(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111566838.3 (22)申请日 2021.12.20 (71)申请人 四川大学华西医院 地址 610041 四川省成 都市武侯区国学巷 37号 (72)发明人 赵旭东　魏文文　 (74)专利代理 机构 上海一平知识产权代理有限 公司 3126 6 专利代理师 徐迅　崔佳佳 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 基于SECTM1构建的嵌合抗原受体免疫细胞 制备及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种基于SECTM1构建的嵌合 抗原受体免疫细胞制备及其应用。 具体地， 本发 明提供了一种基于SECTM1改造的嵌合抗原受体 (CAR)， 所述的CAR含有一胞外结合域， 所述的胞 外结合域能够特异性地靶向SECTM1受体(CD7)。 本发明的CAR免疫细胞具有高特异性和靶点亲和 力， 不借助基因编辑或CD7阻断分子等技术降低T 细胞表面CD7表达即可有效扩增靶向CD7的CAR ‑T 细胞， 所获CAR‑T细胞主要是CD7阴性或低表 达的 T细胞、 含有较多的记忆T细胞， 因此在体内可具 有更长久的高效杀伤能力。 根据该CAR ‑T的特性 可合理推测其也可清除CAR ‑T制备过程中的肿瘤 细胞污染。 经在非人灵长类中测试具有较高安全 性。 权利要求书1页 说明书22页 序列表9页 附图8页 CN 114716564 A 2022.07.08 CN 114716564 A 1.一种嵌合抗原受体(CA R)， 其特征在于， 所述的CAR含有一胞外结合域， 并且所述的胞 外结合域包括基于SEQ  ID NO:1所示氨基酸序列的SE CTM1或其片段的结构， 并且， 所述的胞外结合 域能够特异性 地与SECTM1受体以配 体受体方式结合。 2.如权利 要求1所述的CA R， 其特征在于， 所述的胞外结合域包括SECTM1蛋白或其片段， 所述的SECTM1蛋白或其片段具有如SEQ  ID NO:1所示的氨基酸序列， 或具有如SEQ  ID NO:1 所示序列的第1至145位(较佳地 为29至145位)的氨基酸序列。 3.如权利要求1或2所述的CAR， 其特 征在于， 所述CAR的结构如下式I所示： L‑EB‑H‑TM‑C‑CD3ζ‑RP   (I) 式中， 各“‑”独立地为连接肽或肽键； L是无或信号肽序列； EB是胞外结合 域,所述胞外结合 域特异性 地结合于SE CTM1受体； H是无或铰链区； TM是跨膜结构域； C是无或共刺激信号分子； CD3ζ 是源于 CD3ζ 的胞浆信号传导序列； RP是无或报告蛋白。 4.一种核酸分子， 其特 征在于， 所述核酸分子编码如权利要求1所述的嵌合 抗原受体。 5.一种载体， 其特 征在于， 所述的载体含有如权利要求 4所述的核酸分子 。 6.一种宿主细胞， 其特征在于， 所述的宿主细胞含有如权利要求5所述的载体或染色体 中整合有外源的如权利要求 4所述的核酸分子或表达如权利要求1所述的CAR。 7.一种工程化免疫细胞， 其特征在于， 所述的免疫细胞含有如权利要求5所述的载体或 染色体中整合有外源的如权利要求 4所述的核酸分子或表达如权利要求1所述的CAR。 8.一种制备如权利要求7所述的工程化免疫细胞的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 将如权利要求4所述的核酸分子或如权利要求5所述的载体转导入免疫细胞内， 从而获得所 述工程化免疫细胞。 9.一种药物 组合物， 其特征在于， 所述药物 组合物含有如权利要求1所述的CAR、 如权利 要求4所述的核酸分子、 如权利要求5所述的载体、 如权利要求6所述的宿 主细胞， 和/或如权 利要求7所述的工程 化免疫细胞， 以及药 学上可接受的载体、 稀释剂或赋 形剂。 10.