以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5731 —2025ICS 67.050 CCS C 53 2025 -12-01发布 2026 -07-01实施出口香辛料中曲托喹酚的测定 液相色谱—质谱/质谱法 Determination of eugenol, isoeugenol, methyl eugenol, methyl isoeugenol in aquatic products for export — GC-MS method 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准ISN/T 5731 —2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中华人民共和国石家庄海关、中华人民共和国武汉海关。本文件主要起草人：张海超、贾海涛、艾连峰、王晗、田浩、李玮。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1SN/T 5731 —2025 出口香辛料中曲托喹酚的测定 液相色谱—质谱/质谱法 1　范围 本文件规定了出口香辛料中曲托喹酚的液相色谱—质谱 / 质谱测定方法。 本文件适用于辣椒、花椒、大料、桂皮、黑胡椒、白胡椒、孜然、良姜、大蒜粉、洋葱粉、香 叶、小茴香、陈皮、十三香粉、五香粉、咖喱粉、意大利风味香料、七味唐辛子等香辛料中曲托喹酚的测定。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4　方法提要 试样中曲托喹酚采用酸性乙醇提取，混合型阳离子交换固相萃取柱净化，液相色谱—质谱 / 质谱 仪测定，内标法定量。 5　试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1　试剂 5.1.1　甲醇：色谱级。 5.1.2　乙醇：色谱级。5.1.3　甲酸：色谱级。5.1.4　氨水：含量为 25%～ 28%。 5.2　溶液配制 5.2.1　5% 氨水甲醇溶液：量取 5 mL 氨水（5.1.4） ，用甲醇（5.1.1）定容至 100 mL，混匀。 5.2.2　0.5% 甲酸乙醇溶液：量取 5 mL 甲酸（5.1.3） ，用乙醇（5.1.2）定容至 1000 mL，混匀。5.2.3　0.1% 甲酸水溶液：量取 1 mL 甲酸（5.1.3）用水定容至 1000 mL，混匀。以正式出版文本为准2SN/T 5731 —2025 5.2.4　0.1% 甲酸 - 甲醇溶液（8+2，体积比） ：量取 800 mL 0.1% 甲酸水溶液（5.2.3）和 200 mL 甲醇 （5.1.1） ，混匀。 5.3　标准品 5.3.1　曲托喹酚标准物质（C19H23NO5，CAS 号：21650-42-0） ：纯度大于或等于 99%。 5.3.2　曲托喹酚 -D9标准物质（C19H14D9NO5） ：100 μg/mL，-18 ℃以下避光保存。 5.4　标准溶液配制5.4.1　曲托喹酚标准储备液（100 μg/mL） ：准确称取曲托喹酚标准物质（5.3.1）10 mg（精确至 0.0001g） 用甲醇（5.1.1）溶解，配制成浓度为 100 μg/mL 的标准储备液，-18 ℃下避光保存，有效期 6 个月。 5.4.2　 曲托喹酚标准中间溶液（1 μg/mL） ：根据需要准确移取适量曲托喹酚标准储备液（5.4.1） ，用甲 醇（5.1.1）稀释，配制成浓度为 1 μg/mL 标准中间溶液，4 ℃下避光保存，有效期 3 个月。 5.4.3　曲托喹酚 -D 9内标储备液（1 μg/mL） ：准确量取曲托喹酚 -D9标准物质（5.3.2）1 mL 于 100 mL 容 量瓶中，用甲醇（5.1.1）稀释并定容至刻度，配制成浓度为 1 μg/mL 的标准储备液，4 ℃下避光保存， 有效期 3 个月。5.5　材料5. 5.1　 固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱（3 mL，60 mg）或性能相当者，使用前分别采用 3 mL 甲醇和 3 mL 0.5% 甲酸乙醇活化。 5.5.2　微孔滤膜：0.22 μm，有机系。 6　仪器和设备 6.1　液相色谱—质谱 / 质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI） 。 6.2　组织捣碎机。6.3　均质器：转速不低于 10 000 r/min。6.4　涡旋混匀器。6.5　电子分析天平：感量为 0.0001 g 和 0.01 g。6.6　离心机：转速不低于 8000 r/min。6.7　氮气吹干仪。6.8　离心管：聚乙烯，具塞，50 mL。 7　试样制备与保存 取代表性样品约 500 g 需用组织捣碎机均质，充分混匀，均分为 2 份，密封并标明标记，于常温 下避光保存。