说明:收录全网最新的团体标准 提供单次或批量下载
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌 血清型鉴定方法 Method for serotyping of Salmonella Typhimurium and Salmonella Enteritidis in poultryICS 67.050 CCS X 04 2025 ‑12‑11发布 2026 ‑07‑01实施 中华人民共和国海关总署  发 布 SN/T 5873—2025SN/T 5873—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1部分:标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 :中华人民共和国青岛海关 、宁波中钦检测科技有限公司 、北京陆桥技术股份有限 公司、中华人民共和国济南海关 。 本文件主要起草人 :唐静、许文娟、于娟娟、殷培军、刘娟娟、贾俊涛、辛学谦、李明哲、赵波、朱琳、刘文、 何京澄、李正义、姜英辉、赵晗、段效辉、张敏爱、叶佳楣、黄小华、王小叶、吴丽娜、张秋艳、马云、徐玮。 ⅠSN/T 5873—2025 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌 血清型鉴定方法 1 范围 本文件描述了禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法 。 本文件适用于禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型的鉴定 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本 (包括所有的修改单 )适用于本 文件。 GB 4789 .4 食品安全国家标准 食品微生物学检验  沙门氏菌检验 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适应于本文件 。 3.1 鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella Typhimurium 一种革兰氏阴性杆菌 ,属多价 O抗血清的 B群,发酵葡萄糖 ,不发酵乳糖 ,三糖铁试验产碱产酸 ,动 力阳性,H2S试验强阳性 ,脲酶试验阴性 。 3.2 肠炎沙门氏菌 Salmonella Enteritidis 一种革兰氏阴性杆菌 ,属多价 O抗血清的 D群,发酵葡萄糖 ,不发酵乳糖 ,三糖铁试验产碱产酸 ,动 力阳性,H2S试验强阳性 ,脲酶试验阴性 。 4 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外 ,其他设备和材料如下 。 4.1 冰箱:2 ℃~ 5 ℃。 4.2 恒温培养箱 :36 ℃± 1 ℃,42 ℃± 1 ℃。 4.3 均质器。 4.4 振荡器。 4.5 电子天平 :感量 0.1 g。 4.6 无菌锥形瓶 :容量 500 mL,250 mL。 4.7 无菌吸管 :1 mL(具0.01 mL刻度) 、10 mL(具0.1 mL刻度)或微量移液器及吸头 。 4.8 无菌培养皿 :直径 60 mm、90 mm。 4.9 无菌试管 :3 mm× 50 mm、10 mm× 75 mm。 1SN/T 5873—2025 4.10 电位 pH计:准确度为 0.01 pH。 4.11 全自动微生物生化鉴定系统 。 4.12 无菌毛细管 。 4.13 显微镜:光学显微镜 ,如有条件可配相差显微镜 ,放大 1 000倍或以上 。 4.14 载玻片和盖玻片 。 4.15 微孔板。 5 培养基和试剂 5.1 本文件所涉及培养基和试剂按照 GB 4789 .4的规定。 5.2 沙门氏菌 O多价、H多价、Vi、O∶4、O∶5、O∶9、O∶46、H∶i、H∶g、H∶m、H∶q、H∶s、H∶2诊断血清 。 注: 影响本文件实验结果的关键因素为沙门氏菌诊断血清 ,使用过程中参照附录 A的方法进行质量控制 。 5.3 生化鉴定试剂盒 。 5.4 脑心浸液肉汤 (BHI) 。 6 检验程序 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型检验程序见图 1。 0 0 0 )(U)HU )N T!K!8)R )T 0 5%!K!8 ) 8 8. *G !K!8&(#E=  '7U7+ 'E==#G )J ) LT!K!8 L5%!K!8           图1 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型检验程序 2SN/T 5873—2025 7 操作步骤 7.1 前增菌、增菌、分离和生化鉴定 沙门氏菌的前增菌 、增菌、分离和生化鉴定按 GB 4789 .4进行。对于生化鉴定确证为沙门氏菌阳性 的样品,需取营养琼脂平板上新鲜的纯培养物进行血清学鉴定 。 7.2 血清学鉴定 7.2.1 鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的抗原 表1列出了鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的抗原 。 表1 鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的抗原表 菌名 鼠伤寒沙门氏菌 肠炎沙门氏菌a a 除了 H∶g,m因子外,有些菌株还会有 H∶p或H∶f或H∶t因子。罕有第 2相为 H∶1,7因子的菌株 。 