以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5727.3 —2025ICS 67.050 CCS X 04 2025 -12-11发布 2026 -07-01实施出口林下三七检验规程 第3部分：三七成分鉴别方法 实时荧光 PCR方法 Rules for the inspection of panax notoginseng cultivated in forest for export — Part 3: Identification of ingredient of panax notoginseng cultivated in forest for export — Real-time PCR method 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准I SN/T 5727.3—2025前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是 SN/T 5727—2025《出口林下三七检验规程》的第 3 部分。SN/T 5727—2025 已经发布了 以下部分： ——第 1 部分：总则； ——第 2 部分：林下三七鉴别　近红外光谱法； ——第 3 部分：三七成分鉴别方法　实时荧光 PCR 方法； ——第 4 部分：稳定氮同位素比值（15N/14N）测定　同位素比质谱法； ——第 5 部分：5 种皂苷的测定　高效液相色谱法； ——第 6 部分：三七素的测定　高效液相色谱法； ——第 7 部分：D- 无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D- 半乳糖醛酸的测定　液相色谱法； ——第 8 部分：多元素的测定　电感耦合等离子体质谱法； ——第 9 部分：有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药多残留的测定　气相色谱 - 质谱 / 质谱法。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：天津海关动植物与食品检测中心、天津师范大学、云南农业大学、厦门海关技 术中心、合肥海关技术中心、昆明海关技术中心、大连民族大学、西南林业大学、通标标准技术服务 有限公司。 本文件主要起草人：赵良娟、王飞、韩芳、郑文杰、徐敦明、季超、朱书生、何霞红、陈宏仙、 曹际娟、邓维萍、施蕊、张芹、段胜男、朱有勇。以正式出版文本为准II SN/T 5727.3—2025引 言 SN/T 5727—2025《出口林下三七检验规程》旨在建立适用于林下三七成分特征和质量安全检测 方法，拟由 9 个部分构成（各部分之间关系如图 1 所示） 。 ——第 1 部分：总则；目的在于确定适用于出口林下三七的贮藏要求、抽样、检验、结果判定、 不合格货物处置和存查样品的要求。 ——第 2 部分：林下三七鉴别　近红外光谱法；目的在于确定适用于林下三七与农田三七的快速 鉴别方法。 ——第 3 部分：三七成分鉴别方法　实时荧光 PCR 方法；目的在于确定适用于药食同源植物林下 三七中三七成分的定性检测方法。 ——第 4 部分：稳定氮同位素比值（15N/14N）测定　同位素比质谱法；目的在于确定适用于三七 中的稳定氮同位素比值（15N/14N）的测定方法。 ——第 5 部分：5 种皂苷的测定　高效液相色谱法；目的在于确定适用于林下三七中的 5 种皂苷 Rb1、Rb3、Re、Rg1 和 R1 的测定方法。 ——第 6 部分：三七素的测定　高效液相色谱法；目的在于确定适用于林下三七中的三七素的测 定方法。 ——第 7 部分：D- 无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D- 半乳糖醛酸的测定　液相色谱法；目 的在于确定适用于林下三七中多糖组分 D- 无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、D- 半乳糖醛酸的测定 方法。 ——第 8 部分：多元素的测定　电感耦合等离子体质谱法；目的在于确定适用于林下三七中硼 （B） 、钠（Na） 、镁（Mg） 、铍（Be） 、铝（Al） 、钾（K） 、钙（Ca） 、钛（Ti） 、钒（V） 、铬（Cr） 、锰 （Mn） 、铁（Fe） 、钴（Co） 、铯（Cs） 、镍（Ni） 、铜（Cu） 、锌（Zn） 、砷（As） 、硒（Se） 、锶（Sr） 、 钼（Mo） 、镉（Cd） 、锡（Sn） 、锑（Sb） 、钍（Th） 、钡（Ba） 、汞（Hg） 、铊（TI） 、铀（U） 、铅 （Pb）的测定方法。 ——第 9 部分：有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药多残留的测定　气相色谱 - 质谱 / 质谱法； 目的在于确定适用于三七中 115 种有机磷、有机氯及拟除虫菊酯农药及相关化学品的定性鉴别及定量 测定方法。