以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5724 —2025ICS 67.050 CCS X 04 2025 -12-11发布 2026 -07-01实施出口动物源食品中多种兽药残留量的筛查 液相色谱-高分辨质谱法 Determination of multi veterinary drugs residual in foodstuffs of animal original for export —Liquid chromatography-High resolution mass spectrometry 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准ISN/T 5724 —2025 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则　第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的 规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：上海海关动植物与食品检验检疫技术中心、宁波海关技术中心、厦门海关技术 中心、厦门大学。 本标准主要起草人：赵善贞、时逸吟、盛永刚、封卓然、殷居易、张旖、徐敦明、吴彩胜、伊雄 海、郭德华。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1SN/T 5724 —2025 出口动物源食品中多种兽药残留量的筛查 液相色谱-高分辨质谱法 1　范围 本文件规定了出口动物源食品中 120 种兽药残留的液相色谱 - 高分辨质谱筛查方法。 本文件适用于猪肉、鱼、蜂蜜、牛奶、鸡蛋等动物源食品中 120 种兽药残留的定性筛查检测和确 证，其他动物源食品可参照执行。对于确认存在的兽药，应采用其他定量标准方法定量、测定。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法SN/T 0001-2016 出口食品、化妆品理化测定方法 标准编写的基本规定 3　术语与定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4　方法提要 试样中的兽药残留用乙腈提取，盐析后，采用基质分散固相萃取净化，液相色谱 - 高分辨质谱筛 查检测。 5　试剂材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水符合 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1　乙腈（CH 3CN） ：色谱级。 5.2　甲醇（CH3OH） ：色谱级。 5.3　正己烷（C6H14） ：色谱级。 5.4　甲酸（CH2O2） ：色谱级。 5.5　氟化铵（NH4F ）。 5.6　氯化钠（NaCl） 。 5.7　无水硫酸镁（MgSO4） ：使用前在 500 ℃马弗炉内烘 5 h。 5.8　5 % 乙腈水溶液：准确移取 5 mL 乙腈（5.1） ，用水稀释到 100 mL。5.9　乙腈饱和的正己烷：取正己烷（5.3） ，加入适量乙腈（5.1） ，静置分层后，上层即为乙腈饱和正己烷。5.10　含 0.1 % 甲酸的乙腈：准确移取 1 mL 甲酸（5.4） ，用乙腈（5.1）稀释到 1 000 mL。以正式出版文本为准2SN/T 5724 —2025 5.11　0.1 % 甲酸溶液：准确移取 1 mL 甲酸（5.4） ，用水稀释到 1 000 mL。 5.12　0.5 mmol/L 氟化铵水溶液：准确称取 0.0185 g 氟化铵（5.5） ，用水溶解并稀释到 1 000 mL。5.13　标准品：孔雀石绿及其代谢物、β- 受体激动剂类、激素类、硝基咪唑类、苯并咪唑类类、磺胺及磺胺增效剂类、喹诺酮及氟喹诺酮类、大环内酯及林可酰胺类、抗球虫药类、精神控制类、抗病毒 类药、甲砜霉素和氟苯尼考、氨苯砜及其代谢物，五氯酚酸钠以及呋喃苯烯酸钠等标准品的纯度均具 体信息参见表 A.1。5.14　标准储备液：参照表 A.1 的分组，分别准确称取 10mg （精确到 0.00001 g）120 种兽药标准品，并用推荐的溶剂溶解并稀释到 1.0 mg/mL，或购买商品化的混标溶液。其中 B 组、C 组、D 组、E 组、F 组、G 组、I 组、J 组可在 -18℃以下保存 12 个月，A 组、H 组可在 -18 ℃以下保存 6 个月。5.15　混合标准工作液：根据方法筛查限量的浓度，准确量取各组标准储备液（5.14）适量，用甲醇稀释并定容至合适浓度。混合标准工作液可在 4℃下保存 7 天。5.16　十八烷基硅烷键合硅胶（C 18） ：60 目～ 80 目。 5.17　滤膜：0.22 μm 有机相滤膜。 6　仪器和设备 6.1　液相色谱 - 高分辨质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI） 。 6.2　分析天平：感量 0.00001 g。 