(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110747463.4 (22)申请日 2021.07.01 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113499310 A (43)申请公布日 2021.10.15 (73)专利权人 贵州中医药大学 地址 550025 贵州省贵阳市花溪区花溪大 学城栋青路4号 (72)发明人 冯果　周志容　李玮　刘文　 吴增光　任晨晨　张石宇　 (74)专利代理 机构 贵阳贵知 知识产权代理事务 所(普通合伙) 52115 专利代理师 曾香兰　蒋琳琳 (51)Int.Cl. A61K 9/107(2006.01)A61K 31/37(2006.01) A61K 47/10(2006.01) A61K 47/34(2017.01) A61K 47/54(2017.01) A61K 9/19(2006.01) A61P 35/00(2006.01) G01N 30/02(2006.01) 审查员 屈兴翠 (54)发明名称 一种西瑞香素胶 束及制备方法、 含量检测和 应用 (57)摘要 本发明涉及一种西瑞香素胶束及制备方法、 含量检测和应用， 所述西 瑞香素纳米胶束的制备 选用安全可降解材料PEG ‑PLA， 将西瑞香素制成 聚合物胶束， 以达到增加溶解度、 延长体内作用 时间的目的。 同时以甘草次酸偶联的PEG ‑PLA为 载体， 制备了载有西瑞香素的具有肝癌靶向性的 纳米制剂。 通过对两种载药胶 束进行体外细胞研 究和体内靶向性评价以及初步药效学研究， 证明 西瑞香素纳米胶束药系统的肝靶向递药性能和 抗肿瘤效果， 为今后西瑞香素的体内肝癌靶向性 研究奠定了理论基础， 并为西 瑞香素新剂型和新 型肝癌靶向性制剂的开发提供了新的思路。 权利要求书1页 说明书28页 附图5页 CN 113499310 B 2022.10.18 CN 113499310 B 1.一种西瑞香素胶束， 其特 征在于， 所述胶束的制备 方法为： （1） 精密称取15mgPEG3400 ‑PLA2000放入西林瓶， 加入体积比为2﹕1的乙腈﹕二氯甲烷 混合溶剂6mL， 于磁力搅拌器上搅拌溶解， 再加入1mg西瑞香素， 继续搅拌溶解完全， 将混合 溶液转移至圆底烧瓶， 45℃减压 旋蒸除去 有机试剂， 得透明蓝色 薄膜； （2） 加入预热去离子水10  mL， 65 ℃常压旋转水化30min后转移至烧杯中， 室温搅拌4h， 以功率为90w的避光探头超声6min， 再以3000rpm  离心5min， 取上清液过0.45 µm微孔滤膜， 得西瑞香素胶束溶 液； 所述胶束的制备 方法还可以为： （1） 精密称取1mg以甘草次酸修饰的  GA‑PEG3400‑PLA2000和9mg  PEG3400‑PLA2000 放 入西林瓶， 加入体积比为1： 1的乙腈： 二氯甲烷混合溶剂5mL， 于磁力搅拌器上搅拌溶解， 再 加入1mg西瑞香素， 继续搅拌溶解完全， 将混合溶液转移至圆底烧瓶， 45℃减压旋蒸除去有 机试剂， 得透明蓝色 薄膜; （2） 加入预热去离子水10mL， 65℃常压旋转水化30min后转移至烧杯中， 室温搅拌4h， 以 功率为90w的避光探头超声  6 min， 再以3000  rpm离心5min， 取上清液过  0.45  µm微孔滤 膜， 即得载药胶束溶 液。 2.根据权利要求1所述的西瑞香素胶束在制备治疗抗肿瘤药物方面的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113499310 B 2一种西瑞香 素胶束及制备方 法、 含量检测和应用 技术领域 [0001]本发明属于药物研制和 分析技术领域， 具体涉及一种西瑞香素胶束及制 备方法、 含量检测、 体内外 评价和应用。 背景技术 [0002]肝癌是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一， 其最常见的病理组织学类型是肝 细胞癌(HCC)， 约占全部病例的70％～85％， 其次为肝内胆管细胞癌(ICC)， 约占10～20％。 2018年全球最新癌症数据显示， 肝癌发病率位列恶性肿瘤的第四位， 死亡率居第六位， 年新 发病例和死亡病例数分别达84万和78万， 且发病率呈稳步上升趋势， 给人们带来巨大负担。 寻找有效的癌症药物已成为医药 学界刻不 容缓的使命， 并也 一直在为此努力。 [0003]了哥王Wikstroemia  indica(Linn.C.A.Meyer)始载于 《岭南采药录》 ， 为瑞香科 (Thymelaeaceae)荛花属Wikstroemia  Endl.植物南岭荛花的干燥根或根皮， 性寒、 味苦、 辛、 微温、 有大毒， 归肺、 肝经， 具有清热解毒、 消肿散结、 止痛 等功效。 目前， 从了哥王中分离 得到的80多种化合物可分为10大类： 香豆素类、 木脂素类、 黄酮类、 蒽醌类、 甾族类、 皂苷类、 萜类、 酰胺类、 多糖和挥发油， 此外， 还含有大量的酯、 酮、 烯及醇类化合物 等。 其中西瑞香素 (Daphnoretin)是以醚键结合的双香豆素类衍生物， 化学名为7 ‑羟基‑6‑甲氧基‑3， 7'‑双香 豆素酯， 别称了哥王素， 是了哥王药材的主要成分， 具有抗肿瘤抗病毒、 抗炎、 抗真菌等药 理 作用， 也是民间药物穿王消炎片、 了哥王片等主要成分和相关药品质量的主要考察指标成 分之一。 细胞实验表明西瑞香素对多种肿瘤细胞具有很好的活性， 尤其是对于肝癌细胞 HepG 2具有很好的抑制作用， 并进一步研 究了西瑞香素对HepG  2细胞增殖、 凋亡及细胞周 期的影响， 初步探讨了西瑞香素对肝癌的作用机制。 但是西瑞香素在水中溶解度低， 难以给 药， 在一定程度上限制了其应用。 [0004]综上所述， 西瑞香素作为一种从苗药了哥王中提取到 的有效成分， 在抗肿瘤和抗 病毒的治疗方面具有很好的效果。 为了改善其本身 溶解性差， 体内代谢时间短， 生物利用度 差等问题， 迫切需要寻找合适的材料， 制备成现代新剂型， 方便给药。 聚合物材料PEG ‑PLA (聚乙二醇 ‑聚乳酸共聚物)作为一种药物载体具有很多方面的优势， 亲水的外壳， 能够有效 降低网状内皮系统的吞噬作用， 减少蛋白的吸附， 延长载药胶束在体内血液的循环时间， 以 GA修饰PEG ‑PLA有利于药物的肝靶向蓄积。 目前国内外对西瑞香素的研究主要集中在生物 活性方面， 然而西瑞香素在水中溶解性低， 体内吸收不好， 且靶向性差， 在一定程度上限制 其广泛应用。 另外， 关于西瑞香素的新剂型特别是靶向制剂的开 发还未见其报道。 因此本课 题制备了载西 瑞香素的PEG ‑PLA胶束和具有EPR效应和肝主动 双重靶向的GA ‑PEG‑PLA/PEG‑ PLA‑DAP胶束。 并对胶束制剂进行理化性质表征和 体外细胞研究以及体内组织分布和药效 学研究。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种西瑞香素胶束， 所述胶束由以下份量组成： GA ‑PEG‑PLA 说　明　书 1/28 页 3 CN 113499310 B 3