(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110890568.5 (22)申请日 2021.08.04 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113694069 A (43)申请公布日 2021.11.26 (73)专利权人 贵州医科 大学附属医院 地址 550000 贵州省贵阳市 云岩区贵医街 28号 (72)发明人 曹勇　杨成莉　文志鹏　郑志昌　 李明　樊兴华　白洋　李琳　 (74)专利代理 机构 重庆信必达知识产权代理有 限公司 5 0286 专利代理师 陈小东 (51)Int.Cl. A61K 31/519(2006.01)A61K 9/127(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 31/4706(2006.01) (56)对比文件 CN 1021389 27 A,201 1.08.03 审查员 陈笑宇 (54)发明名称 一种共载吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质 体的制备方法 (57)摘要 本发明涉及医药技术领域， 公开了一种共载 吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质体的制备方法， 包括EVO‑Lips的制备和EVO ‑CQ‑Lips的制备； 还 公开了复方脂质体及应用。 本发明将CQ及EVO共 同包载于脂质体内制成复方脂质体， 该复方脂质 体在体内可高效准确的作用于乳腺癌细胞， 提高 了EVO在体内的生物利用度， 降低了CQ对正常组 织细胞的杀伤作用， 副作用小， 在癌症部位可协 同发挥持久的作用， 协 同杀死肿瘤细胞， 使治疗 作用更加迅速、 高效。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 113694069 B 2022.11.01 CN 113694069 B 1.一种共载吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质体在制备抗乳腺癌的药物中的用途， 其特 征在于， 所述复方脂质体的制作方法， 具体步骤如下： S1： EVO‑Lips的制备 称取HSPC、 CHOL和EVO， HSPC、 CHOL和EVO的质量分别为7mg、 2mg和 1mg， 将HSPC、 CHOL和 EVO用氯仿超声溶解后加至20mL圆底烧瓶中， 在减压旋转蒸发仪上进行旋转除去有机溶剂 氯仿， 得稳定的脂质体膜； 将制备好的脂质体膜加至1.5 mL浓度为 1M的硫酸铵缓冲溶液中水 合1h， 然后转移至4mL  EP管中， 用超声波细胞破碎仪超声； 超声时变幅杆先用ddH2O超声 30s， 再通无水乙醇超声30s， 超声脂质体时超声功率为40％， 超声时间设置为超声5s停顿 5s； S2： EVO‑CQ‑Lips的制备 步骤S1中的超声完成后， 将超声后的溶液加入透析袋中， 用pH为7.4的PBS缓冲液透析 12h， 透析12h后加入200uL浓度为50mg/mL的磷酸氯喹， 在恒 温水浴锅上于65℃条件下孵育 30min， 即得共载吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质体EVO ‑CQ‑Lips。 2.根据权利要求1所述的一种 共载吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质体在制备抗乳腺癌 的药物中的用途， 其特征在于， 步骤S2中用PBS缓冲液透析12h， 透析液为0.01moL  PBS缓冲 液1L。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113694069 B 2一种共载吴茱萸碱及 磷酸氯喹的 复方脂质体的制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及医药技术领域， 具体涉及一种共载吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质体 的制备方法。 背景技术 [0002]乳腺癌是严重危害女性健康的第二大癌症， 全世界每年平均约有20万女性被诊断 为乳腺癌， 并造成约4万女性死亡。 化疗仍为其治疗的主要方法之一， 但效果不尽理想， 其原 因是缺乏适当的载体将化学治疗药物准确、 高效的输送至癌症部位 发挥杀死癌症细胞的作 用。 因此， 研究优良载体以包载化疗药物， 使其尽可能高效、 准确的进入癌症部位并发挥持 久作用， 对提高化疗药物治疗作用具有重要意 义。 [0003]吴茱萸碱(Evodiam， EVO)为色胺吲哚类生物碱， 是中药吴茱萸的主要活性成分。 现 代药理学研究结果表明， 其可调控NF ‑κB、 P53蛋白表达， 具有抗癌作用。 研究表明， 在化学药 物治疗晚期， 基于细胞自我修复机制， 肿瘤细胞过度激活自噬机制， 进行受损细胞自体修 复， 降低了化疗效果。 因此， 联合使用自噬抑制剂， 抑制肿瘤细胞晚期自噬上调， 可起到协同 抗肿瘤的效果。 磷酸氯喹(Chloroquine， CQ)具有抑制细胞 自噬的作用， 普遍认为其是通过 阻断自噬体与溶酶体融合的过程而发挥自噬抑制机制的， 除此之外， 其能调控抑瘤蛋白P 53 基因， 可增强化疗药物抗癌活性。 [0004]基于以上理论研究基础， 本发明将磷酸氯喹与吴茱萸碱共同用于协同抗肿瘤。 由 于EVO是脂溶性药物， 水溶性小， 体内生物利用度低， CQ对正常组织细胞也有较强的杀伤作 用， 因此如何将EVO、 CQ高效准确的递送入肿瘤部位成为本发明所要解决的关键问题。 发明内容 [0005]基于以上问题， 本发明提供一种共载吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质体的制备方 法， 本发明可高效准确的作用于 乳腺癌细胞， 使 治疗作用更加迅速、 高效。 [0006]为解决以上技术问题， 本发明提供了一种共载吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质体 的制备方法， 具体步骤如下： [0007]S1： EVO‑Lips的制备 [0008]称取HSPC、 CHOL和EVO， HSPC、 CH OL和EVO的质量分别为7mg、 2mg和1mg， 将 HSPC、 CHOL 和EVO用氯仿超声溶解后加 至20mL圆底烧瓶中， 在减压旋转蒸发仪上进行旋转除去有机溶 剂氯仿， 得稳定的脂质体膜； 将制备好的脂质体膜加至1.5 mL浓度为 1M的硫酸铵缓冲溶液中 水合1h， 然后转移至4mL  EP管中， 用超声 波细胞破碎仪超声； [0009]S2： EVO‑CQ‑Lips的制备 [0010]步骤S1中的超声完成后， 将超声后的溶液加入透析袋中， 用pH为7.4的PBS缓冲液 透析12h， 透析12h后加入200uL浓度为50mg/mL的磷酸氯喹， 在恒 温水浴锅上于65℃条件下 孵育30min， 即得共载吴茱萸碱及磷酸氯喹的复方脂质体EVO ‑CQ‑Lips。 [0011]进一步的， 步骤S1中超声时变幅杆先用ddH2O超声30s， 再通无水乙醇超声30s， 超说　明　书 1/7 页 3 CN 113694069 B 3