(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110746762.6 (22)申请日 2021.07.01 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113546056 A (43)申请公布日 2021.10.26 (73)专利权人 温州医科 大学附属第二医院(温 州医科大学附属育 英儿童医院) 地址 325000 浙江省温州市鹿城区学院西 路109号 (72)发明人 陈一杰　陈梦纯　夏伟梁　 诸葛德力　诸海燕　赵应征　姜琦　 (74)专利代理 机构 温州瓯越专利代理有限公司 33211 专利代理师 吴继道 (51)Int.Cl. A61K 9/50(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 47/64(2017.01)A61K 31/704(2006.01) A61K 47/69(2017.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61K 47/26(2006.01) (56)对比文件 CN 102764 442 A,2012.1 1.07 WO 9418947 A1,19 94.09.01 李鹏.层层自组装 多功能纳米 基因载体的研 究. 《万方数据》 .201 1,第1-12 9页. Xueyan L iu 等.In vitro and i n vivo evaluati on of liposomes modified w ith polypeptides and red cel l membrane as a novel drug del ivery system for myocardium targeting. 《DRUG DEL IVERY》 .2020,第27 卷(第1 期),第59 9-606页. 审查员 徐玉琴 (54)发明名称 一种针对阿霉素心脏及系统毒性解毒的仿 生纳米保护剂制备方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种针对阿霉素心脏及系统 毒性解毒的仿生纳米保护剂制备方法及应用， 该 制备方法包括如下步骤： 获取DNA与鱼精蛋白 Protamine并混合制备 获得DNA⪻纳米颗粒； 将异 官能团聚乙二醇DSPE ‑PEG2000‑MAL与PCM/KALA 反应制备获得DSPE ‑PEG2000‑PCM/KALA； 将DSPE ‑ PEG2000‑PCM/KALA插入到红细胞膜RBCM表面制 备获得PCM/KALA ‑RBCM； 将RBCM ‑PCM/KALA和DNA ⪻纳米颗粒混合后制备获得DNA ⪻@RBCM‑PCM/ KALA仿生纳米 保护剂。 并将上述制备 获得的仿生 纳米保护剂应用在阿霉素解毒。 本发 明能够克服 现有技术中在针对癌症治疗 过程中对心肌和/或 肝脏留下伤害的问题， 能够减少病人的身体负担。 权利要求书1页 说明书8页 附图14页 CN 113546056 B 2022.09.13 CN 113546056 B 1.一种针对阿霉素心脏及系统毒性解毒的仿生纳米保护剂制备方法， 其特征在于， 包 括如下步骤： 获取DNA与鱼精蛋白Protamine并混合通过超声制备获得DNA&Pro纳米颗粒， 混合的DNA 与鱼精蛋 白Protamine的氮磷比N/P=2， 所采用的DNA以绿色荧光蛋 白质粒为DNA模板， 且为 630bp、 GC含量6 5%； 将异官能团聚乙二醇DSPE ‑PEG2000‑MAL与PCM/KALA均溶于超纯水中， 孵育反应制备获 得DSPE‑PEG2000‑PCM/KALA； 将DSPE‑PEG2000‑PCM/KALA插入到红细胞膜RBC M表面孵育制备获得RBC M  ‑PCM/KALA； 将RBCM‑PCM/KALA和DNA&Pro纳米颗粒混合后利用Extrusion方法制备获得DNA&Pro@ RBCM‑PCM/KALA仿生纳米保护剂； 各个组分比例DNA： Protamine： RBCM:  DSPE‑PEG2000 ‑MAL : PCM/KALA  =6:5:150: 3.75:7.5w/w。 2.