b 带有下划线的 O因子是由噬菌体溶原化产生的 。带有中括号的 O因子与噬菌体转化无关 。拉丁菌名 Salmonella Typhimurium Salmonella EnteritidisO抗原b 1,4, [5] ,12 1,9,12H抗原 第1相 i g,m第2相 1,2 — 7.2.2 检查培养物有无自凝性 在进行血清学分型前 ,首先要排除自凝集反应 。取营养琼脂平板上 36 ℃± 1 ℃过夜培养的纯培养物 作为玻片凝集试验用的抗原 。在洁净的玻片上 ,滴加一滴生理盐水 ,将待试抗原混合于生理盐水液滴内 , 使其成为均一的菌悬液 ,轻轻摇动玻片 30 s~60 s,观察待试抗原是否发生自凝集反应 。推荐在黑色背景 下进行观察 ,必要时可配合使用放大镜 ,若出现可见的菌体凝集 ,即认为待试抗原有自凝性 ,反之无自 凝性。 对于待试抗原有自凝性的菌株可以选择下列两种方法其中的任意一种来进一步判定有无自凝性 。 第一种方法是将无菌生理盐水更换为无菌水 ,进行自凝集反应 。第二种是将该菌株在半固体琼脂上培 养,用半固体琼脂上的培养物进行自凝集反应 。对于自凝集反应阳性的菌株不能进一步进行血清学分 型。对于自凝集反应阴性的菌株可进一步进行鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的血清学分型 。 7.2.3 O抗原检测方法 通常使用载玻片凝集法检测 O抗原。对于不同制造商生产的血清 ,可能会存在玻片上滴加血清的 量不同,血清和待测抗原的混合方式不同 ,作用时间长短不同和结果观察判读方式有差别等情况 。在使 用过程中 ,务必遵守制造商的说明进行具体操作 。常规的操作步骤是在玻片上划出 2个区域,一个区域 滴加 O抗血清进行检测 ,一个区域滴加无菌生理盐水作为对照 ,可以从平板 、试管或肉汤中取待测抗原 与O抗血清或无菌生理盐水混合成菌悬液 。将玻片轻轻地前后倾斜摇动混合 ,混合时间参照产品说明 书,随后观察是否凝集 。推荐在黑色背景下进行观察 ,任何程度的凝集现象 (有颗粒存在 )皆为阳性反应 。 O抗血清不凝集时 ,将待测菌株接种在琼脂含量较高的 (如2%~ 3%)培养基上 ,36 ℃± 1 ℃培养 18 h~ 24 h后,再进行 Vi抗原检测 ;若Vi抗原凝集 ,说明有 Vi抗原的存在 。当Vi抗原的存在而阻止了 O抗 原凝集反应时 ,可挑取菌苔于 1 mL无菌生理盐水中做成浓菌液 ,于酒精灯火焰上煮沸后再进行检测 。 3SN/T 5873—2025 7.2.4 H抗原检测方法 操作同 7.2.3。O抗原凝集后 ,用H抗原做凝集实验 ,H抗原不凝集可能是由于 H抗原发育不良 。 当H抗原发育不良时 ,将待试抗原接种在 0.55%~ 0.65%半固体琼脂平板的中央 ,待试抗原的菌落蔓延 生长时,取其菌落边缘部分的菌体进行凝集实验 ;或将待试抗原接种在装有 0.3%~ 0.4%半固体琼脂的 小玻璃管 1次~2次,培养后,自远端取菌培养后再进行凝集实验 。沙门氏菌常具有两种类型的 H抗原 (第1相和第 2相)反应,检出第 1相H抗原而未检出第 2相H抗原的或检出第 2相H抗原而未检出第 1相H抗原的,可在琼脂斜面上接种 1代~2代后再进行检测 。如仍只检出一个相的 H抗原,需要位相 变异的方法进行检测 。通过抑制显性的 H相,使第二个 H相得以表达和鉴定 。位相变异试验方法有很 多,如简易平板法 、小玻管法 、小套管法等 。最常用的是简易平板法 ,具体操作 :将0.35%~ 0.4%半固体 琼脂平板烘干表面水分 ,挑取因子血清 1环,滴在半固体平板表面 ,放置片刻 ,待血清吸收到琼脂内 ,在血 清部位的中央点种待检菌株 ,36 ℃± 1 ℃培养 18 h~24 h后,在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌进行检测 。 小玻管法和小套管法可参照 GB 4789 .4进行。 7.3 血清学分型 7.3.1 鼠伤寒沙门氏菌的血清学分型 先用 O∶4因子血清做凝集试验 。如果为阳性反应 ,则用 O∶5因子血清做凝集试验 。O∶5因子血清 存在阴性和阳性两种反应 。无论是哪种情况 ,都需要做 H∶i因子血清的凝集试验 。如果为阳性反应 ,则 用H∶2因子血清做凝集试验 。如果为阳性反应 ,则可判定为鼠伤寒沙门氏菌 ,反之则不是鼠伤寒沙门 氏菌。 7.3.2 肠炎沙门氏菌的血清学分型 先用 O

.pdf文档 SN-T 5873-2025 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法

文档预览
中文文档 10 页 50 下载 1000 浏览 0 评论 309 收藏 3.0分
温馨提示:本文档共10页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
SN-T 5873-2025 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法 第 1 页 SN-T 5873-2025 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法 第 2 页 SN-T 5873-2025 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法 第 3 页
下载文档到电脑,方便使用
本文档由 人生无常 于 2026-02-07 01:40:00上传分享
友情链接
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们微信(点击查看客服),我们将及时删除相关资源。