ICS65.020 CCSB16 SYJ 新疆维吾尔自治区食用菌协会团体标准 T/SYJ0002—2023 新疆黑木耳液体菌种制作技术规程 2023-09-25发布 2023-09-27实施 新疆维吾尔自治区食用菌协会  发布 全国团体标准信息平台 T/SYJ0002—2023 I目次 前 言............................................................................II 1范围.................................................................................1 2规范性引用文件.......................................................................1 3术语和定义...........................................................................1 4要求.................................................................................2 5液体菌种生产工艺.....................................................................3 全国团体标准信息平台 T/SYJ0002—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》、GB/T 20000.6—2006《标准化工作指南第6部分：标准化良好行为规范》、GB/T20001.10—2014《标准编 写规则第10部分：产品标准》、DB65/T2035.2—2003《标准体系工作导则第2部分：农业标准体系框 架与要求》的规定起草。 本文件由新疆理工学院提出。 本文件由新疆维吾尔自治区食用菌协会归口。 本文件起草单位：新疆理工学院、新疆黑木耳工程技术研究中心、中国检验认证集团新疆有限公司。 本文件主要起草人：张恒、王晓雨、魏佳荣、徐恒、魏骊霏、刘鹏、何伟、裴龙英、魏鹏。 全国团体标准信息平台 T/SYJ0002—2023 1新疆黑木耳液体菌种制作技术规程 1范围 本文件规定了黑木耳液体菌种制作的生产场地、设备设施、工艺流程、生产技术规程、使用方法以 及标签、贮存。 本文件适用于新疆区域内黑木耳液体菌种制作。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB5749生活饮用水卫生标准 GB/T12728食用菌术语 GB50073洁净厂房设计规范 NY5099无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求 NT/T528食用菌菌种生产技术规程 3术语和定义 GB/T12728界定界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 罐压jar-pressure 食用菌液体菌种培养过程中培养器保持的空气压力。单位：Mpa 通风量quantityofaeration 液体菌种培养过程中每分钟通入培养基中的无菌空气的量。用V/V（培养基体积/通入空气体积） 表示。 接种量inoculum 接入培养器中的菌种的数量，以菌种体积与培养基体积的百分比表示。 液体菌种菌龄ageofliquidspawn 菌种接入培养基开始计算的液体菌种生长发育时间。 空消sterilizingfermentor 全国团体标准信息平台 T/SYJ0002—2023 2利用蒸汽对无物料的发酵罐及附属设备进行加热灭菌的过程。 实消intermittentsterilization 将蒸汽通入装有培养基的发酵罐中进行加热灭菌的过程。 摇瓶液体菌种liquidspawninshakeflask 装在玻璃三角瓶内在摇床上恒温震荡培养的液体菌种。 4要求 生产场地 4.1.1基本要求 环境应干净整洁、空气优良、通风良好、水源充足且符合GB5749生活饮用水卫生标准、排水畅通、 电源充足、交通便利。 4.1.2环境卫生要求 应符合NY/T528食用菌菌种生产技术规程的规定。 生产设施设备 4.2.1厂房设置和布局 应符合NY/T528食用菌菌种生产技术规程的规定。 4.2.2发酵间 应按照GB50073洁净厂房设计规范执行，地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，排水坡 度1%-1.5%，排水沟必须是圆弧式不锈钢的明沟；墙角为圆角，墙壁和天花板应能防潮、防霉、防水、 易清洗。 4.2.3接种间 应按照GB50073洁净厂房设计规范执行，液体菌种接种间设置缓冲间；入口处设置洗手、车间设封 闭式废物桶，安装排气管道或者排风设备，门窗应设置防蚊蝇纱网。 