以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5732 —2025ICS 67.050 CCS X 04 2025 -12-01发布 2026 -07-01实施出口液态乳中乳果糖的测定 液相色谱和液相色谱—质谱/质谱法 Determination of lactulose in liquid milk for export — LC and LC-MS/MS method 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准ISN/T 5732 —2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中华人民共和国上海海关、中华人民共和国天津海关、中华人民共和国青岛 海关。 本文件主要起草人：古淑青、周瑶、任硕、樊彦莉、霍忆慧、陈念念、邓晓军、韩丽、郭德华、 高旗利、张晓梅。 以正式出版文本为准以正式出版文本为准1SN/T 5732 —2025 出口液态乳中乳果糖的测定 液相色谱和液相色谱—质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了液态乳中乳果糖的高效液相色谱和高效液相色谱—质谱 / 质谱检测方法。 本文件第一法液相色谱法适用于超高温灭菌乳中乳果糖含量的测定。本文件第二法液相色谱—质谱 / 质谱法适用于生鲜乳、巴氏杀菌乳、超高温灭菌乳中乳果糖含量 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 第一法 液相色谱法 4 方法提要 样品经醋酸铵调节 pH 沉淀蛋白，分离过滤后高效液相色谱仪—蒸发光散射检测器测定，外标法 定量。 5 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1　乙腈（CH 3CN） ：色谱纯。 5.2　冰醋酸（CH3COOH） ：色谱纯。 5.3　醋酸铵（NH4COOH） ：分析纯。 5.4　0.4 mol/L 醋酸铵（pH=3.8±0.1） ：准确称取 31.0 g（精确至 0.01g）醋酸铵，用水溶解，定容至 1 L， 用冰醋酸调 pH 值至 3.8±0.1。5.5　85%（体积分数）乙腈 - 水溶液：在 85 mL 乙腈中加入 15 mL 水。5.6　标准品：乳果糖（C 12H22O1 1，CAS 号：4618-18-2） ，纯度≥ 98%。 5.7　标准储备液：准确称取 0.1 g（精确至 0.01 mg）乳果糖标准品（5.6） ，用水溶解，定容至 10 mL，配以正式出版文本为准2SN/T 5732 —2025 成 10 mg/mL 的标准储备液。4 ℃冰箱保存 3 个月。 5.8　标准工作液：准确吸取乳果糖标准储备液 1 mL 至 10 mL 容量瓶中，用 85%（体积分数）乙腈 - 水溶液（5.5）定容至刻度，配成浓度为 1 mg/mL 的溶液，现用现配。5.9　滤膜：水相，0.22 μm，有机相，0.22 μm。 6　仪器和设备 6.1　高效液相色谱仪：配有蒸发光散射检测器。 6.2　分析天平：感量为 0.01 mg 和 0.01 g。 6.3　离心机：转速不低于 4000 r/min。6.4　离心管：15 mL，50 mL。6.5　漩涡振荡器。 7　试样制备与保存 取有代表性样品 100 mL 装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记，于 4 ℃保存。 8　分析步骤8.1　样品前处理 样品混合均匀后，准确吸取 2.0 mL 试样于 15 mL 离心管中，加入 1 mL 0.4 mol/L 醋酸铵溶液 （pH=3.8） ，用水定容至 10 mL，涡旋混匀 3 min，以 4000 r/min 的速度离心 5 min。上清液经 0.22 μm水 相膜过滤，取 100 μL 滤液用 85%（体积分数）乙腈 - 水溶液（5.5）定容至 1 mL，经 0.22 μm 有机膜过 滤，供 HPLC 测定。 8.2　标准曲线溶液的配制 准确移取适量乳果糖标准工作液，用 85%（体积分数）乙腈 - 水溶液（5.5）稀释，配制成乳果糖 浓度为 1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L 的系列标准溶液。现用现配。8.3　测定8.3.1　高效液相色谱条件 高效液相色谱条件为： a） 色谱柱：凝胶色谱柱（100 mm×2 mm，1.5 μm） ，或性能相当者； b） 柱温：35 ℃；c） 流动相：乙腈 + 水 =85+15（体积分数） ；d） 流速：0.8 mL/min；e） 进样量：10 μL； f） 蒸发光散射器条件：漂移管温度 60 ℃，雾化气流速 1.4 mL/min。 