6.3　天平：感量 0.01 g。 6.4　均质器：转速可达 20 000 r/min。6.5　离心机：转速可达 10 000 r/min。6.6　超声波震荡器。6.7　涡旋振荡器。6.8　氮吹仪。 7　试样制备与保存7.1　试样的制备 7.1.1　肌肉、水产 随机取原始样品，去除不可食部分，取出有代表性样品约 500 g。用组织捣碎机充分捣碎混匀， 装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。7.1.2　牛奶、蜂蜜 从原始样品取出有代表性样品约 500 g，充分混匀，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。 7.1.3　鸡蛋 从原始样品取出有代表性样品约 500 g，去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀，装入洁净容器作为 试样，密封，并标明标记。7.2　试样贮存 将制备好的试样分成 2 份，作为测试样和留样，于 -18 ℃密封贮存。 注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。以正式出版文本为准3SN/T 5724 —2025 8　分析步骤 8.1　前处理 8.1.1　提取 准确称取 2 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 塑料离心管中，加入 8 mL 乙腈，于均质器上以 15 000 r/min 均质 2 min，加入 1 g NaCl，涡旋混匀 1 min，超声 5 min，4 000 r/min 离心 5 min，取上清液，残渣用 8 mL 乙腈同上操作，再提取一次。合并上清液，待净化。 8.1.2　净化 将上清液转移至装有 50 mg C18、900 mg MgSO4的 50 mL 离心管中，涡旋混匀 5 min，4 000 r/min 离心 5 min，取上清液，在 40 ℃以下水浴中氮吹至干。残渣用 1 mL 5 % 乙腈水溶液溶解，加入 1 mL 乙腈饱和的正己烷，涡旋混匀，10 000 r/min 离心 5 min，取下层溶液，过 0.22 μm 有机相滤膜，上机 测定。 8.1.3　基质匹配工作溶液 按 8.1.1 和 8.1.2 所述方法处理制备基质空白溶液，取各组标准工作溶液适量，用基质空白溶液稀 释，配制成合适浓度的基质匹配工作溶液。8.2　测定8.2.1　液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a） 色谱柱：C18 2.1 mm（内径）×100 mm（柱长） ，粒径 3.5 μm，或性能相当者。 b） 流动相：A：0.1 % 甲酸溶液；B：含 0.1 % 甲酸的乙腈（正模式） 。 A：0.5 mmol/L 氟化铵溶液；B：乙腈（负模式） 。c） 流速：400 μL/min；梯度洗脱程序见表 1，负模式和正模式除流动相不同外，其余均相同。 d） 进样量：10 μL。 e） 柱温：35 ℃。 表1　梯度洗脱程序 梯度时间（min） 流动相 A % 流动相 B% 0.0 98 2 1.0 98 2 9.0 2 98 12.5 2 98 13.0 98 2 15.0 98 2 8.2.2　质谱参考条件 质谱参考条件如下： a） 离子源：电喷雾 ESI 源。b） 扫描方式：正离子模式，负离子模式。以正式出版文本为准4SN/T 5724 —2025 c） 分辨率：实际分辨率不小于 20 000［质荷比（m/z）等于 200，按半峰宽（FWHM）计］ 。其 他质谱条件见附录 B.1 以及表 B.1。 8.3 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 8.4　高分辨质谱库建立 输入 120 种兽药的英文、CAS 号及化学式，由高分辨质谱谱库构建软件计算得到每个化合物的理 论质量数，采集 120 种兽药的碎片离子图谱，获得二级谱图，与相应化合物的保留时间、精确质量 数测定值、中英文名称、CAS 号、分子式等信息相关联，完成谱库构建。谱库信息等见表 A.1 以及表B.1，120 种兽药的提取离子流色谱图见图 C。 8.5　定性分析 保留时间和一级准确质量数：通过一级质谱全扫描得到化合物碎片离子的精确分子质量（精确到 小数点后 4 位） ，通过与化合物理论分子量的精确质量数的对比，如果样品中的色谱峰的保留时间与 标准品一致（偏差在 2.5%，不超过 0.5 min） ，所监测定性离子的信噪比 S/N ≥ 3，准确质量最大偏差小于百万分之五（≤ 5 mg/kg） ，二级碎片离子精确质量数的相对偏差百万分之十（≤ 10 mg/kg） ；对于没有二级碎片离子的兽药，两个定性离子的信噪比 S/N ≥ 3，准确质量最大偏差小于百万分之五（≤ 5 mg/kg） ，则可以初步判断试样中含有该种化合物。样品中目标化合物检测浓度大于等于方法方法筛查限时判定为阳性结果。定性分析及判定依据如表 2 所示。 表2 定性分析及判定依据 定性因子 判定标准 备注 方法筛查限 S/N ≥ 3 色谱峰 保