根据权利要求1所述的仿生纳米保护剂制备方法， 其特征在于， DNA与鱼精蛋白 Protamine混合后通过超声形成DNA&Pro纳米颗粒， 超声时间为20s。 3.根据权利要求1所述的仿生纳米保护剂制备方法， 其特征在于， 异官能团聚乙二醇 DSPE‑PEG2000‑MAL与PCM/KALA的 比例为1： 2mol/mol， 且均溶于超纯水中， 37℃孵育30 ‑60  min合成DSPE‑PEG2000‑PCM/KALA。 4.根据权利要求1所述的仿生纳米保护剂制备方法， 其特征在于， DSPE ‑PEG2000‑PCM/ KALA与RBCM膜蛋白质量的质量比为1： 20 （w/w） 混合， 在37℃孵育30 ‑60min， 制备获得RBCM ‑ PCM/KALA。 5.根据权利要求1所述的仿生纳米保护剂制 备方法， 其特征在于， 制 备DNA&Pro@RBCM ‑ PCM/KALA是利用的Ext rusion方法所采用的孔径为 400nm。 6.一种根据权利要求1~5任意一项所述的仿生纳米保护剂制备方法制备获得的DNA& Pro@RBCM‑PCM/KALA仿生纳米保护剂在制备对心脏或肝脏中阿霉素解毒的药物中应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113546056 B 2一种针对阿霉素心脏及系统毒性解毒 的仿生纳米保护剂制备 方法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医药技术领域， 具体为一种针对阿霉素心脏及系统毒性解毒的仿 生纳米保护剂制备 方法及应用。 背景技术 [0002]阿霉素(D oxorubicin， DOX)作为一种经典的化疗药物被广泛的应用到不同癌症类 型的治疗。 尽管DOX展现出良好的癌症治疗效果， 但是它的毒副作用(包括心脏毒性、 肝脏毒 性和胃肠道反应)极大地限制了其进一步的临床应用。 众所周知， DOX杀伤癌细胞的主要机 理是与癌细胞中的双链DNA结合抑制细胞核内DNA复制， 诱导细胞凋亡。 另外， DOX能够特异 性的插入到DNA双链的GC碱基对中， 根据该特点， 已经有研究将DOX插入到质粒等双链核酸 中实现核酸与DOX的共递送。 [0003]现有的专利申请号为CN202010284531.3的发明专利公开了一种CREG蛋白用于预 防或治疗阿霉素心肌损伤的医药用途， 根据该专利文本的说明书可知， 该发明是对损伤后 的心肌进 行及时的治疗， 还是会在心肌和/或肝脏留下伤害， 对于病人来说依旧存在较大的 负担。 发明内容 [0004]针对现有技术存在的不足， 本发明的目的在于提供一种针对阿霉素心脏及系统毒 性解毒的仿生纳米保护剂制备方法及应用， 能够克服现有技术中在针对癌症治疗过程中对 心肌和/或肝脏留下伤害的问题， 能够减少病人的身体负担 。 [0005]为实现上述目的， 本发明提供了如下技术方案： 一种针对阿霉素心脏及系统毒性 解毒的仿生纳米保护剂制备 方法， 包括如下步骤： [0006]获取DNA与鱼精蛋白Protami ne并混合制备获得DNA&Pro纳米颗粒； [0007]将异官能团聚乙二醇DSP E‑PEG2000‑MAL与PCM/KALA反应制备获得DSP E‑PEG2000‑ PCM/KALA； [0008]将DSPE‑PEG2000‑PCM/KALA插入到红细胞膜RBC M表面制备获得PC M/KALA‑RBCM； [0009]将RBCM‑PCM/KALA和DNA&Pr o纳米颗粒混合后制备获得DNA&Pro@RBCM ‑PCM/KALA仿 生纳米保护剂。 [0010]作为本发明的优选， RBCM ‑PCM/KALA和DNA&Pro纳米颗粒混合后利用Extrusion方 法制备DNA&Pro@RBC M‑PCM/KALA仿生纳米保护剂。 [0011]作为本发 明的优选， 各个组分比例DNA∶Pr otamine∶ RBCM∶DSPE ‑PEG2000‑MAL∶PCM/ KALA＝6∶ 5∶ 15 0∶ 3.75∶ 7.5(w/w)。 [0012]作为本发明的优选， 所采用的DNA以绿色荧光蛋白质粒为DNA模板， 且为630bp、 GC 含量65％。 [0013]作为本发明的优选， DNA与鱼精蛋白Protamine混合后通过超声形成DNA&Pro纳米说　明　书 1/8 页 3 CN 113546056 B 3