(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111516919.2 (22)申请日 2021.12.13 (66)本国优先权数据 202110410466.9 2021.04.16 CN (71)申请人 南京北恒生物科技有限公司 地址 210061 江苏省南京市江北新区探 秘 路73号树屋十六栋B1-2 (72)发明人 邢芸　任江涛　贺小宏　王延宾　 韩露　 (74)专利代理 机构 苏州创元专利商标事务所有 限公司 3210 3 专利代理师 范晴 (51)Int.Cl. C12N 5/10(2006.01) C12N 15/62(2006.01)C12N 15/867(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61K 45/06(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 33/00(2006.01) (54)发明名称 工程化免疫细胞及其用途 (57)摘要 本发明涉及一种工程化免疫细胞， 其表达 (i)特异性识别抗原的细胞表面分子， 和(ii)外 源性的XCL2和/或XCL1。 本发明还提供了该工程 化免疫细胞在治疗癌症、 感染或自身免疫性疾病 中的用途。 与传统的工程化免疫细胞细胞相比， 本发明的工程化免疫细胞具有显著提高的肿瘤 杀伤活性。 权利要求书2页 说明书18页 序列表14页 附图4页 CN 115216449 A 2022.10.21 CN 115216449 A 1.一种工程化免疫细胞， 其表达(i)特异性识别抗原的细胞表面分子， 和(ii)外源性的 XCL2和/或XCL1基因。 2.权利要求1所述的工程化免疫细胞， 其中所述特异性识别抗原的细胞表面分子是嵌 合抗原受体或T细胞受体。 3.权利要求2所述的工程化免疫细胞， 其中所述特异性识别抗原的细胞表面分子是包 含以下的嵌合 抗原受体： 抗原结合区、 跨膜结构域、 共刺激结构域和胞内信号传导结构域。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述XCL1基因与SEQ  ID NO： 23或 25所示的核酸序列具有至少90％同一性， 或者所述XCL1基因编码的多肽与SEQ  ID NO： 24或 26所示的氨基酸序列具有至少90％同一性， 其中所述XCL2 基因与SEQ  ID NO： 31所示的核酸 序列具有至少90％同一性， 或者所述XCL2基因编码的多肽与SEQ  ID NO： 32所示的氨基酸序 列具有至少90％同一 性。 5.权利要求1 ‑4任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述免疫细胞选自T细胞、 巨噬细 胞、 树突状细胞、 单核细胞、 NK细胞、 或NKT细胞。 6.权利要求5所述的工程化免疫细 胞， 其中所述T细 胞是CD4+/CD8+T细胞、 CD4+辅助T细 胞、 CD8+T细胞、 肿瘤浸润细胞、 记忆T细胞、 幼稚T细胞、 CD4 ‑CD8‑T细胞、 调节性T细胞、 γδ ‑T 细胞或α β ‑T细胞。 7.权利要求3 ‑6任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述抗原结合区选自IgG、 Fab、 Fab'、 F(ab')2、 Fd、 Fd ′、 Fv、 scFv、 sdFv、 线性抗体、 单结构域抗体、 纳米抗体、 双体、 anticalin和DARPI N抗原。 8.权利要求3所述的工程化免疫细胞， 其中所述抗原抗原结合区与选自以下的靶标结 合： CD7、 CD2、 CD5、 CD3、 CD 73、 CD47、 VEGF、 GUCY2C、 EGP40、 EGP ‑2、 CD133、 IFNAR1、 DLL3、 kappa 轻链、 TIM3、 CD70、 TSHR、 CD19、 CD123、 CD22、 BAFF ‑R、 CD30、 CD171、 CLL ‑1、 CD33、 EGFRvIII、 GD2、 GD3、 BCMA、 GPRC5D、 Tn抗原、 PSMA、 ROR1、 FLT3、 FAP、 TAG72、 CD38、 CD44v6、 CEA、 EPCAM、 B7H3、 KIT、 IL ‑13Ra2、 间皮素、 IL ‑l lRa、 PSCA、 PRSS21、 VEGFR2、 LewisY、 CD24、 PDGFR ‑β、 SSEA‑4、 CD20、 AFP、 Folate受体α、 ERBB2(Her2/neu)、 MUC1、 EGFR、 CS1、 CD138、 NCAM、 Claudin18.2、 Prostase、 PAP、 ELF2M、 Ephrin  B2、 IGF‑I受体、 CAIX、 LMP2、 gploo、 bcr ‑abl、 酪 氨酸酶、 EphA2、 Fucosyl  GMl、 sLe、 GM3、 TGS5、 HMWMAA、 