以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5819  —2025 口唇和眼部化妆品中 10 种荧光素类着 色剂的测定 高效液相色谱荧光法 Determination of 10 fluorescein color additives in lipstick and eye area cosmetics —High performance liquid chromatography fluorescence method 2025 -12-11发布 2026 -07-01 实施ICS 71.100.70 CCS Y 42 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准 SN/T 5819 —2025I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国宁波海关、泰科实验室管理（深圳）有限公司、中国人民共和 国杭州海关。 本文件主要起草人：肖道清、马明、庞钰君、李乐琴、曹丹、黄逸儿。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5819 —2025口唇和眼部化妆品中 10 种荧光素类着色剂的测定 高效液相色谱荧光法 1 范围 本文件规定了口唇和眼部化妆品中荧光素、荧光素钠、4’ ,5’ - 二溴荧光素、4’ ,5’ - 二碘荧光素、 4’,5’- 二碘荧光素二钠、四溴荧光素、四溴荧光素二钠、四溴四氯荧光素、四氯四溴荧光素二钠、 罗丹明 B 等 10 种着色剂的测定方法。 本文件适用于口唇和眼部化妆品中荧光素、荧光素钠、4’ ,5’ - 二溴荧光素、4’ ,5’ - 二碘荧光素、 4’,5’- 二碘荧光素二钠、四溴荧光素、四溴荧光素二钠、四溴四氯荧光素、四氯四溴荧光素二钠、 罗丹明 B 等 10 种着色剂的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 用甲醇和四氢呋喃混合溶液提取化妆品中的荧光素类着色剂，离心分离后，采用高效液相色谱 配置荧光检测器检测目标物。必要时，需进行质谱确证。 5 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯。实验用水为 GB/T 6682 中规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇（CH3OH） ：色谱纯。 5.1.2 乙腈（CH3CN） ：色谱纯。 5.1.3 乙酸（CH3COOH） ：色谱纯。 5.1.4 四氢呋喃（C4H8O） ：色谱纯。 5.1.5 甘氨酸（C2H5NO2）。 5.1.6 氢氧化钠（NaOH） 。以正式出版文本为准2 SN/T 5819 —20255.1.7 乙酸铵（CH3COONH4）。 5.2 标准品 10 种着色剂的 CAS 号、CI 号、分子式、分子量等参见附录 A 中的表 A.1。10 种着色剂如下： 5.2.1 荧光素（C20H12O5） ，含量≥ 95%。 5.2.2 荧光素钠（C20H10Na2O5） ，含量≥ 95%。 5.2.3 二溴荧光素（C20H10Br2O5） ，含量≥ 95%。 5.2.4 二碘荧光素（C20H10I2O5） ，含量≥ 85%。 5.2.5 二碘荧光素二钠（C20H8I2Na2O5） ，含量≥ 99%。 5.2.6 四溴荧光素（C20H8Br4O5） ，含量≥ 95%。 5.2.7 四溴荧光素二钠（C20H6Br4Na2O5） ，含量≥ 90%。 5.2.8 四溴四氯荧光素（C20H4Br4Cl4O5） ，含量≥ 85%。 5.2.9 四溴四氯荧光素二钠（C20H2Br4Cl4Na2O5） ，含量≥ 90%。 5.2.10 罗丹明 B（C28H31ClN2O3） ，含量≥ 96%。 5.3 溶液配制 5.3.1 氢氧化钠溶液（1 mol/L） ：准确称取氢氧化钠（5.1.6）4g 于 100 mL 容量瓶中，用水定容至 刻度。 5.3.2 甘氨酸溶液（10 mmol/L ，pH=9.0） ：准确称取甘氨酸（5.1.5）0.75 g 于 1 L 容量瓶中，加入 950 mL 水，混匀，用氢氧化钠溶液（5.3.1）将溶液 pH 值调至 9.0，加水定容至刻度。 5.3.3 乙腈（含 0.1% 乙酸） ：取 1 mL 乙酸（5.1.3） ，加乙腈至 1000 mL。 5.3.4 乙酸铵（5 mmol/L） ：称取乙酸铵（5.1.7）0.385 g 于 1000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。 5.4 标准溶液制备 5.4.1 标准储备溶液（500 mg/L） ：分别准确称取各标准物质（5.2）10 mg，用甲醇定容到 20 mL， 于 4 ℃ ~6 ℃冰箱中避光保存。 