(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110716626.2 (22)申请日 2021.06.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113425700 A (43)申请公布日 2021.09.24 (73)专利权人 中山大学 地址 510275 广东省广州市海珠区新港西 路135号 (72)发明人 王志勇　徐梓涵　彭辰　蔡镓鹂　 石晟宏　徐鋆耀　 (74)专利代理 机构 深圳市创富知识产权代理有 限公司 4 4367 专利代理师 高冰 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 47/42(2017.01)A61K 47/54(2017.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 45/00(2006.01) A61K 49/14(2006.01) A61K 49/18(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 31/337(2006.01) A61K 31/4745(2006.01) A61K 31/704(2006.01) A61K 33/26(2006.01) A61K 33/32(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 49/00(2006.01) (56)对比文件 CN 103202813 A,2013.07.17 审查员 陈振中 (54)发明名称 一种基于蛋白自组装的纳米药物载送系统 的构建及应用 (57)摘要 本发明属于生物制药技术领域， 具体涉及一 种基于蛋白自组装的纳米药物载送系统的构建 及应用， 本发明通过非共价键方式， 将载药前体 小分子与可对小分子结构域进行响应的血清白 蛋白体系， 以及功能药物分子， 纳米晶体(无机晶 体)相结合； 首先通过将待包载药物溶于有机溶 剂中， 再将该有机溶剂滴入血清白蛋白溶液中完 成自组装， 而后除去有机溶剂并纯化溶液， 得到 纳米药物载送系统。 本发明利用小分子和血清白 蛋白的自组装构建得到的纳米药物载送系统， 可 以包载多种药物、 粒径均一、 稳定性强、 包裹效率 高、 生物相容性好、 药物 体内滞留时间长， 同时本 发明的制备成本低， 可用于磁学成像、 药物 递送、 肿瘤杀伤等领域， 具有良好的医用前 景。 权利要求书1页 说明书8页 附图3页 CN 113425700 B 2022.08.23 CN 113425700 B 1.一种基于蛋白自组装的纳米药物载送系统的构建方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 将药物、 烟酸、 2 ‑甲基咪唑溶解于有机溶剂， 制得溶液A， 所述药物包括药物分子或/ 和无机晶体， 所述药物为一种或多种， 所述烟酸和2 ‑甲基咪唑的总量与所述药物的质量比 为(16‑30):1， 所述烟酸与2 ‑甲基咪唑的质量比为(1 ‑4):(2‑4)； S2、 将血清白蛋白溶解， 制 得溶液B， 所述血清白蛋白与药物的质量比为(10 ‑20): (1‑ 4)； S3、 将溶液A逐滴超声滴入溶 液B中， 混匀后制得 溶液C； S4、 溶液C蒸发去除有机溶剂后经超速离心制备得到基于蛋白自组装的纳米药物载送 系统； 步骤S4中， 在去除有机溶剂后还可以加入金属基化合物水溶液， 经超速离心后制备得 到金属离 子负载的纳米药物载送系统， 实现纳米 体系的多功能化； 当所述药物为无机晶体时， 还可以通过单独添加金属阳离子化合物与功能化阴离子化 合物的形式在 纳米药物载送系统中原位形成无机盐晶体结构。 2.根据权利要求1所述的一种基于蛋白自组装的纳米药物载送系统的构建方法， 其特 征在于， 所述药物分子包括盐酸阿霉素、 IR780、 紫杉 醇、 喜树碱、 吲哚菁绿， 所述无机晶体包 括SPIO、 MnS、 F eS、 FeS2、 MnFe2O4。 3.根据权利要求1所述的一种基于蛋白自组装的纳米药物载送系统的构建方法， 其特 征在于， 所述烟酸在有机溶剂中的浓度为(1 ‑3)mg/500uL， 血清白蛋白在溶液B中的浓度为 (10‑20)mg/(5 ‑8)mL。 