ICS 65.020.20 B 31 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 3991—2021 ‘紫金四季’草莓组培快繁技术规程 Technical regulation for micropropagation of everbearing strawberry ‘Zijin Siji’ 2021 - 02 - 03 发布 江苏省市场监督管理局 2021 - 03 - 03 实施 发 布 DB32/T 3991-2021 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件由江苏省农业科学院提出并归口。 本文件起草单位：江苏省农业科学院。 本文件主要起草人：王静、赵密珍、庞夫花、蔡伟建、陈晓东、袁华招、于红梅、吴娥娇、夏瑾。 I DB32/T 3991-2021 ‘紫金四季’草莓组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了‘紫金四季’草莓组培快繁技术规程的培养基配制、植株选择与外植体处理、培养技 术、种苗培育技术要求。 本文件适用于‘紫金四季’草莓组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 NY/T 3032 草莓脱毒种苗生产技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 培养基配制 4.1 基本培养基与植物生长调节物质母液 B5、MS基本培养基购自商业化产品，培养基中大量元素、微量元素、铁盐、有机成分组成参见NY/T 2306。 植物生长调节物质母液配制的浓度、方法、保存参见NY/T 2306。 4.2 培养基配方 培养基配方如下： 诱导培养基：B5 固体培养基+6-BA 3.4 mg/L+IBA 0.3 mg/L+蔗糖 3%+琼脂 6 g/L~7 g/L； 伸长培养基：MS 固体培养基+6-BA 1.7 mg/L+IBA 0.15 mg/L+蔗糖 3%+琼脂 6 g/L~7 g/L； 增殖培养基：MS 固体培养基+6-BA 0.75 mg/L+蔗糖 3%+琼脂 6 g/L~7 g/L； 生根培养基：1/2MS 固体培养基+IBA 0.003 mg/L+葡萄糖 1.0%+琼脂 6 g/L~7 g/L。 4.3 培养基配制与消毒灭菌 培养基准备、糖溶解、琼脂溶化、定容、pH 测定、分装、封口、灭菌、冷却、贮存等均参见 NY/T 2306。 1 DB32/T 3991-2021 5 植株选择与外植体处理 5.1 植株选择 在6月~10月，选择种植在栽培介质（土、基质等）未发生病虫害、植株长势强、营养生长期在100 d 以上、根颈部粗> 1 cm、叶片颜色深绿色的草莓植株作为取材对象。 5.2 外植体处理 5.2.1 洗涤剂处理 匍匐茎或根颈在碱性洗涤剂中浸泡20 min~40 min，流水冲洗30 min~60 min，蒸馏水清洗2次~3次， 转至超净工作台。 5.2.2 消毒 在超净工作台上，匍匐茎或根颈用 75%乙醇浸泡 15 s，无菌水冲洗 4 次~6 次。 剥开匍匐茎顶端叶片或根颈处，选取匍匐茎茎尖或>1 mm 隐芽，0.8%次氯酸钠溶液消毒（匍匐茎 茎尖处理 15 min, 隐芽处理 10 min）；无菌水冲洗 4 次~6 次，无菌滤纸吸干；置入无菌培养皿中用无 菌刀片切割，匍匐茎茎尖生长点取 0.2 mm~0.8 mm，隐芽取 0.5 mm~3 mm；若超出尺寸范围，45°斜切。 6 培养技术 6.1 接种 接种前期准备（包括接种环境，接种盘、接种器械灭菌等）参见NY/T 2306。在无菌的培养瓶中， 将消毒处理后的外植体接种于诱导培养基上，每瓶1个，并标注外植体、接种日期、名称。 6.2 培养 6.2.1 培养条件 培养室内温度为(24±2) ℃。暗培养，无光照；光培养，培养瓶上部的光照强度为100 μmol / (m2·s)~200 μmol / (m2·s)，每日光照12 h~16 h。 6.2.2 诱导培养 外植体在诱导培养基中暗培养14 d后转入光培养7 d~14 d，茎尖或隐芽萌发成芽，若芽<0.3 cm，在 诱导培养基中继代，21 d~28 d继代一次。 6.2.3 伸长培养 当芽长至0.3 cm~0.5 cm，转置于伸长培养基光培养，得到单芽或丛生芽，将芽丛切割成单芽，若单 芽<1 cm，在伸长培养基中继代，21 d~28 d继代一次。 6.2.4 增殖培养 待单芽长至 1 cm~3 cm，转置于增殖培养基光培养，得到芽丛，将芽丛切割单芽，若单芽<3cm，继 续在增殖培养基中继代，21 d~28 d 继代一次。 6.2.5 生根培养 2 DB32/T 3991-2021 待单芽长至3 cm~5 cm，取生长健壮、至少有3小叶的单芽移入生根培养基，暗培养7 d后转入光培 养7 d~21 d，至根长1.5 cm~3 cm、2条幼根以上开始炼苗。 6.2.6 炼苗、移栽 按照NY/T 3032执行。 7 种苗培育 移至户外后，注意通风，前期每天向叶面喷水3次，保证土壤持水量在50%~70%，14 d后，保证土 壤持水量在35%~55%，按照GB/T 6001继续进行后续培育直至成苗。 3