中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口动物源食品中硝基酚钠残留量的 测定　液相色谱 ‑质谱 /质谱法 Determination of sodium nitrophenolate residues in foodstuffs of animal origin for import and export —LC‑MS/MS methodICS 67.050 CCS X 04 2025 ‑12‑11发布 2026 ‑07‑01实施 中华人民共和国海关总署 　发 布 SN/T 5867—2025SN/T 5867—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》及 SN/ T 0001 —2016《出口食品 、化妆品理化测定方法标准编写的基本规定 》的规定起草 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：广州海关技术中心 。 本文件主要起草人 ：邵琳智、邹游、徐娟、蓝草、庄燕君、谢敏玲、陈思敏、吴映璇、欧阳少伦 。 ⅠSN/T 5867—2025 进出口动物源食品中硝基酚钠残留量的 测定　液相色谱 -质谱 /质谱法 1 范围 本文件描述了动物源食品中硝基酚钠 （5-硝基邻甲氧基苯酚钠 、对硝基苯酚钠和邻硝基苯酚钠 ）残留 量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法 。 本文件适用于猪肉 、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、蜂蜜、肠衣和鸡脂肪等动物源食品中 5-硝基邻甲 氧基苯酚钠 （以5-硝基邻甲氧基苯酚计 ） 、对硝基苯酚钠 （以对硝基苯酚计 ）和邻硝基苯酚钠 （以邻硝基苯 酚计）残留量的定量测定和确证 。其他动物源性食品参照执行 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 方法提要 试样（蜂蜜除外 ）中的硝基酚钠经氢氧化钠溶液提取 ，盐酸溶液调节 pH后，用乙腈萃取 ，正己烷除 脂，蜂蜜样品用水溶解 ，混合型阴离子交换固相萃取柱净化 ，液相色谱 -质谱 /质谱仪测定 ，外标法定量 。 5 试剂和材料 除另有规定外 ，所有实验用试剂均为分析纯 ，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇：色谱纯。 5.1.2 乙腈：色谱纯。 5.1.3 甲酸：色谱纯。 5.1.4 氢氧化钠 。 5.1.5 盐酸：含量为 36%~ 38%。 5.1.6 氯化钠。 5.1.7 正己烷。 5.1.8 三乙胺。 1SN/T 5867—2025 5.1.9 氨水：含量为 25%~ 28%。 5.2 试剂配制 5.2.1 0.5 mol/L氢氧化钠溶液 ：取10 g氢氧化钠 （5.1.4）用水溶解并定容至 500 mL。 5.2.2 3 mol/L盐酸溶液 ：取25 mL盐酸（5.1.5）用水定容至 100 mL。 5.2.3 饱和氯化钠溶液 ：取水 500 mL，边加氯化钠 （5.1.6）边搅拌，直至不溶解为止 ，摇匀备用 。 5.2.4 5%氨水溶液 ：取5 mL氨水（5.1.9）用水定容至 100 mL。 5.2.5 2%甲酸甲醇溶液 ：取2 mL甲酸（5.1.3）用甲醇（5.1.1）定容至 100 mL。 5.2.6 甲醇水溶液 ：取50 mL甲醇（5.1.1）用水定容至 100 mL。 5.2.7 乙腈饱和正己烷溶液 ：取相同体积的乙腈 （5.1.2）和正己烷 （5.1.7） ，置于分液漏斗中 ，振荡，静置分 层，取上层溶液 。 5.3 标准物质 5.3.1 5-硝基邻甲氧基苯酚钠 （5‑Nitroguaiacol sodium ，C7H6NNaO 4，CAS号：67233 ‑85‑6，纯度 ≥96%） ， 或具有有证标准物质证书的标准物质 。 5.3.2 对硝基苯酚钠 （4‑Nitrophenol sodium salt ，C6H4NNaO 3，CAS号：824‑78‑2，纯度 ≥80%） ，或具有有 证标准物质证书的标准物质 。 5.3.3 邻硝基苯酚钠 （2‑Nitrophenol sodium salt ，C6H4NNaO 3，CAS号：824‑39‑5，纯度 ≥99%） ，或具有有 证标准物质证书的标准物质 。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备液 ：准确称取适量 3种硝基酚钠类化合物标准品 （5.3） （精确至 0.1 mg） ，分别用甲醇溶 解，配制并换算成质量浓度为 500 mg/L的5-硝基邻甲氧基苯酚 、对硝基苯酚和邻硝基苯酚标准储备液 ， -18 ℃避光保存 ，有效期 1年。 