8.3.2　高效液相色谱测定 按照 8.3.1 高效液相色谱测定条件对标准工作液及样液等体积进样测定，对乳果糖峰面积取对数 作为纵坐标，标准溶液浓度取对数作为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。样品中检测的色谱峰保留时间与乳果糖标准品相差应在 ±5% 之内。样品中待测物含量应在标准曲线以正式出版文本为准3SN/T 5732 —2025 范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应进行适当稀释后测定。在 8.3.1 高效液相色谱条件下，标 准溶液和实际样品溶液的色谱图见附录 A 中图 A.1 和图 A.2。 9　空白试验 除不加试样外，均按以上操作步骤进行。 10　结果计算和表述 试样中乳果糖的含量按公式（1）进行计算： X=（c-c0） ×V1 V2 …………… …………………………… （1） 式中： X ——试样中乳果糖的含量，单位为毫克每升（mg/L） ； c ——样液中乳果糖的测定值，单位为毫克每升（mg/L） ； c0 ——空白试样中乳果糖的测定值，单位为毫克每升（mg/L） ； V1 ——试样的最后定容体积，单位为毫升（mL） ； V2 ——试样的体积，单位为毫升（mL） 。 计算结果保留至小数点后一位。 11　定量限、回收率和精密度 11.1　定量限 本方法对乳果糖的定量限为 50 mg/L。 11.2　回收率 不同牛奶基质中添加浓度水平下乳果糖的回收率范围见附录 B 中表 B. 1。 11.3　精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。 第二法 液相色谱—质谱/质谱法 12　方法提要 样品经醋酸铵调节 pH 沉淀蛋白，分离过滤后高效液相色谱—串联质谱仪测定，外标法定量。 13　试剂和材料 13.1　氨水：分析纯。 13.2　0.05% 氨水：吸取 500 μL 氨水，用水定容至 1000 mL，现用现配。 13.3　乙腈：见 5.1。以正式出版文本为准4SN/T 5732 —2025 13.4　0.4 mol/L 醋酸铵（pH=3.8±0.1） ：见 5.4。 13.5　乳果糖标准储备液：见 5.7。13.6　85%（体积分数）乙腈 - 水溶液：见 5.5。13.7　空白基质：用于配制基质匹配标准溶液的无乳糖配方奶。 14　仪器和设备14.1　高效液相色谱—质谱 / 质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI） 。 14.2　分析天平：见 6.2。 14.3　离心机：见 6.3。14.4　离心管：见 6.4。14.5　漩涡振荡器：见 6.5。 15　分析步骤15.1　样品前处理 样品混合均匀后，准确吸取 2.0 mL 试样于 15 mL 离心管中，加入 1 mL 0.4 mol/L pH=3.8 醋酸铵溶 液（13.4） ，用水定容至 10 mL，涡旋混匀 3 min，以 4000 r/min 的速度离心 5 min。上清液经 0.22 μm水 相膜过滤，取 100 μL 滤液用 85%（体积分数）乙腈 - 水溶液（5.5）定容至 1 mL，经 0.22 μm 有机膜过 滤，供液相色谱—串联质谱测定。必要时，试样测定液用 85%（体积分数）乙腈 - 水溶液（5.5）进行 适当的稀释，使试样测定液中乳果糖的含量在标准曲线范围内。 15.2　基质匹配标准曲线溶液的配制 将空白基质（13.7）按照样品前处理方法（15.1）操作，得到空白基质溶液。取适量乳果糖标 准储备液（13.5） ，用空白基质溶液稀释成乳果糖浓度为 0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.25 mg/L、0.5 mg/L、 1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L 的系列标准工作溶液。 15.3　测定条件 15.3.1　高效液相色谱条件 液相色谱参考条件如下： a） 色谱柱：氨基色谱柱（100 mm × 2.1 mm，1.7 μm） ，或性能相当者； b） 柱温：40 ℃；c） 流动相：0.05% 氨水溶液，乙腈，梯度洗脱程序见表 1；d） 流速：0.3 mL/min；e） 进样量：3 μL。 表1　梯度洗脱程序 时间 /min 0.05% 氨水溶液 /% 乙腈 /% 0 15 85 14 95 5 17 95 5