中华人民共和国出入境检验检疫行业标准ICS 67.050 CCS X 04 2025 ‑12‑11发布 2026 ‑07‑01实施 中华人民共和国海关总署 　发 布 SN/T 5870—2025 出口保健食品中烟酰胺单核苷酸 含量的测定 Determination of the content of nicotinamide mononucleotide in health foods for exportSN/T 5870—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：拱北海关技术中心 、珠海粤港食品安全检测有限公司 、广州市食品检验所 、中国标 准化研究院 、合肥海关技术中心 、深圳海关食品检验检疫技术中心 。 本文件主要起草人 ：冯家望、钱振杰、徐振林、陈敬、刘佳、何咏欣、唐食明、王宇、曾俊洁、宋伟、游淑珠、 康海宁、云振宇、兰韬。 ⅠSN/T 5870—2025 出口保健食品中烟酰胺单核苷酸 含量的测定 1 范围 本文件描述了保健食品中烟酰胺单核苷酸的液相色谱检测及液相色谱 -质谱 /质谱确证方法 。 本文件适用于片剂 、粉剂、糖果制品 、胶囊剂及口服液等保健食品中烟酰胺单核苷酸的测定和确证 ， 其他类型保健食品参照执行 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ，不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 烟酰胺单核苷酸 β‑nicotinamide mononucleotide 由核糖和烟酰胺衍生而来的核苷酸 ，存在于各种生物体内 ，是辅酶 Ⅰ（NAD+）合成的关键中间体 。 注： 简称 NMN。 4 方法提要 样品用水超声提取 、经固相萃取柱净化 ，用液相色谱测定 ，峰面积外标法定量 。阳性样品需经液相色 谱-质谱 /质谱法确证 。 5 试剂和材料 除另有说明外 ，所有试剂均为分析纯 ，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 5.1 甲醇：色谱纯。 5.2 甲酸。 5.3 氯化铵。 5.4 氨水。 5.5 乙酸铵。 5.6 甲酸铵：色谱纯。 5.7 正己烷。 5.8 甲醇水溶液 （50∶50，体积比） ：分别量取等量的甲醇 （5.1）和水，混合均匀 。 1SN/T 5870—2025 5.9 0.5%甲酸水溶液 ：准确量取 5.0 mL甲酸，以水定容至 1 000 mL，混匀。 5.10 氯化铵 -氨水缓冲溶液 （0.20 mol/L） ：称取氯化铵 10.7 g，加水约 500 mL使其溶解 ，再加入 85 mL 氨水，微调 pH至10（±0.1）再加水定容至 1 000 mL。 5.11 乙酸铵缓冲溶液 （0.20 mol/L）：称取乙酸铵 15.4 g，加水约 800 mL使其溶解 ，用氨水调 pH至 8.5（±0.1）再加水定容至 1 000 mL。 5.12 10 mmol/L 甲酸铵溶液 （0.1%甲酸） ：准确称取 0.631 g甲酸铵，用水溶解 ，再加入 1.00 mL甲酸， 稀释至 1 000 mL。 5.13 烟酰胺单核苷酸 （β‑Nicotinamide Mononucleotide ，分子式：C11H15N2O8P，CAS号：1094 ‑61‑7），含 量≥99.5%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质 。 5.14 烟酰胺单核苷酸标准储备液 （1.000 mg/mL）：准确称取烟酰胺单核苷酸标准品 10 mg（精确至 0.01 mg） ，用甲醇水溶液 （5.8）溶解并定容至 10 mL，摇匀后得到质量浓度为 1.000 mg/mL 的烟酰胺单 核苷酸标准储备液 。于-18 ℃下避光保存 ，有效期 1个月。 5.15 烟酰胺单核苷酸标准工作溶液 ：分别准确吸取适量烟酰胺单核苷酸标准储备液至 10 mL棕色容量瓶 中，用0.5%甲酸水溶液 （5.9）逐级稀释 ，得到烟酰胺单核苷酸的质量浓度分别为 0.20 µg/mL、0.50 µg/mL、 1.00 µg/mL、5.00 µg/mL、10.0 µg/mL、50.0 µg/mL、100 µg/mL、250 µg/mL、500 µg/mL 的标准工作溶液 系列，临用现配 。 5.16 苯硼酸固相萃取柱 ：100 mg/ 3 mL，或者相当者 ；使用前依次用 2 mL甲醇（5.1） ，2 mL 0.5%甲酸水 （5.9） ，3 mL氯化铵 -氨水缓冲溶液 （5.10）活化，并保持柱体湿润 。 