(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111498463.1 (22)申请日 2021.12.09 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114369170 A (43)申请公布日 2022.04.19 (73)专利权人 陕西师范大学 地址 710062 陕西省西安市长安 南路199号 (72)发明人 张磊　张研宇　解源　曹庆泽　 辛乐乐　张淑嫱　 (74)专利代理 机构 西安智邦专利商标代理有限 公司 6121 1 专利代理师 汪海艳 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/70(2006.01)C12N 1/21(2006.01) A61K 31/4188(2006.01) A61K 38/16(2006.01) A61K 47/64(2017.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (56)对比文件 CN 103145852 A,2013.0 6.12 CN 111875676 A,2020.1 1.03 US 6602689 B1,20 03.08.05 审查员 冯晓亮 (54)发明名称 基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞 瘤治疗性融合蛋白、 疫苗及其制备方法与用途 (57)摘要 本发明涉及一种基于靶向多效生长因子的 神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白、 疫苗及其制 备方法与用途， 由外源蛋白和多效生长因子融合 形成的融合蛋白TRX ‑PTN； 利用此融合蛋白TRX ‑ PTN， 打破机体免疫耐受， 产生抗多效生长因子的 抗体， 启动免疫反应， 中和肿瘤中的多效生长因 子。 使得肿瘤生长得到抑制， 同时可以促使肿瘤 血管正常化， 提高药物递送效率， 降低 副作用。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图6页 CN 114369170 B 2022.09.23 CN 114369170 B 1.一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白， 其特征在于： 为 由来自于大肠杆菌的外源蛋白TRX和多效生长因子PTN融合形成的融合蛋白TRX ‑PTN； 由pET21a原核载体表达系统表达， 利用融合蛋白C端的His标签进行镍柱纯化； 氨基酸序列如下： 2.一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性疫苗， 其特征在于： 含有权 利要求1所述基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白。 3.一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白或疫苗在制备治 疗神经胶质母细胞瘤药品方面的应用， 所述基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治 疗性融合蛋白为权利要求1所述融合蛋白， 所述基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞 瘤治疗性疫苗 为权利要求2所述疫苗。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞 瘤治疗性融合蛋白或疫苗在制备促进神经胶质母细胞瘤血 管正常化药品中的应用。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞 瘤治疗性融合蛋白或疫苗在制备减低神经胶质母细胞瘤肿瘤血 管密度药品中的应用。 6.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞 瘤治疗性融合蛋白或疫苗在制备抑制神经胶质母细胞瘤血 管生成药品中的应用。 7.一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白或疫苗与替莫唑 胺联用在制备治疗神经胶质母细胞瘤药品方面的应用； 所述基于靶向多效生长因子的神经 胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白为权利要求1所述融合蛋白， 所述基于靶向多效生长因子的 神经胶质母细胞瘤治疗性疫苗 为权利要求2所述疫苗。 8.一种权利要求1所述基于靶向多 效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白的 制备方法， 其特 征在于： 包括以下步骤：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114369170 B 2步骤1、 重组表达载体的制备； 步骤1.1、 合成融合蛋白TRX ‑PTN基因序列； 步骤1.2、 制备重组表达载体pET21a ‑TRX‑PTN； 步骤2、 制备重组菌pET21a ‑TRX‑PTN/Rosseta； 将步骤1制备的pET21a ‑TRX‑PTN重组载体导入大肠杆菌Rosseta(DE3)中， 得到重组菌 pET21a‑TRX‑PTN/Rosseta； 步骤3、 制备融合蛋白TRX ‑PTN； 步骤3.1、 通过培 养得到pET21a ‑TRX‑PTN/Rosseta菌体； 步骤3.2、 将pET21a ‑TRX‑PTN/Rosseta菌体超声裂解得到融合蛋白TRX ‑PTN的上清液； 步骤3.3、 将融合蛋白TRX ‑PTN的上清液利用镍柱纯化， 后处 理得到融合蛋白TRX ‑PTN。 9.一种权利要求2所述基于靶向多 效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性疫苗的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤1、 利用权利要求8所述的方法制备基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治 疗性融合蛋白； 步骤2、 制备疫苗制剂； 以Montanide ISA720为溶剂， 每毫升溶剂加入1mg 融合蛋白。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114369170 B 3