(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111559140.9 (22)申请日 2021.12.20 (71)申请人 安徽安科生物工程 （集团） 股份有限 公司 地址 230088 安徽省合肥市高新区海关 路 K-1 (72)发明人 刘浩　许文娟　徐婷　周伟　 崔智强　叶洪涛　鲍文英　范清林　 宋礼华　 (74)专利代理 机构 合肥诚兴知识产权代理有限 公司 34109 专利代理师 汤茂盛 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01)C12N 15/85(2006.01) C12Q 1/02(2006.01) G01N 33/58(2006.01) G01N 33/577(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 抗PD-L1与OX40双特异性 抗体及其用途 (57)摘要 本发明属于生物技术领域， 具体涉及抗PD ‑ L1与OX40双特异性抗体， 可以增 强T效应细胞的 免疫刺激、 促进细胞因子分泌的抗OX40和PD ‑L1 抗体， 所述抗体在小鼠肿瘤模型中表现出了显著 的肿瘤抑制效果。 所述双特异性抗体， 包括具有 轻链和重链IgG结构域以及可变区部分， 所述可 变区部分连接到所述重链的N端或C端并串联一 个或者两个纳米抗体的可变区； 所述纳米抗体结 构域对第一抗原OX40具有结合特异性， IgG结构 域对第二 抗原PD‑L1具有结合特异性。 权利要求书2页 说明书22页 序列表32页 附图9页 CN 114478789 A 2022.05.13 CN 114478789 A 1.一种抗PD ‑L1与OX40双 特异性抗体， 其特征在于： 所述双 特异性抗体包括IgG重链、 轻 链、 连接到重链的C端或N端的纳米抗体部分， 所述纳米抗体结构域对第一抗原OX40具有结 合特异性， IgG重链结构域对第二 抗原PD‑L1具有结合特异性。 2.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述双特异性抗体选自全人源抗 体、 人源化 抗体、 嵌合 抗体或重组抗体的一种或多种。 3.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述纳米抗体为全人源抗人OX40 单克隆纳米抗体， 包括重链可变区， 所述重链可变区包含CDR1区、 CDR2区和CDR3区， 其中该 CDR1区、 CDR2区和CD R3区分别包含SEQ  ID NO:34、 35、 36， 所示氨基酸序列的任意一种或与 其任意一种具有至少80％序列同一 性的同源序列。 4.根据权利要求1或3所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述纳米抗体包括具有SEQ   ID No:13、 14、 15的氨基酸序列或者具有与SEQ  ID No:13、 14、 15至少90％、 95％、 96％、 97％、 98％相似性的氨基酸序列。 5.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述纳米抗体为： 四聚体纳米抗 体融合蛋白， 连接在IgG1  Fc的N端， 如SEQ  ID NO:15所示； 和/或， 二聚体纳米抗体融合蛋 白， 连接在IgG1  Fc的N端， 如SEQ  ID NO:14所示。 6.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述重链为PD ‑L1抗体的IgG1重 链， 所述重链包括具有SEQ  ID No:10、 12、 17、 20、 23、 26的氨基酸序列或者具有与SEQ  ID  No:10、 12、 17、 20、 23、 26 至少90％、 95％、 96％、 97％、 98％相似性的氨基酸序列。 7.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述轻链为PD ‑L1抗体的κ轻链， 所述κ 轻链包括具有SEQ  ID No:9、 11、 16、 18、 19、 21、 22、 24、 2 5、 27的氨基酸序列或者具有与 SEQ ID No:9、 11、 16、 18、 19、 21、 22、 24、 25、 27至少90％、 95 ％、 96％、 97％、 98％相似性的氨 基酸序列。 8.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述双特异性抗体还包括人IgG1 框架区域的C H1、 CH2、 CH3。 9.根据权利 要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述IgG结构域包括IgG1恒定区， 所述IgG1恒定区具有SEQ  ID No:7的氨基酸序列或者具有与SEQ  ID No:7至少90％、 95％、 96％、 97％、 98％相似性的氨基酸序列。 10.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 连接可变区和重链IgG结构之间 的linker部分为 一段氨基酸序列， 其接 头为(GGGGS)n， 其中n ＝0‑4。 11.根据权利 要求1‑10任一项所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述抗体是IgG1形式 的抗体或IgG2形式或IgG4形式的抗体或抗原结合片段， 其Fc结构域分别IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4或相应工程 化亚型。 12.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 所述轻链和重链的氨基酸序列 分别为： SEQ  ID No:9和SEQ  ID No:10， 或SEQ  ID No:16和SEQ  ID No:17， 或SEQ  ID No:19 和SEQ ID No:20， 或SEQ  ID No:22和SEQ ID No:23， 或SEQ  ID No:25和SEQ  ID No:27。 13.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其特征在于： 其分离的抗体或其抗原结合部 分， 在ELISA水平与人OX40或P D‑L1结合。 14.一种双特异性分子、 免疫交联物、 嵌合抗原受体、 基因改造T细胞受体或溶瘤病毒， 其特征在于： 包 含权利要求1 ‑10任一项所述的双特异性 抗体或其 抗原结合部分。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114478789 A 215.一种核酸， 编码权利要求1 ‑10任一项所述的双特异性 抗体或其 抗原结合部分。 16.一种表达载体， 其特 征在于： 利用所述表达载体表达 权利要求15所述核酸。 17.一种宿主细胞， 其特 征在于： 所述宿主细胞包括权利要求16所述的表达载体。 18.一种制备双特异性抗体的方法， 其特征在于， 所述方法包括培养权利要求16 中所述 表达载体， 或包括培养权利要求14中任意一项宿主细胞， 从所述表达载体或所述宿主细胞 中表达所述双特异性 抗体。 19.一种药物组合物， 其包含权利要求1 ‑10任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合 片段。 20.一种治疗癌症的方法， 其特征在于： 所述方法包括向受试者施用有 效量的权利要求 1‑10任一项 所述的双特异 性抗体或其抗原结合片段或权利要求 19的药物组合物； 所述癌症 是肺癌、 结肠癌、 胃癌、 肾癌或肝癌。 21.一种试剂盒 或制品， 其包 含权利要求1 ‑10任一项所述的双特异性 抗体。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114478789 A 3