4.2.4主要仪器设备 应配备水处理设备、液体菌种培养器、空气压缩机、空气过滤器、液体菌种接种器、高压蒸汽灭菌 锅、蒸汽锅炉、净化工作台、恒温培养箱、恒温摇床、冰箱、显微镜、磁力搅拌机、磅秤、天平、酸 度计等。在经常停电的地方应自备电源（发电机）。 4.2.5主要生产用具 全国团体标准信息平台 T/SYJ0002—2023 3应配备玻璃三角瓶、接种机、试管、量杯量筒、玻璃漏斗、培养皿、定量定性滤纸、精密pH试纸等 生物实验室常规用品。 培养基质 原材料应符合NY5099无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求的规定。 生产品种 4.4.1选用高产、优质、抗逆性强、商品性好的黑木耳品种，使用经省级以上农作物品种审定委员会 登记的品种，并且从具有相应技术资质的供种单位引种且种性清楚。 4.4.2菌种生产过程应符合NY/T528食用菌菌种生产技术规程的要求。 5液体菌种生产工艺 工艺流程 制备母种 5.2.1容器 使用18mm*180mm或20mm*200mm玻璃试管，试管应保持清洁、干燥。 5.2.2培养基配方 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（简称PDA培养基）：马铃薯200g,葡萄糖20g，琼脂20g,水1000mL，PH值 自然。 综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA培养基）：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁 0.5g，琼脂20g，水1000mL，PH值自然。罐口 接种实消 冷却 液体菌 种培养 基制作加水 空消培养罐 调试培养基 入罐液体 菌种发酵 培养 无菌 空气专用母种 培养基制作专用母种培 养基灭菌专用母种培 养基接种 培养母种 摇瓶液体菌种 专用母种活化 全国团体标准信息平台 T/SYJ0002—2023 45.2.3灭菌 高压蒸汽灭菌，在121℃，0.11MPa的压力下，维持30min。 5.2.4接种 在超净工作台上严格按无菌操作接种。接种完成后，在试管上注明菌种名称、接种时间。 5.2.5培养 根据黑木耳菌种的生长要求，给予24℃-25℃的培养温度，保持空气相对湿度65%-75%，避光培养。 5.2.6留样 菌种应留样备查，留样的数量应以每个批次母种3支。于4℃-6℃下贮存，贮存至该批菌种出第一潮 耳。 制备摇瓶液体菌种 5.3.1容器 采用1000ml的常规三角瓶，三角瓶应保持清洁、干燥。 5.3.2培养基配方 葡萄糖3%，豆饼粉2%，玉米粉1%，酵母粉，磷酸二氢钾0.1%，碳酸钙0.2%，硫酸镁0.05%，PH 值自然。 可溶性淀粉3%-6%，蔗糖1%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，酵母膏0.1%，PH值自然。 5.3.3摇瓶培养基制作 按照摇瓶培养基配方称取原料，先称取豆饼粉和玉米粉，混合后用四层纱布包好扎紧，开水煮沸 20min,捞出，用四层纱布过滤定容，加入其余的原料至溶解。 5.3.4装液量 将制备好的培养基液装入三角瓶中，每瓶装量为400ml，用硅胶塞封口。 5.3.5灭菌 同5.2.3高压蒸汽灭菌法。 5.3.6接种 将灭菌后的培养基瓶冷却至30℃以下，在超净工作台内接摇瓶种，超净工作台常规消毒后，每瓶在 液面接入0.5cm2斜面母种3块～5块，菌种块尽量少带培养基，使菌丝面朝上，菌种块必须漂浮在液面上， 接种结束后塞好硅胶塞。 全国团体标准信息平台 T/SYJ0002—2023 55.3.7培养 将接种后的三角瓶放入25℃恒温箱中静止培养2天-3天，待接种块在培养液面生长到1cm时，将该三 角瓶放在140转/分钟的回旋式摇床上震荡培养，在培养温度25℃、空气相对湿度65%～75%、避光条件下 培养7天后制得摇瓶液体菌种。 制备液体菌种专用母种 5.4.1容器 采用500ml的常规三角瓶，三角瓶应保持清洁、干燥。 5.4.2专用母种配方 杂木屑77%，麸皮20%，红糖2%，石膏1%，料：水=1:1.3，PH值自然。 注：杂木屑、麸皮用20目筛子过筛，用过筛后的细碎木屑和麸皮。 5.4.3专用母种培养基制作 按照专用母种培养基配方称取原料，将各组分干拌均匀后再加水反复翻拌，直至翻拌均匀。 5.4.4装料量 将制备好的专用母种培养基装入500ml的三角瓶内，料面要压平、压实，每瓶装料量450ml,擦净瓶 口，塞上硅胶塞封口。 5.4.5灭菌 将装料的三角瓶放入高压锅内进行灭菌，在温度达到121℃、压力0.15MPa时开始计时，维持90min。 待瓶内温度降至30℃以下是备用。 5.4.6接种 在超净工作台内，用灭好菌的吸管将摇瓶液体菌种接入到灭过菌的专用母种培养基上，接种量10ml/ 瓶。接种完成后，在试管上注明品种名称、接种时间。 5.