5.4.2 混合标准储备液（10 mg/L） ：分别取上述标准储备液各 1 mL 于 50 mL 容量瓶中，用甲醇定容 至刻度，于 4 ℃ ~6 ℃冰箱中避光保存。 5.4.3 混合标准工作溶液：分别取上述混合标准储备溶液各 0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL、10 mL 于 20 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配置成质量浓度分别为 0.25 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2.5 mg/L、 5 mg/L 的混合标准工作溶液，现配现用。 5.5 材料 微孔滤膜：0.45 μm 聚四氟乙烯（PFTE） 。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪，配荧光检测器。 6.2 分析天平：感量 0.1mg。 6.3 涡旋震荡器。 6.4 超声波清洗机。 6.5 高速离心机，转速不低于 10000 r/min。 6.6 pH 计。以正式出版文本为准3 SN/T 5819 —20257 试样制备 准确称取 0.5 g 试样（精确到 0.1 mg）于 15mL 塑料刻度离心管中，加入 1 mL 四氢呋喃，涡旋 30 s 混匀。若遇唇膏样品等无法分散的情况，可在 80℃水浴中适当加热 1 min~2 min 即可分散。加 入甲醇至 10 mL，涡旋 2 min 并超声 10 min，超声完成后再涡旋 2 min，然后于 10000 r/min 离心分离 10 min，取上清液经 0.45 μm 聚四氟乙烯（PFTE）微孔滤膜过滤后待测。 8 分析步骤 8.1 液相色谱分析参考条件 液相色谱参考条件如下： a） 色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm） ，或相当者； b） 柱温：30℃ ； c） 流动相 A ：10 mmol/L 甘氨酸（pH=9.0） ； d） 流动相 B ：甲醇； e） 流动相梯度变化参见表 1 ； f ） 流速 1 mL/min ； g） 进样体积 5 μL； h） 检测波长参见表 2。 表 1 流动相梯度变化参考条件 时间 /min 流动相 A/% 流动相 B/% 0 70 30 10 40 60 12 10 90 16 10 90 17 70 30 22 70 30 表 2 参考检测波长 序号 化合物 激发波长 /nm 发射波长 /nm 1 荧光素 505 5252 荧光素钠 3 二溴荧光素 4 二碘荧光素 5 二碘荧光素二钠 6 四溴荧光素 520 535 7 四溴荧光素二钠以正式出版文本为准4 SN/T 5819 —2025序号 化合物 激发波长 /nm 发射波长 /nm 8 四溴四氯荧光素 545 560 9 四溴四氯荧光素二钠 10 罗丹明 B 8.2　定性分析 将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱 图进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰，则可确认样品中存 在该物质。10 种荧光素类着色剂标准物质液相色谱图参见附录 B。必要时需进行质谱确证，10 种荧 光素类着色剂的质谱确证参考条件参见附录 C。 注： 荧光素与荧光素钠、二碘荧光素与二碘荧光素二钠、四溴荧光素与四溴荧光素二钠、四氯四溴荧光素与四 溴四氯荧光素二钠均在同一时间出峰，且质谱参数完全相同，相应的计算结果均以钠盐计。 8.3 定性分析 按照仪器参考条件（8.1）采用单点或多点校正方式测定，样品溶液中待测物的响应值应在标准 曲线的线性范围内。如果超出线性响应范围，应进行适当稀释。 9　结果计算 单点校正，结果按式（1）计算。 ii s i isAc VfXAm×× ×=× （1） 式中： Xi ——样品中目标物的含量，单位为微克每克（ μg/g） ； Ai ——试样溶液中目标物对应的色谱峰面积响应值； Ais ——标准工作溶液中目标物对应的色谱峰面积响应值； cis ——标准工作溶液中目标物的质量浓度，单位为微克每毫升（ μg/mL） ； V ——样品定容体积，单位为毫升（mL） ； f ——稀释倍数； m ——称取样品的质量，单位为克（g） 。 多点校正，结果按式（2）计算。 i icV fXm××= （2） 式中： Xi ——样品中目标物的含量，单位为微克每克（ μg/g） ； ci ——从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度，单位为微克每