8　测定步骤8.1　提取 准确称取 2 g 样品（精确至 0.01g）于 50 mL 离心管中并加入 100 μL 的曲托喹酚 -D 9内标储备液 （5.4.3） 。准确加入 20 mL 0.5% 甲酸乙醇溶液（5.2.2） ，以 10000 r/min 均质 1 min。以 8000 r/min 离心 5 min，上清液净化。以正式出版文本为准3SN/T 5731 —2025 8.2　净化 准确将上述 2 mL 上清液置于已活化固相萃取柱内，待样液流出，采用 3 mL 0.5% 甲酸乙醇溶液 （5.2.2）和 3 mL 甲醇（5.1.1）淋洗，弃去淋洗液，真空抽干，最后用 3 mL 5% 氨水甲醇溶液（5.2.1） 洗脱，接收洗脱液于 40 ℃下氮吹至干，用 1.00 mL 0.1% 甲酸 - 甲醇溶液（5.2.4）涡旋溶解残渣，0.22 μm 微孔滤膜（5.5.2）过滤，供液相色谱—质谱 / 质谱测定。 8.3　标准曲线的制备 精密量取标准中间液（5.4.2） 、内标储备液（5.4.3）适量，用 0.1% 甲酸 - 甲醇溶液（5.2.4）配成 浓度为 0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/ mL 的标准工作液，其中曲 托喹酚 -D9内标浓度为 10 ng/mL。以测得特征离子质量色谱峰外标和内标峰面积比值为纵坐标，对应 的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。 8.4　测定8.4.1　液相色谱条件 液相色谱条件参考如下： a） 色谱柱： C 18色谱柱，100 mm ×2.1 mm（内径） ，1.7 μm，或性能相当者； b） 柱温：30 ℃； c） 流动相：A 相，含 0.1% 甲酸水溶液；B 相，甲醇。流动相及梯度洗脱程序见表 1；d） 流速：0.4 mL/min；e） 进样量：5 μL。 表1 流动相及梯度洗脱程序 时间 /min 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 90 10 0.50 90 10 3.50 10 90 5.00 10 90 5.10 90 10 7.00 90 10 8.4.2　质谱条件 质谱参考条件如下：a） 离子源：电喷雾离子源；b） 扫描模式：正离子扫描；c） 监测模式：多反应监测（MRM） ；d） 其他信息见附录 A。 8.4.3　液相色谱—质谱/质谱测定 8.4.3.1　定性测定 按照上述液相色谱—质谱 / 质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间以正式出版文本为准4SN/T 5731 —2025 与标准工作溶液保留时间相差不超过 ±5%， 定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相 对丰度一致，相对丰度允许偏差均不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 /% >50 >20～50 >10～20 ≤ 10 允许的相对偏差 /% ±20 ±25 ±30 ±50 8.4.3.2　定量测定 取试料溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，以色谱峰面积定量，按内标法计算。标准工 作液和样液中曲托喹酚的响应值应在仪器线性响应范围内。在上述仪器条件下，曲托喹酚的保留时间为 3.60 min，曲托喹酚的标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图见附录 B。 8.5　空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 9　结果计算和表述 试样中被测物含量按标准曲线法或公式（1）计算，计算结果需扣除空白值。 X=A i×A' is×Cs×Cis×V Ais×As×C' is×m …………………………………… （1） 式中： X ——试样中曲托喹酚的含量，单位为微克每千克（ μg/kg） ； Cis ——试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL） ； Cs ——标准工作溶液中被测物的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL） ； C' is ——标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL） ； Ai ——试样溶液中被测物的色谱峰面积； Ais ——试样溶液中内标物的色谱峰面积； As ——标准工作溶液中被测物的色谱峰面积； A' is ——标准工作溶液中内标物的色谱峰面积； V ——试样溶液最终体积，单位为毫升（mL） ； m ——试