中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口婴幼儿配方食品中多种母乳 低聚糖的测定　超高效液相色谱法 Determination of human milk oligosaccharides in imported and exported infant formula food —Ultra performance liquid chromatography methodICS 67.050 CCS C 54 2025 ‑12‑11发布 2026 ‑07‑01实施 中华人民共和国海关总署 　发 布 SN/T 5880—2025SN/T 5880—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：中国海关科学技术研究中心 、雀巢研发 （中国）有限公司雀巢食品安全研究院 、北京 大学公共卫生学院 、中华人民共和国武汉海关 、君乐宝乳业集团股份有限公司 。 本文件主要起草人 ：冯鑫、鲍蕾、别玮、王金花、高芳、卜汉萍、韩深、许雅君、汪龙飞、王鹏、赵晓亚、 王珮玥、赵娟、罗健、杨春杰、张玲改、李玢玢、乔丽娜、邹婉莹。 ⅠSN/T 5880—2025 进出口婴幼儿配方食品中多种母乳 低聚糖的测定　超高效液相色谱法 1 范围 本文件描述了进出口婴幼儿配方食品中 2’‑岩藻糖基乳糖 、3‑岩藻糖基乳糖 、双岩藻糖基乳糖 、乳 糖‑N‑四糖、乳糖 ‑N‑新四糖、3’‑唾液酸乳糖和 6’‑唾液酸乳糖的超高效液相色谱测定方法 。 本文件适用于进出口婴儿配方食品 、较大婴儿配方食品 、幼儿配方食品和特殊医学用途婴儿配方食 品中 2’‑岩藻糖基乳糖 、3‑岩藻糖基乳糖 、双岩藻糖基乳糖 、乳糖 ‑N‑四糖、乳糖 ‑N‑新四糖、3’‑唾液酸乳糖 和6’‑唾液酸乳糖的测定 ，其他乳粉及液态乳参照执行 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB 1886 .174　食品安全国家标准　食品添加剂　食品工业用酶制剂 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 33409　β‑半乳糖苷酶活性检测方法　分光光度法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 方法提要 样品经酶处理后 ，通过 2‑氨基苯甲酰胺将 7种母乳低聚糖衍生化 ，衍生物经超高效液相色谱进行分 离，荧光检测器检测 ，内标法定量 。 5 试剂和材料 除另有说明外 ，所用试剂均为分析纯 ，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 乙腈（C2H3N） ：色谱纯。 5.1.2 甲酸铵（CH 5NO 2） ：色谱纯。 5.1.3 甲酸（CH 2O2） ：色谱纯。 5.1.4 乙酸（C2H4O2） 。 5.1.5 二甲基亚砜 （C2H6OS） 。 5.1.6 乙酸钠（C2H3O2Na） 。 1SN/T 5880—2025 5.1.7 2‑氨基苯甲酰胺 （C7H8N2O） 。 5.1.8 2‑甲基吡啶 ‑N‑甲硼烷（C6H10NB） 。 5.1.9 β‑半乳糖苷酶混悬液 ：黑曲霉来源 ，酶活力单位 ≥4 000 U/mL（Megazyme ，产品号：E‑BGLAN ）1）， 酶活力依照 GB/T 33409进行测定 。或其他等效 β‑半乳糖苷酶 。 5.1.10 淀粉葡萄糖苷酶 ：黑曲霉来源 ，酶活力单位 ≥8 U/mg（Roche diagnostics GmbH ，产品号： 11202367001 ）1） ，酶活力依照 GB 1886 .174进行测定 。或其他等效淀粉葡萄糖苷酶 。 5.2 溶液配制 5.2.1 二甲基亚砜 -乙酸溶液 ：分别量取 11.6 mL二甲基亚砜 （5.1.5）和5 mL乙酸（5.1.4）于50 mL试管 中，混匀。 5.2.2 2‑氨基苯甲酰胺衍生液 ：准确称取 0.6 g 2‑氨基苯甲酰胺 （5.1.7）和1.3 g 2‑甲基吡啶 ‑N‑甲硼烷 （5.1.8）于50 mL烧杯中，量取 12.5 mL二甲基亚砜 -乙酸溶液 （5.2.1）溶解，混合均匀 。该衍生液可在 -18 ℃条件下保存 3个月。 5.2.3 乙酸钠溶液 （0.2 mol/L） ：称取 8.2 g乙酸钠（5.1.6） ，用450 mL水溶解，用乙酸（5.1.4）调节 pH至 4.5后转移至 500 mL容量瓶中 ，用水定容至刻度 。 5.2.4 淀粉葡萄糖苷酶溶液 （70 U/mL） ：称取适量淀粉葡萄糖苷酶 （5.1.10） （换算为酶活力 700 U） ，用乙 酸钠溶液 （5.2.3）溶解后转移至 10 mL容量瓶中 ，用乙酸钠溶液 （5.2.3）定容至刻度 。