(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111615701.2 (22)申请日 2021.12.27 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO: V202081 2021.01.02 (71)申请人 上海鑫湾生物科技有限公司 地址 201506 上海市金山区豪业路518号6 幢 (72)发明人 徐建青　张晓燕　丁相卿　廖启彬　 王诗语　周俊花　 (74)专利代理 机构 北京泛华伟业知识产权代理 有限公司 1 1280 代理人 郭广迅 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01)C12N 7/01(2006.01) C12N 15/863(2006.01) A61K 35/761(2015.01) A61K 35/763(2015.01) A61K 35/765(2015.01) A61K 35/766(2015.01) A61K 35/768(2015.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 双特异性T细胞衔接器、 其重组溶瘤病毒及 其用途 (57)摘要 本发明提供了双特异性T细胞衔接器、 其重 组溶瘤病毒及其用途。 本发明提供了一种αCD47 和αCD3双特异性T细胞衔接器。 本发明还提供了 一种分离的核酸分子， 其编码所述双特异性T细 胞衔接器。 本发明还提供了所述双特异性T细胞 衔接器BiTE的表达框架。 本发明还提供了一种重 组溶瘤病毒， 所述溶瘤病毒可操作地插入或包含 所述双特异性T细胞衔接器BiTE的表达框架。 本 发明将双特异性T细胞衔接器与溶瘤病毒结合， 相对于单纯的基因疗法或者病毒疗法， 所述溶瘤 病毒显著增强对 恶性肿瘤的抑制能力。 权利要求书5页 说明书15页 序列表13页 附图6页 CN 114249836 A 2022.03.29 CN 114249836 A 1.一种αCD47和αCD3双特异性T细胞衔接器αCD47 ‑αCD3 BiTE， 其包含如下式中任一项 所示的融合蛋白： VLα CD47‑L‑VHα CD3‑L‑VLα CD3‑L‑VHα CD47； 或 VHα CD47‑L‑VHα CD3‑L‑VLα CD3‑L‑VLα CD47 其中， L表示连接肽； 其中， 所述VHα CD47为CD47抗体的重链可变区， 其包 含下述3个互补决定区： (i)VH CDR1， 其由下述序列组成： SEQ  ID NO:1， 或与其相比具有一个或几个氨基酸 的 置换、 缺失或添加的序列， (ii)VH CDR2， 其由下述序列组成： SEQ  ID NO:2， 或与其相比具有一个或几个氨基酸的 置换、 缺失或添加的序列， 和 (iii)VH CDR3， 其由下述序列组成： SEQ  ID NO:3， 或与其相比具有一个或几个氨基酸 的置换、 缺失或添加的序列； 优选地， (i) ‑(iii)任一项中所述的置换为保守 置换； 优选地， 所述VHαCD47包含： 如SEQ  ID NO:1所示的VH  CDR1、 如SEQ  ID NO:2所示的VH   CDR2、 如SEQ  ID NO:3所示的VH  CDR3； 其中， 所述VLα CD47为CD47抗体的轻链可变区， 其包 含下述3个互补决定区： (iv)VL CDR1， 其由下述序列组成： SEQ  ID NO:4、 SEQ  ID NO:7、 SEQ  ID NO:10、 SEQ  ID  NO:13或SEQ  ID NO:16中任一项所示， 或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失或添 加的序列， (v)VL CDR2， 其由下述序列组成： SEQ  ID NO:5、 SEQ  ID NO:8、 SEQ  ID NO:11、 SEQ  ID  NO:14或SEQ  ID NO:17中任一项所示， 或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失或添 加的序列， 和 (vi)VL CDR3， 其由下述序列组成： SEQ  ID NO:6、 SEQ  ID NO:9、 SEQ  ID NO:12、 SEQ  ID  NO:15或SEQ  ID NO:18中任一项所示， 或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失或添 加的序列； 优选地， (iv) ‑(vi)任一项中所述的置换为保守 置换； 优选地， 