65.020.20 CCS B 42 ICS DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB 32/ T 4058—2021 载脂蛋白 B 羊多抗血清制备技术规程 Technical regulation of apolipoprotein B sheep multiple antiserum 2021 - 06 - 03 发布 江苏省市场监督管理局 2021 - 07 - 03 实施 发 布 DB32/T 4058-2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件由江苏丘陵地区镇江农业科学研究所提出。 本文件由江苏省畜牧业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：江苏丘陵地区镇江农业科学研究所、江苏大学、江苏省句容市茅山管委会、江苏 省农科院畜牧研究所、镇江万山红遍农业园。 本文件主要起草人：徐志伟、徐一然、周金桂、王慧娟、花卫华、徐小波、于建宁、朱明空、朱建 飞、鲁群。 DB32/T 4058-2021 载脂蛋白 B 羊多抗血清制备技术规程 1 范围 本文件规定了载脂蛋白 B 羊多抗血清制备技术规程的羊品种选择和饲养要求、免疫佐剂选用、抗原 乳化、免疫剂量和部位、抗体检测、采血、血清分离、羊血清保存、记录。 本文件适用于羊多抗血清的制备。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 载脂蛋白B Apolipoprotein B 载脂蛋白是血浆脂蛋白中的蛋白质部分，它的基本功能是运输血液当中的脂类。载脂蛋白B，由于 氨基酸组成的不同，分为载脂蛋白B48和载脂蛋白B100。载脂蛋白B48是乳糜微粒的载脂蛋白，载脂蛋 白B100是极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白的载脂蛋白。 3.2 乳化 emulsification 乳化是一种液体以极微小液滴均匀地分散在互不相溶的另一种液体中的作用。乳化是液-液界面现 象，两种不相溶的液体，如油与水，在容器中分成两层，密度小的油在上层，密度大的水在下层。若加 入适当的表面活性剂在强烈的搅拌下，油被分散在水中，形成乳状液，该过程叫乳化。 3.3 佐剂 adjuvant 非特异性免疫增强剂，当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变 免疫应答类型。佐剂增强免疫应答的机制是通过改变抗原的物理形状，延长抗原在机体内保留时间，刺 激单核吞噬细胞对抗原的递呈能力，刺激淋巴细胞分化，增强扩大免疫应答能力。 4 羊品种选择和饲养要求 选用体重约35 kg的健康青年羊公羊，年龄在10月龄至2周岁。免疫前全部打上耳标，采用群养放牧 饲养方式，白天放牧4 h，上午、下午各2 h，晚上添加少量精料，有利于羊只身体健壮，避免过肥，自 动饮水，每天早晚各观察１次羊的健康状况。 DB32/T 4058-2021 5 免疫佐剂选用 首次免疫佐剂采用 sigma 完全弗氏佐剂，从第二次免疫开始，采用 ISA206 佐剂。 6 抗原乳化 采用高速剪切法乳化抗原。将佐剂按需要量放置在乳化容器中，乳化容器需放置在降温夹套中，用 漩涡混合器使之高速旋转，5½号针头逐滴加入载脂蛋白B抗原溶液，待前滴抗原溶液完全消失后，再加 入第二滴抗原溶液；抗原溶液全部加完后，再混合15 min。 7 免疫剂量和部位 免疫剂量和部位见表 1.。 表 1 免疫剂量和部位 次数 间隔时间（d） 免疫接种部位 免疫剂量（mg） 第一次免疫接种 15 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧，足窝注射 2 第二次免疫接种 9 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧，腹股沟淋巴结点的免疫 2 第三次免疫接种 9 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧 2 第四次免疫接种 9 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧 2 第五次免疫接种 9 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧 2 8 抗体检测 8.1 外观 应呈黄色或微红色血清状液体、允许少量的絮状物或沉淀。 8.2 效价测定 采用琼脂扩散法进行效价测定,效价不低于≥1：256。 9 采血 在第五次免疫后，检测抗体水平，达到效价要求后，采用动脉一次性采血。血液用 250 mL 玻璃瓶 收集，血液占玻璃瓶的 1/5。 10 血清分离 把收集好血液的玻璃瓶，放在 37℃恒温水浴锅中一个小时，把玻璃瓶从水浴锅中取出；再把血清 从玻璃瓶中吸出；用低速离心机 4500 rmp/min，离心 15 min，取上清液，颜色为乳白色或微黄色，去掉 沉淀物杂质。 DB32/T 4058-2021 11 血清保存 用玻璃瓶收集血清，放在-20℃保存 3 年，或-70℃保存 6 年冰柜保存。 12 记录 对生产全过程进行记录，生产档案保存血清，没有用完血清继续保存用完。 __________________________