以正式出版文本为准III SN/T 5727.3—2025鉴别试验 成分测定林下三七鉴别�近红外光谱法 三七成分鉴别方法�实时荧光������� �PCR �方法 稳定氮同位素比值 （15N/14N）测定�同位素比质谱法 5种皂苷的测定�高效液相色谱法 三七素的测定�高效液相色谱法 D-无水葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、 D-半乳糖醛酸的测定�液相色谱法 多元素的测定�电感耦合等离子体质谱法 有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药 多残留的测定�气相色谱-质谱/质谱法安全检测总则 图1 SN/T 5727—2025各部分之间关系以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5727.3—2025出口林下三七检验规程 第3部分：三七成分鉴别方法 实时荧光PCR方法 1　范围 本文件规定了林下三七中三七成分的实时荧光 PCR 鉴别方法。 本文件适用于药食同源植物林下三七中三七成分的定性检测。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403—2008　实验室质量控制规范　食品分子生物学检测 SN/T 5727.1　出口林下三七检验规程　第 1 部分：总则 3　术语和定义 SN/T 5727.1 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实时荧光PCR real-time fluorescence PCR 在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个 PCR 扩增过程。 3.2 Ct值 cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。 4　原理 提取样品 DNA，分别采用内参 18S rRNA 基因和三七的特异性检测引物和探针对样品 DNA 进行 TaqMan 实时荧光 PCR 扩增，根据 Ct 值，判断该样品中是否存在三七成分。 5　试剂和材料 5.1 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯或以上，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.2　 检测用引物（对）序列和探针：见表 1。 5.3　 DNA 提取试剂盒：多糖多酚类植物通用基因组 DNA 提取试剂盒。 5.4　 实时荧光 PCR 预混液（2× Taq Pro HS Universal Probe Master Mix） 。以正式出版文本为准2 SN/T 5727.3—2025表1 三七PsbA-trnH基因（GenBank： HQ112882.1）序列引物探针 名称 序列（5’-3’ ） 扩增片段长度 靶基因 内参 5’端引物 内参 3’端引物 内参探针CCTGAGAAACGGCTACCAT CGTGTCAGGATTGGGTAAT VIC-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT- BHQ165bp 18S rRNA 三七 5’端引物 三七 3’端引物 三七探针ACCTAGTTTTTTTAAATAAATTAAATAA AGTCCAACATTTTTTCTTTTA FAM-AAAACACTTCCCAAAAGATAA -MGB179bp PsbA-trnH 6　仪器和设备 6.1　 实时荧光 PCR 仪。 6.2　 离心机：离心力≥ 12 000 g。 6.3　 恒温水浴锅。 6.4　 高压灭菌锅。 6.5　 核酸蛋白分析仪。 6.6　 分析天平：感量 0.001 g。 6.7　 涡旋震荡仪。 6.8　 不同量程移液器：0.5 μL ～10 μL、10 μL ～100 μL、20 μL ～200 μL、100 μL ～1 000 μL。 7　检测步骤 7.1　DNA提取 称取 30 mg 样品粉末，加入 700 μL CTAB 缓冲溶液。65 ℃水浴 50 min，每隔 10 min 上下颠倒， 12 000 g离心 10 min，将上清液 600 μL 转移到一个新离心管中。加入等体积（600 μL） Tris 饱和酚 - 三 氯甲烷 - 异戊醇（25∶24∶1） ，轻轻振荡 10 min，使两者混合均匀，4 ℃ 9 000 g离心 15 min，将上清 液 450 μL 转移到一个新离心管中。加入等体积（450 μL）的三氯甲烷 - 异戊醇（24∶1） ，轻轻振荡 混匀，4 ℃ 10 000 g离心 5 min，取约 400 μL 上清液到一个新离心管中。加入约 2.5 倍体积（1 mL）预 冷的无水乙醇，轻轻混匀，可见白色絮状沉淀，-20 ℃沉淀 20 min。4 ℃ 12 000 g离心 5 min，弃上 清液。用 400 μL 75% 乙醇洗涤 1 次，4 ℃ 12 000 g离心 5 min，弃上清液，重复 1 次。在空气中干燥