一种如权利要求1所述的CAR、 如权利要求4所述的核酸分子、 如权利要求5所述的载 体、 或如权利要求6所述的宿主细胞， 和 /或如权利要求7所述的工程化免疫细胞的用途， 其 特征在于， 用于制备 预防和/或治疗SE CTM1受体异常表达相关疾病的药物或制剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114716564 A 2基于SECTM1构建的嵌合 抗原受体免疫细胞制备及其应用 技术领域 [0001]本发明属于肿瘤免疫治疗生物医药技术领域， 涉及特异性嵌合抗原受体免  疫细 胞， 具体涉及一种特异性靶向CD7的一种CAR， 其修饰地免疫应答细胞， 及  其制备方法和应 用。 背景技术 [0002]目前癌症被认为是世界上各个国家的主要死亡原因及延长人类寿命的主  要障 碍。 根据世界卫生组织(WHO)2019年的统计， 在183个国家中年龄为70岁之  前的人群中， 癌 症是第一或第二大死亡原因， 严重威胁着人类的健康。 到2020  年， 全球估计有1930万新发 病例和1000万例癌症患者死亡， 根据目前癌症的发  病率估计到2040年， 全球将会 出现2840 万例癌症 新发病例(包括基底细胞癌除  外的非黑色素瘤皮肤癌)， 比2020年增加47％， 总体 而言， 世界范围内癌症的发  病率和死亡率负 担正在迅速增长。 据 2020年全球肿瘤数据统计 显示:血液病包  括白血病， 霍 奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤， 将会有1,101,958新发病例， 占 到肿瘤新发病例的5.7％； 594,763死亡病例， 占到癌症死亡病例的5.9 ％， 从统 计数据 来看， 血液病依然严重威胁着人类的健康。 [0003]随着医学技术的发展， 人类的寿命不断延长， 在肿瘤的治疗上取得了很大  的进 展， 现在， 手术， 化疗， 放疗， 生物治疗等 综合治疗手段的应用， 使 得癌 症患者的生存期不断 延长， 生存质量也取得了很大 的提升。 除了常规治疗手段，  免疫治疗也成为了治疗癌症的 临床重要手段， 越来越多的免疫治疗药物被批准  用于临床治疗， 如针对免疫检查点抑制剂 的PD1,PDL1单克隆抗体以及CAR ‑T细 胞治疗。 嵌合抗原抗体受体(Chimeric  Antigen  Receptor ‑T cell,CAR ‑T)T细 胞是指经基因修饰后， 能以MHC非限制性方式识别特定目的 抗原， 并且持续活  化扩增的T细胞。 其主要结构包括三类， 即胞外的ScFv识别结构域， 此区 域用 于对肿瘤细胞上的靶点进行识别结合； 铰链区和跨膜结构域， 主要来源于CD8  或 CD28， 将CAR锚定于细胞膜， 且连接胞外识别域与胞内信号； 胞内域， 是激  活域， 其数量和长 度差异会影响CAR ‑T的抗肿瘤效果， 目前常用的是一个激活  域加一个或多个共刺激结构 域， CD3ζ是CAR胞内部分 的常见特征， 其能启动信  号以驱动T细胞的杀伤作用， 而共刺激域 主要来源于CD28受体家族或者TNF受体  家族如4‑1BB,OX40或CD27， 通过增强细胞因子分泌 或者促进增殖及持久性也提  高CAR‑T的杀伤效果。 正常T细胞依赖于T细胞表面受体(T   cell Receptor ,TCR)  及肿瘤细胞表面的 主要组织相容复合物 (Major   Histocompatibility  complex.  MHC)结合的方式识别肿瘤细胞,而CAR ‑T细胞以不依赖于 MHC的方式只依赖于  CAR这个结构来识别肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原(Tumor   Associated Antigen， TA A)， 具有CAR对抗原 识别的特异性及T细胞的杀伤特性。 [0004]过去这些年来， 随着基因编辑， 免疫及其他学科的综合快速发展， CAR ‑T 细胞治疗 成为治疗 血液病一个新的并取得不错疗效的治疗手段。 CAR ‑T治疗恶 性肿瘤仍然 是目前的 研究热点， 自1986年首次用肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)治疗  肿瘤， 到1993年第一代CAR的研 发， 直至2017年FDA首次批准CAR ‑T用于治疗复  发/难治性急性淋巴细胞白血病， CAR ‑T治疗说　明　书 1/22 页 3 CN 114716564 A 3