(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111548011.X (22)申请日 2021.12.16 (71)申请人 深圳市国创纳米抗体技 术有限公司 地址 518110 广东省深圳市龙华区观澜街 道新澜社区观 光路1301号银星 科技大 厦C803 (72)发明人 宋海鹏　刘原源　于建立　王准　 曹慧　古一　李飞　张霞　蒋立仲　 宋亮　 (74)专利代理 机构 北京市众天律师事务所 11478 代理人 李新军 (51)Int.Cl. C07K 16/30(2006.01) C12N 15/13(2006.01)C12N 1/21(2006.01) C12N 15/70(2006.01) C07K 16/46(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 抗CA125抗原VHH结构域及含有其的双特异 性抗体 (57)摘要 本发明公开了一种抗CA125抗原的VHH结构 域及单域抗体， 以及含有两种VHH结构域的双特 异性抗体， 所述抗体由两条不同的重链序列融合 而成， 可以分别识别CA12 5抗原的不同表位。 所述 单域抗体以及双特异性抗体均具有优异的抗体 识别能力， 显著 的ADCC效应、 并具有较长的体内 半衰期， 在体内外诊断和药物制备领域具有广阔 的应用前 景。 权利要求书1页 说明书13页 序列表11页 附图8页 CN 114106184 A 2022.03.01 CN 114106184 A 1.一种抗CA125抗原的VHH结构域， 其特征在于， 所述VHH结构域的3个互补决定区CDR1、 CDR2、 CDR3分别为SEQ  ID NO.1的第2 6‑33、 51‑58、 97‑112位氨基酸序列所示， 或者如SEQ  ID  NO.3的第26 ‑33、 51‑57、 96‑113位氨基酸序列所示。 2.根据权利要求1所述的VHH结构域， 其特征在于， 所述VHH结构域的序列如SEQ  ID  NO.1或者SEQ  ID NO.3的氨基酸序列所示。 3.一种含有权利要求1或2所述VHH结构域的单域抗体， 其特征在于， 所述抗体的恒定区 序列如SEQ  ID NO.5所示。 4.一种编码权利要求2所述VHH结构域序列的核酸， 其特征在于， 所述核酸的序列由SEQ   ID NO.2或者SEQ  ID NO.4所示。 5.一种含有权利要求 4所述的核酸的表达载体， 其特 征在于， 所述载体为pM ES4。 6.一种含有权利要求5所述表达载体的宿主细胞， 其特征在于， 所述细胞为大肠杆菌 BL21(DE3)。 7.一种双特异性抗体， 其特征在于， 所述抗体含有两条序列不同的重链， 所述两条序列 不同的重链由SEQ  ID NO.1所示的氨基酸序列 与SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列串联而成。 8.根据权利要求7所述的双特异性抗体， 其特征在于， 所述两条序列不同的重链之间设 有连接肽， 所述连接肽为(G4S)n， 其中， n 为1‑6之间的整数。 9.根据权利要求8所述的双特异性抗体， 其特征在于， 所述n＝4， 所述双特异性抗体的 氨基酸序列如SEQ  ID NO.6所示。 10.根据权利要求9所述的双特异性抗体， 其特征在于， 在所述双特异性抗体的羧基端 还带有抗体恒定区， 其恒定区序列如SEQ  ID NO.5所述的氨基酸序列所示。 11.一种编码权利要求9所述 抗体序列的核酸， 所述序列由SEQ  ID NO.7所示。 12.一种含有权利 要求11所述核酸的表达载体， 其特征在于， 所述载体为p FUSE hIgG1‑ Fc2。 13.一种含有权利要求12所述表达载体的宿主细胞， 其特征在于， 所述细胞为HEK293细 胞。 14.