ICS 65.020.01 CCS B 15 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2086—2021 向日葵抗列当田间盆栽接种鉴定技术规程 Code of practice for identification of sunflower resistance to broomrapes in field potting inoculation 2021-01-25 发布 2021-02-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2086—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。 本文件起草单位：赤峰市农牧科学研究院。 本文件主要起草人：薛伟、谭丽萍、张玮、毕经伟、田军。 I DB15/T 2086—2021 向日葵抗列当田间盆栽接种鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了田间条件下向日葵抗列当田间盆栽接种鉴定的方法和抗性评价标准。 本文件适用于田间条件下向日葵抗列当水平的鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 田间盆栽接种鉴定技术 4.1 列当接种物制备 4.1.1 列当种子采集和清选 采集完熟的的列当蒴果压碎后过筛（筛孔直径为0.18 cm），筛选出列当种子备用。 4.1.2 列当种子活性测定 随机取备用列当种子3份，每份10 mg，利用GR24溶液（浓度为1 mg/L）作为萌发刺激物，测定列当 种子活性，平均芽率80 %以上可用作接种物制备。（见附录A、B） 4.1.3 列当生理小种选择 选择能代表内蒙古不同向日葵种植区域列当的优势生理小种类型。 4.1.4 列当种子接种物准备 按500 mg列当种子（约10万粒）兑0.5 kg育苗基质的比例，将列当种子与育苗基质混合均匀，制成 接种物备用。 4.2 列当接种向日葵 4.2.1 向日葵对照品种选择 抗列当对照品种选择同辉31号，感列当对照品种选择赤葵2号。 4.2.2 播种前准备 1 DB15/T 2086—2021 取未种植过向日葵的土壤装入黑色塑料营养钵（规格为26 cm*21 cm）五分之四高度，沿营养钵内 四周均匀撒施约3 g的向日葵专用缓释复合肥,然后覆满土。按每重复10盆将营养钵成行埋入土中，深度 约20 cm，行间距20 cm；每品种3次重复，随机区组排列，将种子排序备用。浇水至土壤相对含水量50 %～ 60 %。 4.2.3 接种列当及鉴定品种播种 在营养钵深5 cm～7 cm中心处，每盆撒施接种物约20 g；在营养钵深2 cm～3 cm中心处，播种向日 葵种子后覆土，表面撒细沙。 4.3 田间管理 幼苗2对真叶时，去除弱苗，留一壮苗，拔除杂草，生育期间适时浇水、除草。 4.4 田间调查 4.4.1 调查时期 当植株达到8～9片真叶时，进行第一次调查，之后每隔10 d调查一次直至灌浆末期。 4.4.2 调查及计算方法 记载调查时植株所处生育时期、小区内向日葵株数、被寄生株数、列当株数，计算各品种的平均寄 生率（F）、平均寄生程度（AD）。 计算公式如下： F= α × 100% ……………………（1） β AD = λ …………………………（2） β 式中： F —— 寄生率； α —— 小区内被寄生向日葵株数； β —— 小区内向日葵株数； AD —— 寄生程度； λ —— 小区内列当株数。 具体列当寄生调查表格见附录C。 4.5 抗性鉴定级别的划分 以3次重复的平均寄生率和寄生程度，按表1评定品种的抗性级别。 2 DB15/T 2086—2021 表1 向日葵列当抗性评价标准 级别 抗性类型 寄生率 F/（%） 寄生程度（AD） 1 免疫（I） F=0.00 AD=0 2 高抗（HR） 0.00＜F≤35.00 0≤AD≤1 3 中抗（R） 35.00＜F≤70.00 1≤AD≤10 4 中感（S） 70.00＜F≤100.00 1≤AD≤10 5 高感（HS） 35.00＜F≤100.00 AD>10 3 DB15/T 2086—2021 附 录 A （规范性） GR24 简介 A.1 GR24 性状 化学中文名称：(3E,3aR,8bS)-3-[[(2S)-4-甲基-5-氧代-2H-呋喃-2-基]氧基亚甲基]-4,8b-二氢 -3aH-茚并[2,1-d]呋喃-2-酮 化学英文名称：（3aR*,8bS*,E ）-3-（（（R* ）-4-methyl-5-oxo-2,5-dihydrofuran-2-yloxy） methylene）-3,3a,4,8b-tetrahydro-2H-indeno[1,2-b]furan-2-one 分子式：C17H14O5 分子量：298.29 分子结构： 图A.1 rac-GR24 分子结构式 A.2 GR24 的用途 GR24 是 独 脚 金 内 酯 的 人 工 合 成 类 似 物 ， Binne Zwanenburg 教 授 (University of Nijmegen, Netherlands)的研究小组是世界上最早合成并提供免费提供给（1mg）世界各个实验室开展研究工作的 组织，目前可以商业提供研究人员使用。 独角金内酯(Strigolactones)是近年来发现的一种植物激素或其前体，能够抑制植物的分枝和侧芽 的生长，它与生长素和细胞分裂素协同控制植物的分枝（蘗）数量。作为一种产生于植物根部的类胡萝 卜素衍生物，独角金内酯可以促进植物和土壤微生物的共生作用。另外，在植物与其寄生植物相互作用 的过程中，独角金内酯还起到信号分子的作用，它可以诱导寄生植物如独角金属(Striga spp.)、列当 属(Orobanche spp.)种子的萌发。 4 DB15/T 2086—2021 附 录 B （资料性） 向日葵列当种子活性测定方法 B.1 种子活性测定方法 B.1.1 列当种子表面消毒 将5 mL离心管底部切除，包裹上K-49型玻璃纤维滤纸（Ф90 mm，阻力≤5.5 mm H2O）后放置在小 烧杯中固定。加入向日葵列当种子0.1 g，加入有效成分1 %的次氯酸钠溶液轻轻震荡3 min后，用无菌 水冲洗3次，然后用75 %酒精处理1 min，再用无菌水冲洗3次，放在无菌状态下晾干备用。 B.1.2 向日葵列当种子预培养 在培养皿内（Ф90 mm，高20 mm）重叠放入两张滤纸，加入5 mL浓度0.1 mmol/L的赤霉素溶液，然 后在滤纸上均匀放置直径5 mm的玻璃纤维滤纸片约30片。将表面消毒后的向日葵列当种子均匀散播在滤 纸片上（每个滤纸片上约20～40粒种子），培养皿用封口膜密封后，外加黑塑料袋，放置在25 ℃恒温 培养箱中培养6 d。 B.1.3 GR24刺激向日葵列当种子发芽试验 将预培养向日葵列当种子6 d后的培养皿在无菌环境下打开，用1 mg/L的GR24在每个玻璃纤维滤片 上直接加入20 uL。用封口膜密封后，放置在25 ℃恒温培养箱中培养，5 d后在120倍显微镜下观察，如 果芽管长出种皮即认为该种子已发芽，并统计发芽率。 B.1.4 结果统计表 图B.1 向日葵列当种子采集明细及活性测定表 采集地点 采集时间 总重量/g 纯度 芽率/% 5 DB15/T 2086—2021 附 录 C （资料性） 向日葵列当寄生调查表 表C.1 向日葵列当寄生调查表 接种 品种名称 6 天后开始调查 生育时期 小区内向日葵植株数量 小区内被侵染植株数量 小区内列当数量