(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111444763.1 (22)申请日 2021.11.30 (71)申请人 苏州大学 地址 215008 江苏省苏州市相城区济学路8 号 (72)发明人 李杨欣　刘冯　沈振亚　张瑜　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 常亮 (51)Int.Cl. A61K 35/28(2015.01) C12N 5/0775(2010.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 外泌体在胸主动脉夹层/动脉瘤中的作用 (57)摘要 本发明涉及生物医学领域， 特别涉及外泌体 在胸主动脉夹层/动脉瘤中的作用。 正常小鼠组 在30天内的生存率是100％， 使用BAPN药物诱导 小鼠建立主动脉夹层/动脉瘤组的生存率在第三 周初时开始降低， 到实验周期4周时， 总体生存率 维持在50％， 而在此基础上， 注射外泌体组， 我们 可以看到小鼠生存率在第三周后略微降低， 到实 验周期4周时， 生存率维持在70％。 由以上数据， 我们可以得出注射外泌体后， 显著延缓了胸主动 脉夹层/动脉瘤的发生。 权利要求书1页 说明书9页 附图3页 CN 114099545 A 2022.03.01 CN 114099545 A 1.外泌体在制备 预防、 延缓和/或治疗胸主动脉夹层/动脉瘤的药物或制剂中的应用。 2.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述外泌体的施用方式为内眦静脉施用， 每 次施用剂量10 0 μL， 每周注射3次。 3.如权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述胸主动脉夹层/动脉瘤动物模型的诱导 剂包括β‑氨基丙腈(BAPN)。 4.如权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述胸主动脉夹层/动脉瘤动物模型的构建 方法中， 第一周和第二周BAPN浓度为6mg/mL， 第三周和第四周BAPN浓度增大至8mg/mL。 5.如如权利要求1至4任一项所述的应用， 其特征在于， 所述外泌体的构建方法包括如 下步骤： 步骤1： 将处于对数生长期、 生长状态良好的UMSC细胞， 与胎牛血清混合后 离心， 去除先 前存在于血清 中的外泌体， 使用含有10％不含外泌体胎牛血清的α ‑MEM培养基培养48h， 待 细胞密度达 到90％时收集培 养基的上清， 传代； 步骤2： 取步骤1收集的所述上清， 离心， 除去死的细胞和碎片， 收集上清； 步骤3： 取步骤2收集的所述上清， 与外泌体分离试剂 混匀后4℃条件下抽提24h， 获得抽 提液； 步骤4： 取步骤3获得的抽提液离心， 收集沉淀， 经PBS重悬， 测定外泌体的浓度； 将测好 浓度的外泌体置 于‑80℃超低温保存。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 步骤1中所述离心具体为： 以110000g的速度 离心7h； 步骤2中所述离心具体为： 以20 00g的速度离心3 0min； 步骤4中所述离心具体为： 4℃， 以13 000g的速度离心1h 。 7.如权利要求5或6所述的应用， 其特征在于， 步骤3中所述外泌体分离试剂包括 PEG4000； 所述外泌体分离试剂与所述上清的体积比为1： 2。 8.预防、 延缓和/或治疗胸主动脉夹层/动脉瘤的药物或制剂， 其特征在于， 包括外泌体 和药学上可接受的辅料； 所述外泌体如权利要求5～7任一项所述应用中所述构建方法制得。 9.预防、 延缓和/或治疗胸主动脉夹层/动脉瘤的药物组合， 其特征在于， 包括外泌体、 任意其他有效成分和药 学上可接受的辅料。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114099545 A 2外泌体在胸主动脉夹层/ 动脉瘤中的作用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学 领域， 特别涉及外泌体在胸主动脉夹层/动脉瘤中的作用。 背景技术 [0002]胸主动脉夹层/动脉瘤(TAAD)是一种侵袭性血管疾病， 需要早期诊断和有效治疗。 但是， 由于特定的血管结构和病变部位狭 窄， 目前尚无有效的治疗TAAD的方法。 TAAD是指主 动脉壁全层发生永久性扩张， 管腔直径超过正常50％形成主动脉瘤， 随着血流的冲击， 主动 脉内壁发生损伤， 高速血流通过撕裂内膜形成夹层。 胸主动脉夹层/动脉瘤的年发病率约为 7～9例/10万， 破裂后若未及时救治， 48h时内病死率高达50％～68％， 3个月内可达90％， 10 年病死率仍为20％。 目前临床上急性TAAD主要采用外科开胸 手术或血管内修复治疗， 但手 术期病死率高， 术后并发症多、 复发率高。 因此， 针对TAAD发病机制， 寻找 一种可在 疾病早期 针对病理学改变进行精准靶向治疗的药物尤为重要。 发明内容 [0003]有鉴于此， 本 发明提供外泌体可以延缓动脉夹层/动脉瘤的发生。 外泌体可以通过 不开胸， 以微创的方式延缓胸主动脉夹层/动脉瘤的发生， 提高了存活率。 [0004]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0005]本发明提供了外泌体在制备预防、 延缓和/或治疗胸主动脉夹层/动脉瘤的药物或 制剂中的应用。 [0006]在本发明的一些具体实施方案中， 所述外泌体的施用方式为内眦静脉施用， 每次 施用剂量10 0 μL， 每周注射3次。 [0007]在本发明的一些具体实施方案中， 所述胸主动脉夹层/动脉瘤动物模型的诱导剂 包括β‑氨基丙腈(BAPN)。 [0008]在本发明的一些具体实施方案中， 所述胸主动脉夹层/动脉瘤动物模型的构建方 法中， 第一周和第二周BAPN浓度为6mg/mL， 第三周和第四周BAPN浓度增大至8mg/mL。 [0009]在本发明的一些 具体实施方案中， 所述外泌体的构建方法包括如下步骤： [0010]步骤1： 将处于对数生长期、 生长状态良好的UMSC细胞， 与胎牛血清混合后离心， 去 除先前存在于血清中的外泌体， 使用含有10％不含外泌体胎牛血清的α ‑MEM培养基培养 48h， 待细胞密度达 到90％时收集培 养基的上清， 传代； [0011]步骤2： 取步骤1收集的所述上清， 离心， 除去死的细胞和碎片， 收集上清； [0012]步骤3： 取步骤2收集的所述上清， 与外泌体分离试剂混匀后4℃条件下抽提24h， 获 得抽提液； [0013]步骤4： 取步骤3获得的抽提液离心， 收集沉淀， 经PBS重悬， 测定外泌体的浓度； 将 测好浓度的外泌体置 于‑80℃超低温保存。 [0014]在本发明的一些具体实施方案中， 步骤1中所述离心具体为： 以110000g的速度离 心7h；说　明　书 1/9 页 3 CN 114099545 A 3