5.17 滤膜：孔径 0.22 µm，水系。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪 ：配紫外检测器或二极管阵列检测器 。 6.2 液相色谱 -质谱 /质谱仪：配电喷雾电离 （ESI）源。 6.3 分析天平 ：感量分别为 0.001 g和0.000 01 g。 6.4 超声波水浴锅 。 6.5 高速离心机 ：最大转速不低于 8 000 r/min。 6.6 pH计：精度为 ±0.1 pH。 7 试样制备与保存 7.1 片剂、粉剂、糖果制品等固体样品 取代表性样品 ，用粉碎机捣碎并混合混匀 ，分成两份 ，分别装入洁净的容器中 ，密封并标识 ，将试样置 于-18 ℃以下保存 。 7.2 胶囊剂 7.2.1 硬胶囊 取代表性样品 ，连胶囊壳一起用粉碎机捣碎并混合混匀 ，分成两份 ，分别装入洁净的容器中 ，密封并 标识，将试样置于 -18 ℃以下保存 。 7.2.2 软胶囊 取代表性样品 ，将胶囊壳与内容物分离 ，胶囊壳用粉碎机捣碎 ，与内容物一起混合混匀 ，分成两份 ，分 2SN/T 5870—2025 别装入洁净的容器中 ，密封并标识 ，将试样置于 -18 ℃以下保存 。 7.3 口服液等液体样品 取代表性样品混匀 ，分成两份 ，分别装入洁净的容器中 ，密封并标识 ，将试样置于 -18 ℃以下保存 。 8 测定步骤 8.1 提取 8.1.1 片剂、粉剂、糖果制品 、硬胶囊等固体样品 称取 0.1 g~1.0 g均质化的试样 （精确至 0.001 g）于50 mL具塞离心管中 ，加入 20.0 mL水，振荡 混匀，超声提取 5 min，8 000 r/min下离心 3 min，取水相清液 1.00 mL用乙酸铵缓冲溶液 （5.11）定容至 5.0 mL，混匀待净化 。 注： 操作者能根据试样中烟酰胺单核苷酸的声称含量 ，在不低于标准曲线测定范围要求的条件下 ，调整称样量 ， 下同。 8.1.2 软胶囊 称取 0.1 g~1.0 g均质化的试样 （精确至 0.001 g）于50 mL具塞离心管中 ，先加入 10 mL正己烷分 散试样，再加入 20.0 mL水，振荡混匀 ，超声提取 5 min，8 000 r/min下离心 3 min，弃去上层有机相 ，取水 相清液 1.00 mL用乙酸铵缓冲溶液 （5.11）定容至 5.0 mL，混匀待净化 。 8.1.3 口服液等液体样品 准确移取 0.1 g~1.0 g口服液（精确至 0.001 g）于10 mL比色管中 ，用水定容至刻度 ，混匀，8 000 r/min 下离心 3 min，取水相清液 0.50 mL用乙酸铵缓冲溶液 （5.11）定容至 5.0 mL，混匀待净化 。 8.2 净化 取2.0 mL待净化液上样到苯硼酸固相萃取柱 （5.16）中，用1.0 mL乙酸铵缓冲溶液 （5.11）淋洗，弃 去淋洗液 ，再真空抽干 3 min。加入 1.0 mL 0.5%甲酸水溶液 （5.9）洗脱，抽干，并重复上述过程一次 ，收 集两次的洗脱溶液 ，混匀，过0.22 μm水相滤膜 ，供液相色谱测定 。 注： 待净化液中所含烟酰胺单核苷酸理论浓度低于 500 µg/mL，若大于此值则需用乙酸铵缓冲溶液 （5.11）稀释后再 上柱净化 。 8.3 测定 8.3.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 ： a） 色谱柱：经极性封端修饰的 C18柱，1.8 μm，100 mm× 2.1 mm，或相当者 ； b） 流动相：A为10 mmol/L 甲酸铵溶液 （含0.1%甲酸） （5.12） ，B为甲醇（5.1） ，梯度洗脱 ，淋洗程序 如表 1所示； c） 流速：0.3 mL/min ； d） 进样量：1.0 μL； e） 柱温：40 ℃； f） 测定波长 ：265 nm。 3SN/T 5870—2025 表1　液相色谱的梯度洗脱程序 时间 /min 0.0 2.0 4.0 6.0 6.1 8.0流动相 A/% 100 100 50 50 100 100流动相 B/% 00 50 50 0 0 8.3.2 定量测定 在仪器最佳工作条件下 ，对标准工作溶液进样 ，通过标准工作曲线外标法定量 。试样溶液中目标 物的响应值应在仪器测定的线性范围内 。若检测结果超出线性范围 ，将上机提取液以 0.5%甲酸水溶 液（5.9）稀释浓度至线性范围内测定 。在8.3.1的色谱条件下 ，烟酰胺单核苷酸的液相色谱图见附录 A 中图 A.1。阳性样品按照 8.4条件使用液相色谱 -质谱 /质谱仪进行定性确证 。 8.4 确证 8.4.1 液相色谱 -质谱 /质谱确证条件 8.4.1.1