该溶液应在试验当 日配制。 5.2.5 β‑半乳糖苷酶和淀粉葡萄糖苷酶混合酶液 ：准确移取 800 µL淀粉葡萄糖苷酶溶液 （5.2.4）及 200 µL β‑半乳糖苷酶混悬液 （5.1.9）于2 mL具旋盖离心管 （5.5.2）中，混匀。该溶液应在试验当日配制 。 5.2.6 甲酸铵溶液 （50 mmol/L ） ：称取 3.15 g甲酸铵（5.1.2） ，用950 mL水溶解，用甲酸（5.1.3）调节 pH 至4.5后转移至 1 L容量瓶中 ，用水定容至刻度 。 5.2.7 乙腈溶液 ：量取 400 mL乙腈（5.1.1）和100 mL水，于烧杯中混匀 。 5.3 标准品 5.3.1 7种母乳低聚糖标准物质 ：纯度 ≥90.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品 。各化合物 基本信息见附录 A中表 A.1。使用时依据纯度进行折算 。 5.3.2 昆布三糖 （C18H32O16，CAS号：3256 ‑04‑0） ：纯度 ≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 品。使用时依据纯度进行折算 。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 7种母乳低聚糖标准储备液 ：准确称取 2’‑岩藻糖基乳糖标准品 50 mg（精确至 0.1 mg）和3‑岩藻糖 基乳糖、双岩藻糖基乳糖 、乳糖 ‑N‑四糖、乳糖 ‑N‑新四糖、3’‑唾液酸乳糖和 6’‑唾液酸乳糖标准品各 10 mg （精确至 0.1 mg） ，用水溶解并转移至 10 mL容量瓶中 ，用水定容至刻度 ，混匀。其中 2’‑岩藻糖基乳糖储 备液质量浓度为 5 mg/mL ，其余 6种母乳低聚糖储备液质量浓度为 1 mg/mL 。可将储备液分装至 2 mL 具旋盖离心管 （5.5.2）中，于-18 ℃保存，有效期 3个月。避免反复冻融 。 5.4.2 7种母乳低聚糖混合中间液 ：分别吸取 7种母乳低聚糖标准储备液 （5.4.1）各1 mL于10 mL容量 瓶中，加水定容至刻度 。其中 2’‑岩藻糖基乳糖质量浓度为 0.5 mg/mL ，其余 6种母乳低聚糖质量浓度 为0.1 mg/mL 。可将混合中间液分装至 2 mL具旋盖离心管 （5.5.2）中，于-18 ℃保存，有效期 1个月。 避免反复冻融 。 5.4.3 母乳低聚糖标准工作液 ：分别吸取 10 µL、50 µL、100 µL、200 µL、500 µL及1 000 µL母乳低聚糖 　　 1） 酶试剂由表述中的公司提供 。给出这一信息是为了方便标准的使用者 ，并不代表对该产品的认可 。如有其他产 品具有相同的效果 ，则可使用这些等效的产品 。 2SN/T 5880—2025 混合中间液 （5.4.2）于1 mL容量瓶中 ，加水定容至刻度 ，混匀。其中 2’‑岩藻糖基乳糖工作液的质量浓度 分别为 5 µg/mL、25 µg/mL、50 µg/mL、100 µg/mL、250 µg/mL 及500 µg/mL，其余 6种母乳低聚糖工 作液质量浓度为 1 µg/mL、5 µg/mL、10 µg/mL、20 µg/mL、50 µg/mL 及100 µg/mL。临用现配 。 5.4.4 昆布三糖内标储备液 （1.0 mg/mL） ：称取 10 mg昆布三糖标准品 （5.3.2） ，用水溶解后转移至 10 mL 容量瓶中 ，用水定容至刻度 ，混匀。-18 ℃保存，有效期 3个月。 5.4.5 昆布三糖内标工作液 （0.4 mg/mL） ：吸取昆布三糖内标 储备液（5.4.4）4.0 mL于10 mL容量瓶中 ， 用水定容至刻度 ，混匀。可将内标工作液分装至 2 mL具旋盖离心管 （5.5.2）中，-18 ℃保存，有效期 3个 月。避免反复冻融 。 注： 冷冻状态的标准溶液使用前需在室温条件下解冻 ，摇匀。 5.5 材料 5.5.1 微孔滤膜 ：0.22 µm，有机相。 5.5.2 具旋盖离心管 ：2 mL。 6 仪器和设备 6.1 超高效液相色谱仪 ：配荧光检测器 ；柱温箱可调节至 75 ℃。 6.2 天平：感量为 0.01 g和0.1 mg。 6.3 高速微量离心机 ：最大转速不低于 10 000 r/min。 6.4 恒温水浴振荡器 。 6.5 涡旋振荡器 。 6.6 pH计。 6.7 容量瓶：1 mL、10 mL、50 mL、500 mL、1 L。 6.8 可调移液器或刻度移液管 ：10 µL~ 1 000 µL。 7 分析步骤 7.1 样品处理 7.1.1 固体样品 （婴幼儿配方乳粉