ICS 65.020.01 CCS B 05 黑 DB23 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T2922 -2021 注： 注： 水曲柳腋芽微繁技术规程 2021-06-29 发布 黑龙江省市场监督管理局 2021-07-28 实施 发 布 DB23/T 2922 -2021 前  言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省林业和草原管理局提出。 本文件起草单位：东北林业大学、巴彦县双鸭山林场、绥棱县国有林场三吉台林场、黑龙江省山河 屯林业局黑龙江省苇河林业局、哈尔滨市林业工作管理总站、黑龙江省庆安国有林场管理局、哈尔滨市 呼兰区黄土山林场、黑龙江省应急救援保障中心、黑龙江省林业和草原第二调查规划设计院、五常市森 林病虫防治检疫站、五常市林业工作总站、五常市胜利林场。 本文件主要起草人：詹亚光、齐凤慧、于磊、车德军、林显峰、曾凡锁、薛文辉、刘林、何利明、 谢春风、赵晓军、张连生、李云庆、冯丹、代文栋、王培强、郑宏、王丽娜、李轶男、高群、夏晨、于 航、高航、李晓彬。 I DB23/T 2922 -2021 水曲柳腋芽微繁技术规程 1 范围 本文件规定了水曲柳（Fraxinus mandshurica Rupr.）腋芽微繁的外植体采集与表面消毒、培养基选 择及配制、组织培养程序、组培苗移栽、苗期管理和生产档案。 本文件适用于水曲柳腋芽微繁。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 LY/T 1000 容器育苗技术 LY/T 1671 水曲柳林人工培育技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 外植体采集与表面消毒 4.1 外植体 采集水曲柳优树当年生穗条上带有顶芽或者腋芽的茎段作为组织培养的外植体。 4.2 消毒 按LY/T 1882的规定执行。 5 培养基选择及配制 5.1 初代培养基 WPM 固体培养基，附加 20 gL-1 蔗糖、7 gL-1 琼脂和 1 mgL-1 6-BA（6-苄基腺嘌呤），pH=5.8~6.0。 5.2 继代和分化培养基 继代培养基1为WPM液体培养基，附加30 gL-1蔗糖和0.6 mg/L TDZ（噻苯隆）（pH=5.8~6.0）； 继代培养基2为WPM固体培养基，附加30 gL-1蔗糖、0.05 mg·L-1 TDZ、0.6 mg·L-1 BA和7 gL-1琼 脂（pH=5.8~6.0）； 1 DB23/T 2922-2021 芽分化增殖培养基为WPM固体培养基，附加30 gL-1蔗糖、1.0 mg·L-1 ZT（玉米素）和7 gL-1琼脂 （pH=6.0~6.5）。 5.3 生根培养基 生根培养为WPM固体培养基，附加20 gL-1蔗糖、1.4 mg·L-1 IBA（吲哚丁酸）、0.7 mg·L-1 NAA（萘 乙酸）和7 g·L-1琼脂（pH=5.8~6.0）。 5.4 培养基母液的配制及保存 按LY/T 1882的规定执行。 5.5 培养基的灭菌 按 LY/T 1882 的规定执行。 6 组织培养 6.1 条件 温度25±2 ℃，湿度60 %~70 %，光照16 h无光8 h交替培养，光照强度40 μmolm-2s-1 ~80 μmolm-2s-1； 在无光条件下液体培养时，摇床转速60 rpmmin-1。 6.2 初代培养 取灭菌（121 ℃灭菌20 min）的刀具、镊子、培养皿，将消毒的茎段放入培养皿中，切去茎节两端 变褐部分露出新鲜组织，接入初代培养基中光照培养20 d~30 d，至芽萌发和生长。 6.3 继代和分化增殖培养 萌发芽接种到继代培养基1中液体培养20 d~30 d，转入继代培养基2中，光照培养20 d~30 d，再转 入芽分化增殖培养基，在光照条件下培养25 d~35 d，直至新芽分化。 6.4 壮苗生根培养 新芽转接到生根培养基中，培养20 d~30 d后，待芽长至3 cm~5 cm长，基部形成不定根时，切下单 个芽再转入生根培养基中，培养至根长约1 cm。 7 组培苗移栽 7.1 基质配置 按LY/T 1000的规定执行。 7.2 7.3 环境要求 温度23 ℃~27 ℃、湿度60 %~90 %的温室内自然光照。 移栽 将灭菌的基质，装入口径6 cm~8 cm的无纺布育苗袋中，用不含蔗糖和琼脂的生根培养基浇透。将 带有3个以上根的组培苗栽植于育苗袋，空气湿度80 %~90 %；移栽7 d后湿度控制在60 %~70 %。 2 DB23/T 2922-2021 8 苗期管理 按LY/T 1671的规定执行。 9 生产档案 应建立生产档案，内容包括：外植体采集与表面消毒、培养基选择及配制、组织培养程序、组培苗 移栽和苗期管理等。 3