(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111494769.X (22)申请日 2021.12.08 (71)申请人 南通市肿瘤医院 地址 226361 江苏省南 通市通州区平潮镇 通扬北路3 0号 (72)发明人 钱红燕　郭显林　张素青　沈爱国　 (74)专利代理 机构 南京申云知识产权代理事务 所(普通合伙) 32274 代理人 邱兴天 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/867(2006.01) A61K 31/713(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01)A61P 15/14(2006.01) (54)发明名称 干扰U2AF2基因的shRNA及其在制备抗三阴 性乳腺癌药物中的应用 (57)摘要 本发明公开了干扰U2AF2基因的shRNA及其 在制备抗三阴性乳腺癌药物中的应用， 属于生物 医药技术领域。 本发明通过实验确定U2AF2在三 阴性乳腺癌组织中的高表达水平， 为乳腺癌的靶 向治疗提供了作用靶点， 通过设计靶向抑制 U2AF2基因的siRNA序列、 以及相应的siRNA表达 质粒和shRNA慢病毒， 高效抑制U2AF2在人三阴性 乳腺癌细胞耐药细胞中的表达， 并显著增强该细 胞对化疗药物 紫杉醇的敏感性。 本发 明对于制备 抑制三阴性乳腺癌细胞耐药的药物具有重大意 义。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图4页 CN 114292844 A 2022.04.08 CN 114292844 A 1.一种干扰U2 AF2基因的shRNA， 其特 征在于， 所述shRNA含有靶点序列为： 5′ ‑CGCCTTCTGTGAGTACGTG GA‑3′。 2.根据权利要求1所述的干扰U2 AF2基因的shRNA， 其特 征在于， 其核酸序列如下： 正义链： 5′ ‑CcggcgCCTTCTGTGAGTACGTG GACTCGAGTC CACGTACTCACAGA AGGCGTTTTTg‑3′； 反义链： 5′ ‑GATCCAAAAAcgCCTTCTGTGAGTACGTG GACTCGAGTC CACGTACTCACAGA AGGCG‑3′。 3.含有权利要求1或2所述的干扰U2 AF2基因的shRNA的载体。 4.根据权利要求3所述的载体， 其特 征在于， 所述的载体是GV 298。 5.一种重组慢病毒， 其特征在于， 所述重组慢病毒含有编码权利要求1或2所述干扰 U2AF2基因的shRNA的核酸序列。 6.权利要求1或2所述干扰U2AF2基因的shRNA或权利要求3或4所述的含有干扰U2AF2基 因的shRNA的载体或权利要求5所述的重组慢病毒在制备抗 三阴性乳腺癌药物中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述的抗三阴性乳腺癌药物是提高三阴性 乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的药物。 8.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述的抗三阴性乳腺癌药物是抑制三阴性 乳腺癌细胞侵 袭能力的药物。 9.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述的抗三阴性乳腺癌药物是抑制三阴性 乳腺癌细胞迁移能力的药物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114292844 A 2干扰U2AF2基因的s hRNA及其在制备抗 三阴性乳腺癌药物中的 应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 更具体地说， 涉及一种干扰U2AF2基因的shRNA及 其在制备抗 三阴性乳腺癌药物中的应用。 背景技术 [0002]2020年最新癌症数据显示乳腺癌已成为全球第一大癌， 且是女性癌症死亡的第一 大原因。 尽管近年来乳腺癌 综合治疗已取得了进展， 但是转移和复发仍然是提高患者生存 率的主要障碍， 尤其是在预后较差的三阴性乳腺癌(Triple ‑negative  breast cancer， TNBC)中显得尤为突出。 T NBC约占乳腺癌的15％ ‑20％， 因缺乏ER、 PR及HER ‑2受体， 导致内分 泌治疗及靶向治疗无法进行， 化疗仍是最主要的治疗手段。 但棘手的是仅有20％的TNBC患 者对标准化疗方案敏感， 且相当一部 分患者极易出现化疗耐药。 因此， 靶向TNBC化疗耐药的 关键基因是提高患者 生存率的重要举措。 [0003]可变剪切调节因子U2AF2(又称为U2AF65)， 分子量为65KD， 在选择性剪切过程中调 节U2 snRNP与前mRNA结合。 可变剪接的错误调节与肿瘤的发生发展密切相关， 比如U2AF2高 表达， 与肺癌、 肝癌的不良预后呈正相关。 但U2AF2在乳腺癌尤其是在三阴性乳腺癌中的表 达及功能尚未 见任何报道。 [0004]目前研究报道的抑制U2AF2基因的方法仅有基因敲除， 但该方法研究周期长、 对技 术条件的要求高且难以应用于临床治疗， 因而存在明显的局限性。 核糖核酸干扰(RNA   interference， RNAi)是近年来广泛应用的一种基因沉默技术， 其通过一种特定的由21个碱 基组成的小干扰核糖核酸(short  interfering  RNA， siRNA)， 可简便、 高效、 特异地阻断体 内特定基因的表达， 使细胞表现出相应基因表型的缺 失， 从而在基因功能研究、 肿瘤的基因 治疗及新药的研究与开发等方面得到了较多的应用。 但由于 siRNA片段的半衰期过短， 体外 合成的siRNA片段转移到细胞内后， 其发挥出的基因抑制作用一般是很短暂的。 因此， 临床 研究中一般采取事先在体外构建能够表达siRNA片段的载体， 再将载体转移至细胞内使其 表达出siRNA片段的策 略。 目前常用的载体包括逆转录病毒、 腺病毒和慢病毒。 慢病毒表达 载体相对于其它表达载体， 具有免疫原性低、 感染效率高、 感染时效长、 感染效果稳定且能 感染分裂相和非分裂相细胞等优点。 目前， 慢病毒载体已发展到了临床实验阶段， 成为肿瘤 治疗领域中应用技 术研发的强有力手段。 发明内容 [0005]针对现有技术存在的上述问题， 本发明所要解决的技术问题在于提供干扰U2AF2 基因的shRNA， 能有效地干扰U2AF2基因在细胞中的表达。 本发明所要解决的另一技术 问题 在于提供干扰U2 AF2基因的shRNA在制备抗 三阴性乳腺癌药物中的应用。 [0006]为了解决上述 技术问题， 本发明所采用的技 术方案如下： [0007]一种干扰U2 AF2基因的shRNA， 含有靶点序列为：说　明　书 1/7 页 3 CN 114292844 A 3