中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 禽蛋及制品中对羟基苯甲酸酯类 残留量的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 Determination of p‑hydroxybenzoate residues in poultry eggs and products — LC‑MS/MS methodICS 67.050 CCS X 04 2025 ‑12‑11发布 2026 ‑07‑01实施 中华人民共和国海关总署 　发 布 SN/T 5894—2025SN/T 5894—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：中华人民共和国福州海关 。 本文件主要起草人 ：陈舒奕、杨方、钟茂生、刘正才、朱品玲、翁才振、林毅、严飞、张悦琳。 ⅠSN/T 5894—2025 禽蛋及制品中对羟基苯甲酸酯类 残留量的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 1 范围 本文件描述了禽蛋及制品中对羟基苯甲酸酯类残留量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法 。 本文件适用于鸡蛋 、松花蛋、咸蛋、蛋白粉中对羟基苯甲酸甲酯 、对羟基苯甲酸乙酯 、对羟基苯甲酸丙 酯、对羟基苯甲酸丁酯的测定 ，其他禽蛋及制品参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 。 3 术语与定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 方法提要 试样经乙腈超声提取 ，用亚铁氰化钾 -乙酸锌沉淀蛋白质 ，取上清液供液相色谱 -质谱 /质谱仪检测 ， 内标法定量 。 5 试剂和材料 除非另有说明 ，本方法所用试剂均为分析纯 ，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇（CH 3OH） ：色谱纯。 5.1.2 乙腈（CH 3CN） ：色谱纯。 5.1.3 氯化钠（NaCl） 。 5.1.4 亚铁氰化钾 ［K4Fe（CN）6］ 。 5.1.5 乙酸锌［ （CH 3COO）2Zn］ 。 5.2 试剂配制 5.2.1 亚铁氰化钾溶液 （106 g/L） ：称取亚铁氰化钾 106 g，加水溶解并定容至 1 000 mL。 1SN/T 5894—2025 5.2.2 乙酸锌溶液 （219 g/L） ：称取乙酸锌 219 g，加水溶解并定容至 1 000 mL。 5.3 标准物质 5.3.1 对羟基苯甲酸甲酯标准物质 （C8H8O3，CAS号：99‑76‑3） ：纯度 ≥99%，或经国家认证并授予标准物 质证书的标准品 。 5.3.2 对羟基苯甲酸乙酯标准物质 （C9H10O3，CAS号：120‑47‑8） ：纯度 ≥99%，或经国家认证并授予标准 物质证书的标准品 。 5.3.3 对羟基苯甲酸丙酯标准物质 （C10H12O3，CAS号：94‑13‑3） ：纯度 ≥99%，或经国家认证并授予标准 物质证书的标准品 。 5.3.4 对羟基苯甲酸丁酯标准物质 （C11H14O3，CAS号：94‑26‑8） ：纯度 ≥99%，或经国家认证并授予标准 物质证书的标准品 。 5.3.5 同位素内标物 ：氘代 -对羟基苯甲酸甲酯 D4标准物质（C8H4D4O3，CAS号：362049 ‑51‑2，纯度 ≥99%） ， 或经国家认证并授予标准物质证书的标准品 。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 对羟基苯甲酸酯类标准储备液 （1 000 μg/mL） ：分别准确称取适量的对羟基苯甲酸酯类标准物质 （精确至 0.1 mg） ，用甲醇溶解稀释 ，配制成质量浓度为 1 000 μg/mL的标准储备液 ，混匀，将溶液转移至 棕色玻璃容器中 ，4 ℃下避光保存 ，有效期 12个月。 5.4.2 同位素内标物标准储备液 （1 000 μg/mL） ：准确称取同位素内标物标准物质 （精确至 0.1 mg） ，用甲 醇溶解稀释 ，配制成质量浓度为 1 000 μg/mL的同位素内标物标准储备液 ，混匀，将溶液转移至棕色玻璃 容器中，4 ℃下避光保存 ，有效期 12个月。 5.4.3 对羟基苯甲酸酯类混合标准中间液 （50 μg/mL） ：准确吸取适量的对羟基苯甲酸酯类标准储备液 （5.4.1） ，用甲醇稀释 ，配制成 50 μg/mL的混合标准中间液 ，混匀，将溶液转移至棕色玻璃容器中 ，4 ℃下 避光保存 ，有效期 6个月。 5.4.4 同位素内标物标准中间液 （50 μg/mL） ：准确吸取适量的同位素内标物标准储备液 （5.4.2） ，用甲醇 稀释，配制成 50 μg/mL的同位素内标物标准中间液 ，混匀，将溶液转移至棕色玻璃容器中 ，4 ℃下避光保 存，有效期 6个月。 