5.4.2 混合标准中间液 ：分别吸取 1.0 mL5-硝基邻甲氧基苯酚标准储备液 、2.0 mL对硝基苯酚标准储备 液和 5.0 mL邻硝基苯酚标准储备液 （5.4.1）于50 mL容量瓶中 ，用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制质量浓 度为 5-硝基邻甲氧基苯酚 10 mg/L、对硝基苯酚 20 mg/L、邻硝基苯酚 50 mg/L的混合标准中间液 ， -18 ℃避光保存 ，有效期 6个月。 5.4.3 混合标准工作溶液 ：吸取适量混合标准中间液 （5.4.2） ，用甲醇水溶液 （5.2.6）配制成质量浓度范围为 5-硝基邻甲氧基苯酚 0.5 μg/L~ 10 μg/L、对硝基苯酚 1.0 μg/L~ 20 μg/L、邻硝基苯酚 2.5 μg/L~ 50 μg/L 的系列基质混合标准工作溶液 ，现配现用 。 5.5 材料 5.5.1 混合型阴离子固相萃取柱 （60 mg或相当者 ） 。 5.5.2 滤膜：0.22 μm，聚四氟乙烯滤膜 。 5.5.3 离心管：具塞，50 mL。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -质谱 /质谱仪：配大气压化学离子源 （APCI） 。 6.2 分析天平 ：感量为 0.01 g和0.000 1 g。 6.3 涡旋混合器 。 6.4 水平振荡器 。 2SN/T 5867—2025 6.5　高速离心机 ：最大转速不小于 10 000 r/min。 6.6 氮吹仪。 6.7 组织捣碎机 。 7 试样的制备与保存 取有代表性样约 500 g，用组织捣碎机捣碎 ，混匀后装入洁净容器作为试样 ，密封并做好标识 ，于 -18 ℃下避光保存 ，在制样的操作过程中 ，应防止样品污染或发生残留量含量的变化 。 8 测定步骤 8.1 提取 8.1.1 猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、肠衣等 称取 2 g试样（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL离心管中 ，加入 10 mL 0.5 mol/L氢氧化钠溶液 （5.2.1） ， 振荡 15 min，用3 mol/L盐酸溶液 （5.2.2）调节 pH至3.0，加入 5.0 g氯化钠（5.1.6） ，涡旋 1 min，加入 10 mL 乙腈（5.1.2） ，振荡 20 min，10 000 r/min离心 5 min。取上清液于另一个 50 mL离心管中 ，备用。 8.1.2 蜂蜜等 称取 2 g试样（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL离心管中 ，加入 5 mL水，涡旋 1 min，使蜂蜜完全溶解 ，加 入1 mL三乙胺（5.1.8） ，混合均匀 ，备用。 8.1.3 鸡脂肪等 称取 2 g试样（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL离心管中 ，加入 10 mL 0.5 mol/L氢氧化钠溶液 （5.2.1） ， 涡旋 1 min，再加入 10 mL正己烷（5.1.7），振荡 15 min，10 000 r/min离心 5 min，取下层清液于另一个 50 mL离心管中 ，用3 mol/L盐酸溶液 （5.2.2）调节 pH至3.0，加入 5.0 g氯化钠（5.1.6） ，加入 10 mL乙 腈（5.1.2） ，振荡 20 min，10 000 r/min离心 5 min。取上清液于另一个 50 mL离心管中 ，备用。 8.2 净化 8.2.1 猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋、肠衣、鸡脂肪等 备用液加入 5 mL饱和氯化钠溶液 （5.2.3） ，再加入 10 mL乙腈饱和正己烷溶液 （5.2.7） ，振荡 5 min， 4 000 r/min离心 5 min，取中间乙腈层于刻度试管中 ，加入 100 μL甲酸（5.1.3） ，40 ℃水浴氮吹至约 1.5 mL， 加水定容至 3 mL，涡旋 1 min，0 ℃~ 8 ℃冷藏至少 2 h，过0.22 μm滤膜（5.5.2） ，供液相色谱 -质谱 /质谱 测定。 8.2.2 蜂蜜等 混合型阴离子固相萃取柱 （5.5.1）依次用 3 mL甲醇、3 mL水、3 mL 5%氨水溶液 （5.2.4）活化 ,取备 用液过柱 ，依次用 3 mL水、3 mL甲醇淋洗 ，加入 3 mL 2%甲酸甲醇溶液 （5.2.5）洗脱，收集洗脱液 ，40 ℃ 水浴氮吹至约 1.5 mL，加水定容至 3 mL，涡旋 1 min，0 ℃~ 8 ℃冷藏至少 2 h，过0.22 μm滤膜（5.5.2） ，供 液相色谱 -质谱 /质谱测定 。 3SN/T 5867—2025 8.3 测定 8.3.1 液相色谱参考条件 8.3.1.1 色谱柱：C18柱，4.6 mm（内径）×100 mm，3 μm，