4.根据权利要求1所述的一种基于蛋白自组装的纳米药物载送系统的构建方法， 其特 征在于， 溶 液A与溶液B的体积比为1： (10 ‑16)。 5.根据权利要求1所述的一种基于蛋白自组装的纳米药物载送系统的构建方法， 其特 征在于， 所述超速离心的离心速度为2000 ‑8000rpm， 分子截留量 （MWCO） 为3 ‑10kDa， 时间为 5‑30min。 6.采用权利要求1 ‑5任一项所述方法构建得到的基于蛋白自组装的纳米药物载送系 统。 7.权利要求6所述的基于蛋白自组装的纳米药物载送系统的应用， 其特征在于， 所述应 用包括制备 药物递送载体， 制备造影成像剂， 制备治疗肿瘤药物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113425700 B 2一种基于蛋白自组装的纳米药物载送系统的构建及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物制药技术领域， 具体涉及 一种基于蛋白自组装的纳米药物载送系 统的构建及应用。 背景技术 [0002]纳米药物的研究在 生物医学等领域有着广泛的应用与潜在的价值。 当药物颗粒的 尺寸接近纳米尺度时， 会发生一些有利的变化， 如颗粒表面和溶剂的相互作用力增强， 使 药 物能够克服因密度差异而导致的颗粒聚沉或沉降问题。 然而， 许多纳米药物具有疏水性， 如 超顺磁性四氧化三铁纳米晶体(SPIO)、 硫化锰纳米晶体(MnS)、 亚硫化铁纳米晶体(FeS2)、 药物分子阿霉素、 紫杉醇、 喜树碱、 IR780、 吲哚菁绿(ICG)以及金属离子Mn2+等， 导致其出现 难以被细胞摄取从而出现不易被生物体 吸收、 药代动力学不稳定、 药物体内循环时间短等 问题； 同时， 不少纳米药物还具有 无靶向性以及 全身毒性的特点， 从而不利于治疗。 因此， 如 何增强疏 水纳米材 料以及疏 水性药物的水 溶性是当前的研究重点。 [0003]目前， 应用于疏水药物的增溶与稳定改性的生物材料主要为脂质体、 类脂质体两 亲性分子， 如二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 ‑聚乙二醇2000(DSPE ‑PEG2000)、 聚乙二醇 ‑己内酯 (PEG‑PCL)等。 在水溶液中， 这些两亲性分子可以利用其分子结构中的疏水基团， 在疏水相 互作用下自发聚集成疏水核心， 同时亲水性基团也会相互聚集形成外 围亲水冠层， 从而达 到更稳定的状态， 而在组装过程中形成的疏水核腔可以有效包载疏水性分子、 纳米粒子等 疏水性材料。 然而， 有研 究表明， PEG分子类生物材料， 在体内环境下会刺激机体产生PEG特 异性免疫球蛋白， 缩短PEG药物递送系统在体内循环的半衰期， 从而影响药物疗效， 并造成 非特异性组织 沉积从而产生毒性。 [0004]近年来， 基于蛋白的递送系统逐渐受到人们的重视。 其中以白蛋白纳米粒为主的 药物递送系统由于具有提高药物稳定性、 增加体内循环时间、 提高药物的肿瘤靶向性以及 降低毒副作用等优点而成为药学领域的研究热点， 具有巨大的发展潜力及应用前景。 当前， 白蛋白药物载体的构建主要有两种方式， 第一种是采用化学共价键连接的方式使载体与药 物分子相结合， 但 这种方式需要利用蛋白结构上的氨基、 羧基与药物分子进行化学偶联， 而 蛋白分子的结构 较为精细， 化学基团的改变极易造成结构的破坏， 从而影响其生物功能。 另 一种方式是通过蛋白上的巯基将蛋白分子 极性交联形成纳米粒， 在交联过程中将药物分子 进行组装， 这种方法同样会造成蛋白的化学结构发生改变， 从而影响蛋白的生物功能， 同时 这种方式装载的药物种类有限， 难以实现纳米晶体的包裹。 [0005]综上可见， 很有必要开发一种新的方式来构建纳米药物载送系统， 并且使构建得 到的药物载送系统具有可以实现多种 药物包载需求、 粒径适中且分布均一、 热力学稳定性 高、 机体免疫原性低、 对正常细胞 具有良好 生物相容 性、 体内滞留时间长、 靶向性 好等特点。 发明内容 [0006]为了克服上述现有技术的不足， 本发明提出了一种基于蛋白自组装的纳 米药物载说　明　书 1/8 页 3 CN 113425700 B 3