5.4.5 对羟基苯甲酸酯类混合标准中间工作液 （1 μg/mL） ：准确吸取适量的对羟基苯甲酸酯类混合标准 中间液（5.4.3） ，用甲醇稀释 ，配制成 1 μg/mL的混合标准中间工作液 ，混匀，临用时现配 。 5.4.6 同位素内标物标准中间工作液 （1 μg/mL） ：准确吸取适量的同位素内标物标准中间液 （5.4.4） ，用 甲醇稀释 ，配制成 1 μg/mL的同位素内标物标准中间工作液 ，混匀，临用时现配 。 5.4.7 标准系列工作液 ：分别准确吸取对羟基苯甲酸酯类混合标准中间工作液 （5.4.5）12.5 μL、25 μL、 50 μL、125 μL、250 μL和500 μL于10 mL容量瓶中 ，再分别加入同位素内标 物标准中间工作液 （5.4.6） 125 μL，用甲醇定容至刻度 ，摇匀。标准系列工作液中对羟基苯甲酸酯类质量浓度分别为 1.25 ng/mL、2.5 ng/mL、 5.0 ng/mL、12.5 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL，同位素内标的质量浓度为 12.5 ng/mL，临用时现配 。 5.5 材料 5.5.1 微孔滤膜 ：0.22 μm聚四氟乙烯 （PTFE）有机滤膜 ，或相当者 。 5.5.2 塑料离心管 ：50 mL。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -质谱 /质谱联用仪 ：配有电喷雾离子源 （ESI） 。 2SN/T 5894—2025 6.2 超声波清洗器 。 6.3 组织捣碎机 。 6.4 涡旋混合器 。 6.5 离心机：最大转速不低于 5 000 r/min。 6.6 分析天平 ：感量 0.000 1 g和 0.01 g。 7 试样制备与保存 7.1 试样制备 7.1.1 带壳的禽蛋或蛋制品 选取有代表性的样品约 500 g，去壳后用组织捣碎机充分捣碎混匀 ，装入洁净容器 ，密封，做好标记 。 7.1.2 不带壳的蛋制品 选取有代表性的样品约 500 g，用组织捣碎机充分捣碎混匀 ，装入洁净容器 ，密封，做好标记 。 7.2 试样保存 将试样按照测试样和留存样分别存放 ，测试样置于 0 ℃~ 4 ℃条件下避光保存 ，留存样置于 -20 ℃~ -16 ℃条件下避光保存 。 8 测定步骤 8.1 提取和净化 8.1.1　鲜蛋、再制蛋、液蛋制品 称取试样 2.5 g（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL离心管中 ，加入 1 g氯化钠，再加入 0.125 mL的1 μg/mL 同位素内标物标准中间工作液 （5.4.6）和10 mL乙腈，涡旋混匀 ，置于 30 ℃水浴超声提取 10 min，加亚铁 氰化钾溶液 （5.2.1）1 mL和乙酸锌溶液 （5.2.2）1 mL，混匀，于5 000 r/min离心 5 min，取上清液过微孔滤 膜（5.5.1）后，供液相色谱 -质谱 /质谱测定 。 8.1.2 干蛋制品 称取试样 2.5 g（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL离心管中 ，加入 2.5 mL~ 5.0 mL水，加入 1 g氯化钠，之 后的操作同 8.1.1。 8.2 测定 8.2.1 液相色谱参考条件 8.2.1.1 色谱柱：C18柱，3.0 mm ×100 mm，粒径 1.8 μm，或相当者 。 8.2.1.2 流动相：水∶乙腈，梯度洗脱 。详见表 1。 表1　流动相条件 0.0 0.30 85 15时间 /min 流速 /（mL/min） 水/% 乙腈 /% 3SN/T 5894—2025 2.0 2.1 9.0 9.10.30 0.30 0.30 0.3085 4040 8515 6060 15表1　流动相条件 （续） 时间 /min 流速 /（mL/min） 水/% 乙腈 /% 8.2.1.3 进样量：10 μL。 8.2.1.4 柱温：30 ℃。 8.2.2 质谱参考条件 8.2.2.1 离子源：电喷雾离子源 。 8.2.2.2 扫描方式 ：负离子扫描 。 8.2.2.3 检测方式 ：多反应监测 （MRM） 。 8.2.2.4 质谱 /质谱参考条件见附录 A。 8.2.3 定性测定 按照上述条件测定样品和标准工作溶液 ，样品中待测物质的保留时间与标准工作溶液的保留时间偏 差在 ±2.5%之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致 ，相对丰度偏差 不超过表 2规定的范围 ，则可判定为样品中存在相应的待测物 。 表2　定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 /% 最大允许