ICS 65.020.01 CCS B15 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2316—2021 植物 全磷测定—流动注射法 Determination of total phosphorus in plants—Flow injection analusis(FIA) 2021-08-20 发布 2021-09-20 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2316—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古自治区乌兰察布市卓资县农牧和科技局家畜 改良站、鄂尔多斯市植保植检站。 本文件主要起草人：狄彩霞、史培、李秀萍、栗艳芳、李宝贺、莎娜、任超、尹鑫、郝晓平、闫丽 英、黄洁、郑承云、郝璐。 I DB15/T 2316—2021 植物 全磷测定-流动注射法 1 范围 本文件规定了植物中全磷测定-流动注射法。 本文件适用于植物中全磷含量的测定。 本文件的方法检出限为 0.003 g/100 g。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 流动注射分析 flow injection analysis 在热力学非平衡条件下，在流液中重现地处理试样或试剂区带的定量流动分析技术。 4 原理 有机磷化合物和多磷酸盐在凯氏消解后转化为磷酸盐。磷酸盐和钼酸盐及抗坏血酸在酸性条件下反 应生成一种蓝色化合物钼蓝（酒石酸锑钾作为催化剂），钼蓝在660 nm处在流动注射分析仪上的测定信 号值与磷的浓度成正比，测定试样溶液的信号值与标准系列比较定量。 5 试剂和材料 5.1 试剂要求 除非另有说明，所用水应符合GB/T 6682中二级水要求。实验所用试剂均为分析纯。 5.2 试剂 5.2.1 硫酸（H2SO4） ，ρ=1.84 g/mL。 5.2.2 酒石酸锑钾［K(SbO)C4H4O6.1/2H2O］ 。 5.2.3 抗坏血酸（C6H8O8） 。 1 DB15/T 2316—2021 5.2.4 磷酸二氢钾（KH2PO4） ：在 105±5 ℃下干燥恒重后，保存在干燥器中。 5.2.5 过氧化氢（H2O2） 。 5.2.6 氯化钠（NaCl） 。 5.2.7 十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S） ，电泳级。 5.2.8 氢氧化钠（NaOH） 。 5.2.9 乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O） 。 5.2.10 钼酸铵[（NH4）6Mo7O24.4H2O]。 5.2.11 钼酸铵[（NH4）6Mo7O24.4H2O]溶液（0.005 mol/L）：称取 6.20 g 钼酸铵（5.10）溶于 700 mL 水中，加入 0.17 g 酒石酸锑钾（5.2）并稀释至 1000 mL。混合均匀后备用。 5.2.12 载流液 A：称取 5.00 g 氯化钠（5.6）溶于 700 mL 蒸馏水，缓慢加入 12 mL 硫酸（5.1） 。稀 释至 1000 mL，摇匀，加入 0.80 g 十二烷基硫酸钠（5.7）并混合均匀。溶液只要保持澄清可长时间使 用。 5.2.13 载流液 B：缓慢加入 14 mL 硫酸（5.1）至 600 mL 水中，冷却至室温后稀释至 1000 mL，加入 0.80 g（5.7）十二烷基硫酸钠并混合均匀。 5.2.14 抗坏血酸溶液（1.5 %） ：称取 1.50 g 抗坏血酸（5.3）溶于 60 mL 水中，稀释至 100 mL，摇 匀，储存于棕色瓶中，现用现配。 5.2.15 系统清洗液（清洗时使用） ：称取 6.50 g 氢氧化钠（5.8）和 0.60 g 乙二胺四乙酸二钠（5.9） 溶于 100 mL 水中。如果基线和带过值增大，则每周用此清洗液清洗所有管路。 5.2.16 磷标准溶液 A（1000 mg /L） ：称取磷酸二氢钾（5.4）4.3940 g 溶于 600 mL 水中，稀释至 1000 mL，摇匀。 5.2.17 磷标准使用溶液 B（100 mg /L） ：吸取 10 mL 标准液 A（5.16）至 100 mL 容量瓶中，用水定 容。 6 仪器和设备 6.1 流动注射分析仪器：含自动进样器。 6.2 天平：感量 0.01 g、0.0001 g。 6.3 可调式电热板或可调式电热炉/可调温电炉：0 W～1000 W。 6.4 鼓风干燥箱。 6.5 组织捣碎机。 6.6 植物样品粉碎机。 2 DB15/T 2316—2021 7 分析步骤 7.1 试样制备 新鲜样品，用水依次清洗后，用干净纱布轻轻擦去其表面水分，用四分法缩分放入组织捣碎机中制 成匀浆，备用。植物干样，先将样品在80 ℃～90 ℃鼓风烘箱中烘15 min～30 min ，然后降温至60 ℃～ 70 ℃，去除水分，用植物样品粉碎机粉碎，过40目筛混匀，备用。 7.2 样品溶液制备 称取植物风干样品0.1 g～1.0 g或新鲜试样1 g～5 g（精确到0.0001 g）于消化管内，加入5 mL 硫酸（5.1），于消煮炉上消煮，溶液回流后滴加过氧化氢（5.5）液体两至三次，每次滴加5～10滴， 直至消解液澄清，停止加热，冷却至室温，全部转移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀静置。 将上清液过滤备用。同时做空白实验。 7.3 仪器参考条件 7.3.1 进样速率：45 样/小时。 7.3.2 进样/清洗比：1.5:1。 7.3.3 基线校正、飘移校正、带过校正：开启。 7.3.4 曲线吻合：线性拟合。 7.3.5 自动基线参比：5 %。 7.3.6 通道温度：25 ℃ 。 7.4 标准工作液配置 分别吸取磷标准使用液B（5.17）为0.00 mL、5.00 mL、10.00 mL、20.00 mL、25.00 mL、30.00 mL、40.00 mL于消化管中，加入5 mL硫酸，处理与样品在相同酸度条件下进行消煮，定容至100 mL后， 溶液含磷浓度分别为：0.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、25.0 mg/L、30.0 mg/L、40.0 mg/L。 7.5 测定 7.5.1 标准曲线的绘制 开机设定工作参数，用水检查分析流路的密闭性和液体流动的顺畅性后换用试剂（管路连接见附录 A），待基线稳定后（约20 min），进样。以测定信号值（峰面积）为纵坐标，对应磷质量浓度（mg/L） 为横坐标绘制标准曲线。校准曲线的相关系数r应 ≥ 0.999。 7.5.2 样品测定 将空白和样品同时注入测定。每批样品应至少做2个空白，若样品浓度过高，应稀释以保证仪器读 值在标准曲线测定范围内。 7.6 质量控制 3 DB15/T 2316—2021 每批样品的测定需带有证质控样品，处理与样品相同。最终测定结果应符合证书所注范围。 8 结果计算 样品中磷（P）的含量以质量分数ω计，数值以克每百克（g/100 g）表示，按公式（1）计算。 (  −  0 )  …………………………………………………（1） m 10 4 式中： ρ——试样中磷的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； ρ0 ——空白样品磷的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V ——待测液定容体积，单位为毫升（mL）； M ——试样质量，单位为克（g） 。 = 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差不得超过这两次测定算术平均值的10 %。 4 DB15/T 2316—2021 附 录 A （资料性） 管 路 连 接 图 管路连接图见图A.1。 图A.1 管路连接图 5