中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 出口保健食品中维生素 K1、K2的测定 液相色谱法 Determination of vitamin K 1、K2 in health foods for export —Liquid chromatographyICS 67.040 CCS X 83 2025 ‑12‑11发布 2026 ‑07‑01实施 中华人民共和国海关总署 　发 布 SN/T 5885—2025SN/T 5885—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：广州海关技术中心 、广州白云机场海关综合技术服务中心 、深圳海关技术中心 、 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 。 本文件主要起草人 ：徐娟、赵勇、钟钰、张美金、翁文川、柏建山、何淑华、康海宁、姚宇星、赵惠如、 伊雄海。 ⅠSN/T 5885—2025 出口保健食品中维生素 K1、K2的测定 液相色谱法 1 范围 本文件描述了片剂 、颗粒剂、软胶囊和软糖类保健食品中维生素 K1和维生素 K2（七烯甲萘醌 ）的液 相色谱检测方法 。 本文件适用于片剂 、颗粒剂、软胶囊和软糖类保健食品中维生素 K1和维生素 K2（七烯甲萘醌 ）的测 定，其他保健食品参照执行 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中规范性引用而构成本文件 必不可少的条款 。其中，注日期的引用文件 ， 仅该日期对应 的版本适用于本文件 ；不注明日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 方法提要 片剂、颗粒剂样品经淀粉酶酶解 ，采用正己烷和二氯甲烷提取维生素 K1、K2；软胶囊样品采用乙醇提 取维生素 K1、K2；软糖样品采用正己烷和二氯甲烷提取维生素 K1、K2；提取液经反相液相色谱分离 ，锌还 原柱柱后衍生 ，高效液相色谱 ‑荧光检测器检测 ，外标法定量 。 5 试剂和材料 除另有说明外 ，本方法所用试剂均为分析纯 ，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 无水乙醇 ：色谱纯。 5.1.2 甲醇：色谱纯。 5.1.3 四氢呋喃 ：色谱纯。 5.1.4 正己烷：色谱纯。 5.1.5 二氯甲烷 ：色谱纯。 5.1.6 冰乙酸：色谱纯。 5.1.7 氯化锌。 5.1.8 无水乙酸钠 。 1SN/T 5885—2025 5.1.9 淀粉酶：酶活力 ≥1.5 U/mg。 5.1.10　流动相 ：称取 1.5 g氯化锌（5.1.7） 、0.5 g无水乙酸钠 （5.1.8）于1 000 mL烧杯中，加入 500 mL甲 醇（5.1.2） 、100 mL四氢呋喃 （5.1.3） 、0.3 mL冰乙酸（5.1.6） ，转移至 1 000 mL容量瓶中 ，超声溶解后 ，加 入甲醇定容至刻度 ，混匀，用0.22 μm有机相滤膜过滤 。 5.1.11 维生素 K1标准品（Vitamin K 1，C31H46O2，CAS号：84‑80‑0） ：纯度 ≥98%，或具有有证标准证书的 标准物质 。 5.1.12 维生素 K2标准品七烯甲萘醌 （Menlaquinone 7，C46H64O2，CAS号：2124 ‑57‑4） ：纯度 ≥98%，或具 有有证标准证书的标准物质 。 注： 标准物质能使用满足溯源要求的商品化标准溶液 。 5.1.13 标准储备液 ：分别准确称取维生素 K1、维生素 K2各10 mg（精确到 0.1 mg）于10 mL棕色容量瓶 中，用无水乙醇 （5.1.1）溶解并定容至刻度 ，摇匀，配制成浓度均为 1 000 mg/L的维生素标准储备溶液 （维生素 K1标准储备液临用前进行浓度校正 ，浓度校正方法见附录 A） ，于-18 ℃以下避光保存 ，有效 期6个月。 5.1.14 混合标准中间溶液 ：分别准确吸取适量的标准储备液于 25 mL棕色容量瓶中 ，用无水乙醇 （5.1.1）定容至刻度 ，配成混合标准中间溶液 ，维生素 K1、维生素 K2浓度均为 10.0 mg/L。于-18 ℃以下 避光保存 ，有效期 3个月。 5.1.15 混合标准使用液 ：准确吸取混合标准中间液 2.5 mL于25 mL棕色容量瓶中 ，用无水乙醇 （5.1.1） 定容至刻度 ，配成混合标准使用液 ，维生素 K1、维生素 K2浓度均为 1.00 mg/L。摇匀。 