ICS65.020.01 CCS B 16 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5940—2025 2025‑12‑11发布 2026‑07‑01实施云杉帚锈病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Chrysomyxa arctostaphyli 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5940—2025 前 言 本文件按照 GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：中国海关科学技术研究中心 、中国科学院微生物研究所 、北京林电伟业电子技术有 限公司、大连海关技术中心 、长春海关技术中心 、南宁海关技术中心 、海口海关技术中心 、拱北海关技术中 心、西藏农牧学院 、宁波海关 、南京海关技术中心 、武汉海关技术中心 、中国质量检验检测科学研究院 、福 州海关技术中心 、阿拉山口海关技术中心 、成都海关技术中心 、青岛海关技术中心 、中国农业科学院蔬菜 花卉研究所 。 本文件主要起草人 ：王艺凯、蔡磊、赵鹏、任荔荔、李鑫、王有福、魏春艳、王准、杜智欣、蔡波、张卫东、 巩文峰、刘芳、段维军、吴翠萍、王振华、李明福、于文涛、李兰、邵宝林、高宏伟、郑春生、李宝聚、柴阿丽、 祝天宇。 Ⅰ1SN/T5940—2025 云杉帚锈病菌检疫鉴定方法 1范围 本文件描述了云杉帚锈病菌的检疫鉴定方法 。 本文件适用于云杉帚锈病菌的检疫鉴定 。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文件 ，仅 该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 SN/T2589植物病原真菌检测规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 性孢子器 spermogonium 由担孢子萌发形成的单核菌丝体在侵染寄主时形成的锈菌性器官 。 3.2 性孢子 spermatium 性孢子器中产生的单核孢子 。 3.3 锈孢子器 aecium 由性孢子与受精丝结合或与单核菌丝结合产生的双核次生菌丝组织 。 3.4 锈孢子 aeciospore 锈孢子器中产生的串生 、单胞、双核、黄色、球形或卵形的孢子 。 3.5 冬孢子 teliospore 由双核菌丝产生的厚壁有性孢子在生长后期形成的单胞或多胞的休眠孢子 。 3.6 冬孢子堆 telium 冬孢子聚集在一起形成的组织 。 3.7 担子basidium 寄主体上的冬孢子萌发形成的组织 。 3.8 担孢子 basidiospore 担子横裂四胞 ，每胞生一小柄 ，其上着生单胞 、无色或稍带黄色的孢子 。2SN/T5940—2025 4基本信息 中文名：云杉帚锈病菌 。 学名：Chrysomyxa arctostaphyli Dietel 。 异名：Melampsoropsis arctostaphyli 。 无性型名称 ：Peridermium coloradense 。 分类地位 ：真菌界Fungi，担子菌门 Basidimycota ，柄锈菌纲 Pucciniomycetes ，柄锈菌目 Pucciniales ， 金锈菌科 Chrysomyxaceae ，金锈菌属 Chrysomyxa 。 云杉帚锈病菌的其他信息见附录 A。 5方法原理 本文件以该病菌在寄主上的危害症状特征 、病原菌形态及基因特征等为云杉帚锈病菌的鉴定依据 。 6仪器设备和主要试剂 6.1仪器和器具 PCR仪、凝胶成像系统 、高速冷冻离心机 、水平凝胶电泳仪 、电子天平 （感量1/10000g） 、解剖镜、显 微镜、超净工作台 、高压灭菌锅 、低温冰箱等 。 6.2主要试剂 无菌双蒸水 、CTAB提取液（2% CTAB ，1.4mol/L NaCl ，20mmol/L EDTA ，100mmol/L Tris · HCl pH 8.0） 、Tris饱和酚、三氯甲烷 、异戊醇、异丙醇、无水乙醇 、RNase、TE缓冲液（pH8.0） 、PCR试剂 （包括TaqDNA聚合酶、dNTPs、PCR缓冲液） 、100bp Marker 、琼脂糖、GelRed核酸凝胶染料 、1×TBE 电泳缓冲液 。 除另有规定外 ，所有试剂均为分析纯或生化试剂 。 