(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110987162.9 (22)申请日 2021.08.26 (71)申请人 北京大学深圳研究生院 地址 518055 广东省深圳市南 山区西丽 镇 丽水路深圳大学城北京大学深圳研究 生院G306A (72)发明人 曹宇　魏晓懿　刘东　齐学袖　 王雪纯　李书宏　赵丽丽　刘忠　 (74)专利代理 机构 深圳市顺天达专利商标代理 有限公司 4 4217 专利代理师 郭伟刚 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A61P 31/00(2006.01) (54)发明名称 一种抗4-1BB纳米抗体、 编码基因及应用 (57)摘要 本申请公开了一种抗4 ‑1BB纳米抗体、 编码 基因及应用。 该抗4 ‑1BB纳米抗体能够与4 ‑1BB高 效、 特异性地结合， 兼具纳米抗体的优势与免疫 系统共刺激信号转导能力， 由于可以获得完整的 抗体序列， 纳米抗体能够通过体外重组表达从而 高质量、 稳定的生产， 具有广泛的应用前 景。 权利要求书1页 说明书14页 序列表30页 附图22页 CN 114605541 A 2022.06.10 CN 114605541 A 1.一种抗 4‑1BB纳米抗体， 是如下a)或b)的蛋白： a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； b)在序列表中序列1的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且 与特异性识别4 ‑1BB相关的由a)衍生的蛋白质。 2.根据权利要求1所述的抗4 ‑1BB纳米抗体， 其特征在于， 所述由a)衍生的蛋白质为序 列2‑33所示的氨基酸序列组成的蛋白质。 3.权利要求1所述 抗4‑1BB纳米抗体的编码基因。 4.根据权利 要求3所述的编码基因， 其特征在于， 所述编码基因是如下1)或2)或3)的基 因： 1)其核苷酸序列是序列表中序列34； 2)在严格条件下与序列34限定的DNA片段杂 交且编码与特异性识别4 ‑1BB相关蛋白的 DNA分子； 3)与1)或2)的基因具有90％以上的同源性， 且编码与特异性识别4 ‑1BB相关蛋白的DNA 分子。 5.根据权利要求4所述的编码基因， 其特征在于， 2)或3)中的基因， 其核苷酸序列是序 列表中序列3 5‑66。 6.含有权利要求3 ‑5所述编码基因的重组表达载体。 7.包有权利要求3 ‑5所述编码基因的重组菌株。 8.权利要求1或2所述抗4 ‑1BB纳米抗体， 在制备预防或治疗肿瘤、 免疫缺陷疾病和感染 性疾病等药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114605541 A 2一种抗4‑1BB纳米抗体、 编码基因及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医学或生物制药技术领域， 涉及一种抗4 ‑1BB纳米抗体、 编码基因 及应用。 背景技术 [0002]多种证据明确证明， 一定程度的免疫反应常存在于人和动物中。 在癌症和感染性 疾病患者中， 免疫系统的细胞组分能识别突变或者感染细胞表达的抗原， 诸如癌胚抗原的 分化或突变的基因产物(1,2)。 利用免疫调节机制 诸如细胞因子， 细菌产物， 癌症疫苗以及 获得性免疫治疗的疗法等可导致肿瘤在许多患者中的突变(3 ‑5)。 尽管存在这些反应， 免疫 治疗经常不能有效消除突变或者感染细胞。 导致上述失败的原因可分为以下三种主要类 型： (i)免疫细胞的识别受损， 由于抗原的可变表达或I类主要组织相容性复合体(MHC Ⅰ)的 表达降低所导致(6)； (ii)免疫抑制性微环 境， 由免疫抑制细胞分泌抑制性细胞因子(例如， TGF‑β 等)所导致(7)； (iii)由于缺乏共刺激分子在突变或者 感染细胞上的表达而产生的肿 瘤免疫原性差(8)， 其导致不能有效刺激T细胞。 对于抗原识别和免疫效应功能的发挥， 增强 免疫反应的可能策略是通过辅助分子提供共刺激信号来启动和维持抗原特异 性T细胞的持 续性杀伤和监控功能。 [0003]4‑1BB(CD137,Tnsfr9)蛋白是CD8+T细胞等多种免疫细胞上表达的共刺激受体， 属 于TNF受体(TNFR)超家族成员， 由肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)基因编码 。 与其 他TNFR相同， 依赖胞内TRAF超家族蛋 白向下游传递信 号。 4‑1BB蛋白介导的ERK、 NF ‑κB等信 号通路能够促进T细胞， 特别是CD8+T细胞的分化、 增殖、 细胞因子的产生并维持其免疫功能 (9)。 因此4 ‑1BB可作为潜在的肿瘤免疫治疗靶标， 增强T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。 目前 已有4‑1BB的单克隆抗体处于临床试验阶段， 包括Urelumab、 Utomi lumab等。 [0004]1993年， 自然杂志报道了一种存在于羊驼外周血的特殊的天然轻链缺失抗体 (10)， 与传统抗体不同， 这类抗体仅由两条重链组成， 只有一个重链可变区(Variable   Domain of Heavy Chain Antibody， VHH)和两个常规的CH2与CH3区。 经单克隆表达纯化后 的VHH可在体外单独稳定存在， 被称为单域抗体(SdAb)或纳米抗体。 纳米抗体的分子量仅为 15kD， 是传统抗体 分子量的1/10， 但具有完整的抗原识别能力。 由于纳米抗体的结构微小且 与抗原结合能力完整， 因此具有高亲和力、 高特异 性、 强穿透性、 易于改造和表达等优点。 此 外， 由于可以获得完整的抗体序列， 纳米抗体能够通过体外重组表达从而高质量、 稳定的生 产。 [0005]参考文献： [0006]1 .Rosenberg  SA ,Progress  in human tumour immunology  and  immunotherapy.Nature.20 01May 17； 411(6835):380‑4. [0007]2.Van Der Bruggen P,et al.Tumor ‑specific  shared antigenic  peptides   recognized by human T cells.Immunol Rev.2002Oct； 18 8:51‑64. [0008]3.Rosenberg  SA.Interleukin ‑2and the development  of immunotherapy  for 说　明　书 1/14 页 3 CN 114605541 A 3