ICS 71.100.10 Y 42 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 3030—2017 化妆品中α-羟基酸的测定 高效液相色谱法 Determination of α-hydroxy- acid in cosmetics by high performance liquid chromatography method 2017-10-25 发布 山东省质量技术监督局 2017-11-25 实施 发 布 DB37/T 3030—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省质量技术监督局提出。 本标准由山东省化工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、山东省食品药品检验研究院。 本标准主要起草人：张娟、霍艳敏、刘桂亮、张艳侠、郑红、公丕学、卢兰香、别梅。 I DB37/T 3030—2017 化妆品中α-羟基酸的测定 高效液相色谱法范围 1 范围 本标准规定了高效液相色谱测定化妆品中酒石酸、乙醇酸、苹果酸、乳酸和柠檬酸五种α-羟基酸的 方法。 本标准适用于护肤膏霜、洗面奶(膏)、润肤乳液、化妆水等化妆品中酒石酸、乙醇酸、苹果酸、乳 酸和柠檬酸五种α-羟基酸的测定。 本标准检出限：酒石酸0.1 g/kg、乙醇酸0.1 g/kg、苹果酸0.1 g/kg、乳酸0.12 g/kg、柠檬酸0.12 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用水超声提取，经正己烷萃取除杂质，以高效液相色谱分离，紫外检测器检测，以保留时间定 性，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水，其它试剂和材料主要包括： a) 甲醇：色谱纯； b) 正己烷； c) 磷酸二氢铵； d) 磷酸：优级纯； e) 0.1 mol/L 磷酸二氢铵缓冲溶液：称取 11.503 g 磷酸二氢铵于 1000 mL 烧杯，加水 950 mL， 溶解，用磷酸调 pH 至 2.45，转移至 1000 mL 容量瓶，用水定容； f) 标准品：DL-酒石酸（CAS:133-37-9）、乙醇酸（CAS:79-14-1）、DL-苹果酸（CAS:6915-15-7）、 乳酸（CAS:50-21-5）、柠檬酸（CAS:77-92-9），纯度≥99.0 %； g) 标准储备溶液：分别准确称取 100 mg(精确至 0.1mg)酒石酸、乙醇酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸 于 100.00 mL 容量瓶中，用水溶解，定容，配成 1 mg/mL 的标准储备液，4 ℃保存，可使用 3 个月； h) 标准工作溶液：将标准储备溶液配制成 200 μg/mL 的混合标准溶液，用水依次稀释成 20 μg/mL、50 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL 的系列标准溶液，使用前配制； i) 微孔滤膜：水相，孔径 0.45 μm。 1 DB37/T 3030—2017 5 仪器和设备 仪器和设备主要包括： a) 高效液相色谱仪：具二极管阵列检测器或紫外检测器； b) 天平：感量 0.01 g、0.1 mg； c) 涡旋混合器； d) 超声波清洗器； e) 离心机：转速不低于 10000 r/min； f) pH 计：精度 0.01。 6 分析步骤 6.1 试样的处理 准确称取混匀试样2 g（精确至0.01 g）于25 mL具塞刻度管中，加入15 mL水，涡旋混合1 min，超 声提取15 min，用水定容，混匀、静置，取10 mL上清液转入50 mL具塞离心管中，加入10 mL正己烷萃 取除杂质，在10000 r/min离心5 min，弃去正己烷层，水相再用5 mL正己烷萃取一次，重复上述操作， 水相经微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定。 6.2 液相色谱参考条件 色谱参考条件： a) 色谱柱：Atlantis T3 C18 250 mm×4.6 mm(i,d)，5 μm，或性能相当者； b) 流动相：0.1 mol/L 磷酸二氢铵缓冲溶液； c) 流速：0.8 mL/min； d) 柱温：35 ℃； e) 进样量：50 μL； f) 检测波长：紫外检测器检测波长设为 214 nm。标样谱图见附录 A。 6.3 测定 将标准工作溶液按照浓度由低到高的顺序进样测定，以各组分峰面积对其浓度绘制标准曲线。试样 经测定，以各组分保留时间定性，外表法定量。经测定超出标准曲线样品经适当稀释后再进样分析。 6.4 结果计算 6.4.1 试样中每种组分的含量按式（1）计算： wi = C ×V ..................................... (1) m × 1000 式中： w i ——试样中某种组分的含量，单位为克每千克（g/kg）； C ——由标准曲线得到的试样溶液中该组分的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V ——试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； m ——试样质量，单位为克（g）。 6.4.2 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。 2 DB37/T 3030—2017 7 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 3 DB37/T 3030—2017 AA 附 录 A （资料性附录） α-羟基酸标样的色谱图 说明： 1——酒石酸； 2——乙醇酸； 3——D-苹果酸； 4——乳酸； 5——柠檬酸； 6——L-苹果酸。 图A.1 α-羟基酸标样的色谱图 _________________________________ 4