ICS 65.020.20 CCS B20 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2358—2021 乌拉特肋脉野豌豆组培繁育移栽 技术规程 Technical regulation for tissue culture breeding and transplant of Vicia costata Ledeb.cv .Wulate 2021-09-08 发布 2021-10-08 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2358—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起草人：伊风艳、孙海莲、杨鼎、巩青、晔薷罕、王慧敏、邱晓、刘亚红、张璞进、单 玉梅、温超、谢宇。 I DB15/T 2358—2021 乌拉特肋脉野豌豆组培繁育移栽技术规程 1 范围 本文件规定了乌拉特肋脉野豌豆组培繁育的术语和定义、培养基制备、种子处理、种苗培养、初代 培养、继代培养、生根培养和炼苗移栽。 本文件适用于乌拉特肋脉野豌豆组培繁育。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 乌拉特肋脉野豌豆 Vicia costata Ledeb. cv. wulate 1993年通过国审登记的品种，属野豌豆属多年生草本植物，是典型的旱生豆科牧草，分布在降水量 在100 mm～250 mm的地区，极其耐旱，耐瘠薄。适宜种植于内蒙古自治区的荒漠草原及草原化荒漠地 区。 3.2 种苗 seedling 由种子在适宜培养基上直接萌发形成的幼苗。 3.3 初代培养 primary culture 直接从植物体取下含腋芽的茎段后立即进行培养。 3.4 继代培养 subculture 对经过初代培养形成的植物体通过更换新鲜培养基并不断切割，进行培养。 4 培养基制备 4.1 基本培养基 1 DB15/T 2358—2021 MS培养基。 4.2 培养基组成 4.2.1 无菌苗诱导培养基：1/2MS+3 %蔗糖+ 0.7 %琼脂。 4.2.2 初代培养基：MS+0.5 mg/L 6-BA +1 mg/L IBA +3 %蔗糖+ 0.7 %琼脂。 4.2.3 继代培养基：MS+0.5 mg/L 6-BA +1 mg/L IBA +3 %蔗糖+ 0.7 %琼脂。 4.2.4 生根培养基：1/2 MS+0.8 mg/L NAA+3 %蔗糖+0.7 %琼脂。 4.3 培养基灭菌 将配置好的培养基放在高压蒸汽灭菌锅内，在121 ℃下灭菌20 min。 4.4 培养基保存 培养基存放在接种室，在常温条件下可存放7 d，在2 ℃～4 ℃条件下14 d内使用。 5 种子处理 5.1 选择 粒大饱满，整齐一致的成熟种子。 5.2 硬实处理 利用砂纸打磨至种皮发白，或用浓硫酸处理20 min或冷热水对冲3～5次。 5.3 灭菌 在超净工作台上用70 %酒精处理种子1 min，无菌水冲洗3次，然后用0.1 %氯化汞溶液处理8 min。 6 种苗培养 在每个250 ml三角瓶中加入50 ml种苗培养基，凝固后再放入4～6粒种子，待种苗长至10 cm后进 行初代培养。 7 初代培养 7.1 培养方法 在每个250 ml三角瓶中加入50 ml种苗培养基，凝固后再放入4～6粒种子，待种苗长至10 cm后进 行初代培养。 7.2 培养条件 将有茎段的三角瓶置于温度为(25±1)℃，光照为昼夜各12 h的培养箱中。 2 DB15/T 2358—2021 8 继代培养 8.1 培养方法 在超净工作台上，将初代培养30 d左右的无菌苗分割成长约1 cm～2 cm带1～2个叶腋芽的茎段，再 将4～6个茎段放入含继代培养基的三角瓶中。扦插时茎段的生物学下端插入培养基约0.5 cm。 8.2 培养条件 按照本标准中7.2规定执行。 8.3 继代次数 根据需要继代1～3次。 9 生根培养 9.1 培养方法 在超净工作台上，将长至3 cm以上继代培养的无菌苗，转移到生根培养基上。 9.2 培养条件 按照本标准中7.2规定执行。 10 炼苗和移栽 10.1 炼苗 将已生成根系植株的三角瓶封口膜去掉，利用镊子轻轻的将培养基破碎，保持根系完好，在三角瓶 中加入少许无菌水，以维持瓶内湿度，在室内放置2 d。 10.2 移栽 10.2.1 移栽准备 选用50孔穴或直径为10 cm的培养钵，基质为透气良好、水分和养分适宜的土壤。 10.2.2 移栽幼苗 将组培苗从瓶中取出，洗净幼苗根系上的培养基，保持根系长度不超出10 cm，植于培养钵中。 10.3 移栽后管理 将培养钵置于温度为20 ℃～25 ℃的弱光环境下，并保持适宜湿度。 3