5.1.16 混合标准工作溶液 ：分别准确吸取混合标准使用液 0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、 5.00 mL于10 mL棕色容量瓶中 ，用无水乙醇 （5.1.1）定容至刻度 ，得到混合标准工作溶液质量浓度分别 为0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L。 5.2 材料 5.2.1 具塞比色管 ：25 mL。 5.2.2 聚丙烯离心管 ：50 mL。 5.2.3 棕色容量瓶 ：10 mL、25 mL、100 mL、1 000 mL。 5.2.4 有机相微孔滤膜 ：0.22 µm。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪 ：配荧光检测器 。 6.2 分析天平 ：感量 1 mg和0.1 mg。 6.3 紫外可见分光光度计 。 6.4 高速离心机 ：最大转速不低于 6 000 r/min。 6.5 涡旋振荡器 。 6.6 恒温水浴振荡器 。 6.7 氮吹仪。 6.8 超声波发生器 。 7 测定步骤 7.1 试样制备 7.1.1 片剂：取20片试样，研磨，混匀，避光保存 ，制样后尽快测定 。 2SN/T 5885—2025 7.1.2 颗粒剂：取10袋试样，倾出内容物 ，研磨，混匀，避光保存 ，制样后尽快测定 。 7.1.3 软胶囊：取20粒胶囊，倾出内容物 ，混匀，避光保存 ，制样后尽快测定 。 7.1.4 软糖：取10颗软糖，去除包装纸 ，剪碎或粉碎 ，混匀，避光保存 ，制样后尽快测定 。 7.2 样品预处理 警示：操作过程应避光进行 。 7.2.1 片剂、颗粒剂试样 称取经混匀的试样 0.5 g（精确到 0.001 g）于50 mL离心管中 ，加入 5 mL温水溶解 ，混匀，加入 0.3 g 淀粉酶（5.1.9） （不含淀粉的样品可以不加淀粉酶 ） ，加盖，涡旋 10 min，混匀后，置于 40 ℃ ± 2 ℃恒温水浴 振荡器中振荡 3 h以上，使其充分酶解 。取出酶解好的试样 ，加入 10 mL无水乙醇 （5.1.1） ，混匀后再加入 10 mL正己烷（5.1.4） ，涡旋或振荡提取 15 min，6 000 r/min离心 5 min，转移上清液至 25 mL比色管中 ， 向下层溶液再加入 10 mL二氯甲烷 （5.1.5） ，涡旋或振荡提取 15 min，6 000 r/min离心 5 min，取下层合并 至上述比色管中 ，用二氯甲烷 （5.1.5）定容，涡旋摇匀 。移取上述提取液 1 mL 40 ℃条件下氮气轻吹至干 ， 加1 mL无水乙醇 （5.1.1）涡旋 5 min溶解，经0.22 μm有机相微孔滤膜后供高效液相色谱仪测定 。 7.2.2 软胶囊试样 称取经混匀的试样 0.5 g（精确至 0.001 g）于50 mL离心管中 ，加入 10 mL无水乙醇 （5.1.1） ，摇匀， 涡旋提取 15 min，6 000 r/min离心 5 min，将上清液转移至 25 mL比色管中 。向下层溶液再加入 10 mL无 水乙醇（5.1.1） ，重复操作一次 ，合并上清液至上述比色管中 ，用无水乙醇 （5.1.1）定容，摇匀。经0.22 μm有 机系微孔滤膜后供高效液相色谱仪测定 。 7.2.3 软糖试样 称取经混匀的试样 2.0 g（精确到 0.001 g）于50 mL离心管中 ，加入 5 mL温水溶解 ，混匀，加入 10 mL 无水乙醇（5.1.1） ，混匀后加入 10 mL正己烷（5.1.4） ，涡旋或振荡提取 15 min，6 000 r/min离心 5 min，转移 上清液至 25 mL比色管中 ，向下层溶液再加入 10 mL二氯甲烷 （5.1.5） ，涡旋或振荡提取 15 min， 6 000 r/min 离心 5 min，取下层合并至上述比色管中 ，用二氯甲烷 （5.1.5）定容，摇匀。取上述提取液 1 mL 40 ℃条件 下氮气轻吹至干 ，加1 mL无水乙醇 （5.1.1）涡旋 5 min溶解，经0.22 μm有机相微孔滤膜后供高效液相色 谱仪测定 。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考 条件如下 。 a）色谱柱：C18柱，250 mm× 4.6 mm（内径） ，5 μm，或性能相当者 。 b）锌还原柱 ：4.6 mm× 50 mm（锌粉平均粒径 70 μm。此锌还原柱连接于色谱柱后 ） 。 c）柱温：35 ℃。 d）流动相：按5.1.10配制，等度洗脱 。 e）流速：1.0 mL/min 。 f）荧光检测器 ：激发波长为 243 nm，发射波长为 430 nm。 g）进样量：10 μL。 3SN/T 5885—2025 7.3.2 测定 对标准系列工作溶液和试样溶液分别进行色谱分析 ，试样溶液中待测物的响应值应在仪器线性响应