所述VLαCD47包含： 如SEQ  ID NO:4所示的VL  CDR1、 如SEQ  ID NO:5所示的VL   CDR2、 如SEQ  ID NO:6所示的VL  CDR3； 或所述VLα CD47包含： 如S EQ ID NO:7所示的VL  CDR1、 如SEQ  ID NO: 8所示的VL  CDR2、 如 SEQ ID NO:9所示的VL  CDR3； 或所述VLαCD47包含： 如SEQ  ID NO:10所示的VL  CDR1、 如SEQ  ID NO:11所示的VL  CDR2、 如SEQ ID NO:12所示的VL  CDR3； 或所述VLαCD47包含： 如SEQ  ID NO:13所示的VL  CDR1、 如SEQ  ID NO:14所示的VL  CDR2、 如SEQ ID NO:15所示的VL  CDR3； 或所述VLαCD47包含： 如SEQ  ID NO:16所示的VL  CDR1、 如SEQ  ID NO:17所示的VL  CDR2、 如SEQ ID NO:18所示的VL  CDR3。 2.根据权利要求1所述的双特异性T细胞衔接器， 其中， 所述VHα CD47包含SEQ ID NO:19所 示的重链可变区中含有的3个CDR； 优选地， 所述VLαCD47包含SEQ ID NO:20‑24中任一项所示的轻链可变区中含有的3个权　利　要　求　书 1/5 页 2 CN 114249836 A 2CDR； 优选地， 所述重链可变区中含有的3个CDR， 和/或所述轻链可变区中含有的3个CDR， 由 Kabat、 Chothia或IMGT编号系统定义。 3.根据权利要求1或2所述的双特异性T细胞衔接器， 其中， 所述VHαCD47包含选自下列的 氨基酸序列： (i)SEQ ID NO:19所示的序列； (ii)与SEQ  ID NO:19所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失或添加的序 列； 或 (iii)与SEQ  ID NO:19所示的序列具有至少80％、 至少85％、 至少90％、 至少91％、 至少 92％、 至少93％、 至少94％、 至少95％、 至少96％、 至少97％、 至少98％、 至少99％、 或100％的 序列同一 性的序列； 和/或， 所述VLα CD47包含选自下列的氨基酸序列： (iv)SEQ ID NO:20‑24中任一项所示的序列； (v)与SEQ  ID NO:20‑24中任一项所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失 或添加的序列； 或 (vi)与SEQ  ID NO:20‑24中任一项所示的序列具有至少80％、 至少85％、 至少90％、 至 少91％、 至少92％、 至少93％、 至少94％、 至少95％、 至少96％、 至少97％、 至少98％、 至少 99％、 或10 0％的序列同一 性的序列； 优选地， (i i)或(v)中所述的置换 是保守置换。 4.根据权利要 求1至3中任一项所述的双特异性T细胞衔接器， 其中， 所述V Hα CD3包含选自 下列的氨基酸序列： (i)SEQ ID NO:25或27 所示的序列； (ii)与SEQ  ID NO:25或27所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失或添加 的序列； 或 (iii)与SEQ  ID NO:25或27所示的序列具有至少80％、 至少85％、 至少90％、 至少91％、 至少92％、 至少93％、 至少94％、 至少95％、 至少96％、 至少97％、 至少98％、 至少99％、 或 100％的序列同一 性的序列； 和/或， 所述VLα CD3包含选自下列的氨基酸序列： (iv)SEQ ID NO:26或28所示的序列； (v)与SEQ  ID NO:26或28所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失或添加 的序列； 或 (vi)与SEQ  ID NO:26或28所示的序列具有至少80％、 至少85％、 至少90％、 至少91％、 至少92％、 至少93％、 至少94％、 至少95％、 至少96％、 至少97％、 至少98％、 至少99％、 或 100％的序列同一 性的序列； 优选地， (i i)或(v)中所述的置换 是保守置换。 5.根据权利要求1至4中任一项所述的双特异性T细胞衔接器， 其中， 所述VHα CD47、 VHα CD3、 VLα CD47和VLα CD3通过连接肽连接；权　利　要　求　书 2/5 页 3 CN 114249836 A 3