权利要求1 ‑3任一所述 抗体在制备肿瘤治疗药物中的应用。 15.权利要求7 ‑10任一所述 抗体在制备肿瘤治疗药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114106184 A 2抗CA125抗原VH H结构域及含有其的双特异性抗体 技术领域 [0001]本发明公开了一种多肽， 更 具体地， 公开了一种抗体， 属于免疫学 领域。 背景技术 [0002]CA125(Cancer  Antigen 125)卵巢癌相关抗原发现于1981年， 是卵巢上皮性类癌 的相关性抗原。 由胚胎期上皮细胞分泌， 正常情况下不分泌或极少分泌， 但是当卵巢 发生恶 性病变时， 即使临床上没有表现或病理上难以识别时， CA125值也会升高， 因而是较好的卵 巢癌诊断及筛查指标， 并与卵巢癌的转移及预后有密切关系。 CA125最初是由Bast等通过卵 巢细胞系OVCA433免疫原， 介导鼠源性单克隆抗体OC125应答， 继而识别并确认其存在。 CA125抗原为相对分子质量达200ku的糖蛋白， 兼有膜结合型与游离型两种态性， 是迄今为 止研究最全面的卵巢癌血清标志物之一。 90％进展期的卵巢癌患者血清中的CA125浓度 都 会呈现不同程度的升高。 [0003]尽管卵巢癌患者首选手术或化疗等治疗方法， 但其预后的效果并不理想。 肿瘤复 发， 尤其是腹腔内复发以及化疗耐药， 往往是影响预后的重要因素。 目前， 卵巢癌新的治疗 方案， 特别是生物治疗技术 发展迅速， 且已部 分应用于离体和体内研究及临床试验中。 卵巢 癌生物治疗包括细胞因子、 单克隆抗体、 转基因疗法等多种形式。 在诸多途径中， CA125单克 隆抗体疗法尤其引人瞩目。 目前CA125单克隆抗体治疗卵巢癌的技术包括抗原抗体复合物 介导人体免疫应答和放射性元素与抗肿瘤药物靶向性诱导两类。 抗原抗体复合物介导免疫 应答是依靠激发机体内源性抗肿瘤反应， 从而达到清除病灶和自我修复调控的目的。 应用 于该技术中最具代表 性的抗体为抗CA125/抗T细胞表 面因子双特异 性抗体(BsAb)和鼠源性 单克隆抗体B43.13。 抗CA125/抗T细胞表面因子双特异性抗体通过与卵巢癌细胞表 面CA125 抗原结合， 继而与T细胞表面因子识别诱导T细胞， 产生T细胞针对肿瘤组织的细胞毒作用， 将病灶杀灭。 除此之外， 该疗法还能激发机体自身产生和维持较长时间的主动免疫状态。 该 方法虽然制备方式多样且产量稳定， 但是仍有较多问题亟待解决， 比如详细的体内药物代 谢动力学特征尚不明确， 预判其体内应用剂量和激活T淋巴反应后细胞毒作用程度较困难； 制备工艺人源化水平较低且毒副反应较明显； BsAb、 肿瘤及T淋巴细胞的特异 性和亲和力方 面均需进一步提高； 抗体Fc片段功能仍需改良等。 而鼠源性单克隆抗体B43.13则通过结合 CA125抗原形成免疫复合物， 启动经典的独特型免疫应答。 其作用机制为人源抗鼠抗体激活 抗独特型链式反应， 进而引起针对CA125的多克隆抗体体液免疫应答。 此免疫应答疗法耐受 性好， 无不良反应或非依从等暂停用药情况， 但无法始终保持人体对肿瘤细胞的敏感应答 状态， 亦不能克服肿瘤 免疫逃逸机制 。 放射性元素与抗肿瘤药物靶向性诱导技术是另外一 种CA125单克隆抗体治疗技术。 卵巢癌肿瘤细胞减灭术后， 残留癌细胞仍在腹腔内种植。 一 般情形下， 这类种植细胞或细胞簇临床不易 发现， 化疗耐药率高， 但其在放射免疫破坏下却 相当脆弱。 基于该特点， 卵巢癌放射免疫疗法发展迅猛。 目前的放射免疫疗法主要选择含抗 CA125表位的鼠源性单克隆抗体， 同位素标记后， 靶向定位及放疗。 多项 试验证实， 放射元素 标记后， CA125单克隆抗体与其抗原的亲和性并不减弱。 然而， 传统的单克隆抗体直接放射说　明　书 1/13 页 3 CN 114106184 A 3