NO： 5具有至少75％同一性氨基酸序列， 且所述VL包括与 SEQ ID NO： 6具有至少75％同一 性氨基酸序列。 3.如权利要求2所述抗人B7 ‑H3抗体或其片段， 其特征在于， 所述VH包括SEQ  IDNO： 11或 17所示的氨基酸序列， 所述VL包括SEQ  ID NO： 12、 13、 14、 15或16所示的氨基酸序列， 任选地， 所述VH包括SEQ  ID NO： 18、 21、 22或23所示的氨基酸序列， 所述VL包括SEQ  ID  NO： 19、 20、 58、 59或6 0所示的氨基酸序列， 任选地， 所述VH包括SEQ  ID NO： 24、 34、 35、 36或37所示的氨基酸序列， 所述VL包括SEQ   ID NO： 25、 26、 27、 28、 2 9、 30、 31、 32或3 3所示的氨基酸序列。 4.如权利 要求1所述抗人B 7‑H3抗体或其片段， 其特征在于， 所述抗人B 7‑H3抗体或其片 段能够特异性结合人B7 ‑H3的胞外区， 且与人B7 ‑H3胞外区的亲和力常数(KD)小于 5E‑10。 5.一种制备抗人B 7‑H3的人源化抗体或其片段的方法， 其特征在于， 包括： 在非人源B 7‑ H3抗体或其片段的基础上， 利用CDRs移植技术实现重链可变区的人源化和 /或轻链可变区 的人源化， 以便获得权利要求1 ‑4任一项所述 抗人B7‑H3抗体或其片段。 6.如权利要求5所述制备抗人B7 ‑H3的人源化抗体或其片段的方法， 其特征在于， 所述 利用CDRs移植 技术实现重链可变区的人源化的步骤 包括：权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114573695 A 2(1)利用非人源B 7‑H3抗体或其片段的重链可变区序列进行同源比对， 选择相似的人源 抗体重链模板； (2)将所述非人源B7 ‑H3抗体或其片段的的VH  CDRs 1、 2和3移植到人源抗体重链模板 中； (3)根据VH  CDR3的序列选择J区序列， 实现重链可变区的人源化， 获得权利要求1 ‑4任 一项所述 抗人B7‑H3抗体或其片段。 7.如权利要求5所述制备抗人B7 ‑H3的人源化抗体或其片段的方法， 其特征在于， 所述 利用CDRs移植 技术实现轻链可变区的人源化的步骤 包括： (1)利用非人源B 7‑H3抗体或其片段的轻链可变区序列进行同源比对， 选择相似的人源 抗体轻链模板； (2)将所述非人源B7 ‑H3抗体或其片段的VL  CDRs 1‑3移植到人源抗体轻链模板中； (3)根据所述VL  CDR3的序列选择JK区序列， 实现轻链可变区的人源化， 获得权利要求 1‑4任一项所述 抗人B7‑H3抗体或其片段。 8.如权利 要求5‑7中任一项所述制备抗人B 7‑H3的人源化抗体或其片段的方法， 其特征 在于， 在所述CDRs移 植后， 还包括对 人源化抗体进 行亲和力成熟、 CDR序列点突变改造和/或 化学修饰。 9.一种融合分子， 其特 征在于， 包括 (1)第一活性元件， 所述第一活性元件为包括权利要求1 ‑4中任一项所述抗人B7 ‑H3抗 体或其片段的第一靶向部分； (2)一个或多个第二活性元件， 所述第二活性元件包括效应子元件和/或第二靶向部 分； 其中， 所述第一活性元件与第二活性元件通过键或接头连接； 所述一个或多个第二活 性元件可以相同或不同。 10.一种多核苷酸， 其特征在于， 所述多核苷酸编码权利要求1 ‑4中任一项所述抗人B7 ‑ H3抗体或其片段或权利要求19所述融合分子 。 11.构建体， 其特 征在于， 包 含权利要求10所述的多 核苷酸。 12.宿主细胞， 其特征在于， 包含权利要求10所述的多核苷酸或权利要求11所述的核酸 构建体。 13.一种缀合物， 其包括第一活性元件， 所述第一活性元件为包括权利要求1 ‑4中任一 项所述抗人B7‑H3抗体或其片段的第一靶向部分。 14.如权利要求13所述的缀合物， 还包括至少一个第 二活性元件， 所述第 一活性元件和 第二活性元件 共价连接 。 15.如权利要求14所述的缀 合物， 所述第二活性元件 包括一种或多种效应子 部分。 16.如权利要求15所述的缀合物， 其中所述效应子部分为小分子药物缀合物， 所述小分 子药物缀 合物选自以下(1)～(3)组中一种或多种的效应分子或其 衍生物： (1) 微管蛋白 抑制剂类小分子化合物 ： 美登素衍生物、 一甲基澳瑞他汀E (Monomet hylauristatin E)、 一甲基澳瑞 他汀F(Mono methylauristatin F)、 一甲基海兔毒 素10(MonomethylDol astatin 10)、 Tubulysin类衍生物、 念珠藻素(Cryptophycin)类衍生 物和他托布林(Taltobul in)；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114573695 A 3