7样品的检查和制备 7.1症状检查 在云杉属植物上 ，观察植株枝条叶片和叶柄上是否出现锈孢子器 ，是否有明显 、紧凑的扫帚状且外观 黄色的丛枝病病症 ，树枝和树干上是否有腐烂 、纺锤形肿胀和橘黄色的次生帚状物 ，云杉属植物叶片上是 否呈现淡黄色病斑 ，斑点上是否集生针尖状小突起 ，具体症状见附录 A。 在熊果属植物上 ，观察叶片是否产生棕褐色的叶斑 ，是否有冬孢子堆 ，如果有棕褐色的叶斑 ，需要徒 手或者切片机切片镜检 。 7.2样品制备 用灭菌的移植钩挑取疑似样品病斑部位的病征 ，转移至载玻片的中央水滴中 ，在显微镜下观察 ，并拍 照记录。3SN/T5940—2025 8鉴定依据 8.1病菌形态特征 锈孢子阶段 ：锈孢子堆着生于云杉针叶 ，淡黄色长条状 ，包被膜随成熟破裂后露出锈孢子 。包被细胞 不规则形 ，锈孢子淡黄色至无色 ，卵形、椭圆形，大小（16μm~25μm）×（23μm~35μm） 。 冬孢子阶段 ：冬孢子堆着生于叶背 ，散生或聚生 ，黄棕色，蜡质。冬孢子无色 ，圆柱状或棱柱状 ，短圆， 两端圆形 ，壁光滑，无色，表面无纹饰 ，厚度均匀 ，链状排列 ，大小（13μm~18μm）×（23μm~64μm） 。 担孢子：担孢子圆形 、椭圆形或长椭圆形 ，孢子大小 （7.5μm~8μm）×（8.5μm~9.5μm） 。 具体症状见附录 B。 8.2核糖体DNA序列分析 将带症状部位处锈孢子堆或者冬孢子堆切下后进行 DNA提取，采用引物对 ITS4‑BRf/LR 5和 ITS5/ITS4BR进行PCR扩增，用于获得核糖体内转录间隔区 （ITS）和28S核糖体大亚基 （LSU）序列。 具体操作按照附录 C。基因序列见附录 D和附录E。 9结果判定 若样品上症状符合 7.1典型的症状特征 ，锈孢子或冬孢子或担孢子的形态特征符合 8.1的孢子特征 ， 判定检出云杉帚锈病菌 。 样品上不具有典型的症状特征 ，或未见典型的孢子形态特征 ，但扩增得到的 LSU和ITS序列为云杉 帚锈病菌序列时 ，则判定检出云杉帚锈病菌 。 10结果记录与样品保存 10.1样品保存与处理 检出云杉帚锈病菌的样品应妥善保存 。保存期满后应经过高压灭菌后方可丢弃 。 10.2结果记录与资料保存 妥善保存实验记录及相关结果图片资料 。4SN/T5940—2025 附 录 A （资料性） 云杉帚锈病菌的其他信息 A.1寄主植物与分布 寄主植物与分布见表 A.1。 表A.1寄主植物与分布表 植物属名 熊果属（Arctostaphylos ） 云杉属（Picea）寄主植物名称 内华达熊果 （A.nevadensis ） 内华达熊果科罗拉多变种 （A.nevadensis var .coloradensis ） 展枝熊果 （A.patula） 熊果（A.uva‑ursi） 欧洲云杉 （P.abies） 欧洲云杉 （P.abies） 恩格曼云杉 （P.engelmannii ） 恩格曼云杉 （P.engelmannii ） 白云杉（P.glauca） 白云杉（P.glauca） 黑云杉（P.mariana） 垂枝蓝云杉 （P.pungens） 红云杉（P.rubens） 巨云杉（P.sitchensis ） 巨云杉（P.sitchensis ）地理分布 美国 美国美国 加拿大 美国 加拿大 美国 加拿大 美国 加拿大 美国 加拿大 美国 加拿大 加拿大 美国生活史阶段 冬孢子阶段 冬孢子阶段冬孢子阶段冬孢子阶段锈孢子阶段 锈孢子阶段 锈孢子阶段 锈孢子阶段 锈孢子阶段 锈孢子阶段 锈孢子阶段锈孢子阶段 锈孢子阶段 锈孢子阶段 锈孢子阶段 A.2为害症状 在云杉属上 ，最初的症状是夏天针叶变白 。休眠芽的萌动产生显著而紧密的丛枝 （四季皆可发生 ） ， 丛枝着生黄绿色针叶 ，在表皮下产生气味难闻的性孢子 。接着产生锈孢子 ，使丛枝呈橘黄色 。针叶随即 死亡，并在秋天脱落 ，剩下的丛枝在冬季死亡 。有时在主干和侧枝上形成溃疡 、纺锤形肿胀和次生丛枝 。 树失去活力 ，并普遍发生枯梢 、死枝及死树 。极少数情况下 ，在云杉林中有 25%以上的树被侵染 ；产生丛 枝的树少于 1%。非锈菌引起的针叶树丛枝病的叶全年都保持正常的暗绿色 ；只有少数针叶脱落 。 在熊果上 ，春末，锈病最引人注目 ，能产生棕褐色的叶斑 ，在叶背面的病斑上 ，产生成群的橘黄褐色 、 蜡质的冬孢子堆 。春末，在云杉的当年生针叶上产生大量的性孢子 。病原菌侵染主干和枝干的树皮和外 层木质部 。锈孢子产生在夏天 ，并侵染熊果 Arctostaphylos uva‑ursii 。产生在熊果上的冬孢子在入夏后 可侵染云杉 。见图A.1、图A.2。