o ‑乙酰基‑GD2、 Folate受体β、 TEM1/ CD248、 TEM7 R、 CLDN6、 GPRC5D、 CXORF61、 CD97、 CD  179a、 ALK、 多聚 唾液酸、 PLAC1、 GloboH、 NY ‑ BR‑1、 UPK2、 HAVCR1、 ADRB3、 PANX3、 GPR20、 LY6K、 OR51E2、 TARP、 WT1、 NY ‑ESO‑1、 LAGE‑la、 MAGE‑A1、 豆荚蛋白、 HPV  E6、 E7、 MAGE  Al、 ETV6‑AML、 精子蛋白17、 XAGE1、 Tie  2、 MAD‑CT‑1、 MAD‑CT‑2、 Fos相关抗原1、 p53、 p53突变体、 前列腺特异性蛋白、 存活 蛋白和端粒酶、 PCTA ‑l/ Galectin  8、 MelanA/MARTl、 Ras突变体、 hTERT、 肉瘤易位断点、 ML ‑IAP、 TMPRSS2  ETS融合基 因、 NA17、 PAX3、 雄激素受体、 Cyclin  Bl、 MYCN、 RhoC、 TRP ‑2、 CYP1B 1、 BORIS、 SART3、 PAX5、 OY‑TES 1、 LCK、 AKAP ‑4、 SSX2、 RAGE ‑1、 人端粒酶逆转录酶、 RU1、 RU2、 肠道羧酸酯酶、 mut   hsp70‑2、 CD79a、 CD79b、 CD72、 LAIR1、 FCAR、 LILRA2、 CD300LF、 CLEC12A、 BST2、 EMR2、 LY75、 GPC3、 FCRL5、 IGL L1、 PD1、 PDL1、 PDL2、 TGFβ 、 APRI L、 NKG2D和它 们的任意组合。 9.权利要求8所述的工程 化免疫细胞， 其中所述 抗原抗原结合区与CD19或 Claudin18.2结合。 10.权利要求3 ‑8任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述跨膜结构域选自 以下蛋白质权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115216449 A 2的跨膜结构域： TCRα 链、 TCRβ 链、 TCRγ链、 TCRδ链、 CD3ζ亚基、 CD3ε亚基、 CD3γ亚基、 CD3δ亚 基、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8α、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD28、 CD37、 CD64、 CD80、 CD86、 CD134、 CD137 和CD154。 11.权利要求3 ‑9任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述胞内信号传导结构域选自以 下蛋白的信号传导结构域： FcRγ、 FcRβ、 CD3γ、 CD3δ、 CD3ε、 CD3ζ、 CD22、 CD79a、 CD79b和 CD66d。 12.权利要求3 ‑10任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述共刺激结构域是一个或多 个选自以下蛋白质的共刺激信号传导结构域： TLR1、 TLR2、 TLR3、 TLR4、 TLR5、 TLR6、 TLR7、 TLR8、 TLR9、 TLR10、 CARD11、 CD2、 CD7、 CD8、 CD18、 CD27、 CD28、 CD30、 CD40、 CD54、 CD83、 CD134 (OX40)、 CD137(4 ‑1BB)、 CD270(HVEM)、 CD272(BTLA)、 CD276(B7 ‑H3)、 CD278(ICOS)、 CD357 (GITR)、 DAP10、 DAP12、 LAT、 NKG2C、 SLP76、 P D‑1、 LIGHT、 TRIM、 ZAP70以及它 们的组合。 13.权利要求1 ‑11任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述免疫细胞还包含至少一种 失活基因， 其选自以下： CD52、 GR、 TCRα、 TCRβ、 CD3γ、 CD3δ、 CD3ε、 CD247ζ、 HLA ‑I、 HLA‑II、 B2M、 PD1、 CTLA‑4、 LAG3和TIM 3。 14.权利要求1‑12任一项所述的工程化免疫细 胞， 其中所述XCL2和/或XCL1基因的表达 是条件型表达 。 15.权利要求13所述的工程化免疫细胞， 其中所述XCL2和/或XCL1基因与 诱导型或组织 特异性启动子可操作连接从而被条件型表达 。 16.权利要求1‑14任一项所述的工程化免疫细 胞， 其中所述XCL2和/或XCL1基因与定位 结构域可操作连接 。 17.一种核酸分子， 其包含： (i)编码特异性识别抗原的细胞表面分子的核酸序列， 和 (ii)编码XCL2和/或XCL1的核酸序列。 18.权