ICS71.100.70 CCSY42 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5709—2025 化妆品中尼古丁含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofnicotineincosmetics— LC-MS/MSmethod 2025-12-11发布 2026-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布前 言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国杭州海关。 本文件主要起草人:吴映璇、邵琳智、董洁、洪灯、陈思敏、庄燕君、蓝草、欧阳少伦、陈永红。 ⅠSN/T5709—2025化妆品中尼古丁含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本文件描述了化妆品中尼古丁含量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于液态水基类、乳液类、膏霜类、散粉类、油状类等化妆品中尼古丁含量的定量测定和确 证。其他化妆品基质经充分验证后参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样采用正己烷、乙腈-甲酸乙酸铵溶液超声提取净化后,经液相色谱-质谱/质谱仪测定,内标法 定量。 5 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 甲酸:色谱纯。 5.3 正己烷。 5.4 乙酸铵:色谱纯。 5.5 5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸溶液:称取0.385g乙酸铵(5.4),量取1mL甲酸(5.2),用水溶解并 定容至1000mL,摇匀备用。 5.6 提取液(乙腈+5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸溶液,90+10,体积比):量取900mL乙腈(5.1)和 100mL5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸溶液(5.5),混匀备用。 5.7 5mmol/L乙酸铵-0.01%甲酸溶液:称取0.385g乙酸铵(5.4),量取0.1mL甲酸(5.2),用水溶解 并定容至1000mL,摇匀备用。 5.8 尼古丁(Nicotine):CAS号:54-11-5;质量浓度:1004mg/L;纯度≥99.7%。 5.9 尼古丁标准储备液(10μg/mL):准确吸取适量尼古丁溶液(5.8),置于10mL容量瓶中,用乙腈定 容至刻度,混匀。该溶液于-18℃密封避光保存,有效期6个月。 5.10 尼古丁标准中间液(1.0μg/mL):准确吸取适量尼古丁标准储备溶液(5.9),置于50mL容量瓶 1SN/T5709—2025中,用乙腈定容至刻度,混匀。该溶液于-18℃密封避光保存,有效期3个月。 5.11 尼古丁标准工作液(0.1μg/mL):准确吸取适量的尼古丁标准中间液(1.0μg/mL)(5.10)至 10mL容量瓶中,用提取液稀释并定容至刻度,摇匀,配制成质量浓度为0.1μg/mL的标准工作液,当 天配制。 5.12 尼古丁同位素标准品:尼古丁-D3(nicotine-D3),CAS号:1173021-00-5;纯度≥99.5%。 5.13 尼古丁同位素标准储备液:准确称取适量的尼古丁同位素标准品(5.12),置于50mL容量瓶 中,用乙腈溶解并定容配制成100μg/mL的同位素标准储备液。该溶液于-18℃密封避光保存,有效 期12个月。 5.14 尼古丁同位素标准中间液(1.0μg/mL):吸取适量的尼古丁同位素标准储备液(5.13)至50mL容 量瓶中,用乙腈稀释并定容至刻度,摇匀,配制成质量浓度为1.0μg/mL的同位素标准中间液。该溶液 于-18℃密封避光保存,有效期3个月。 5.15 尼古丁同位素标准工作液(0.0125μg/mL):准确吸取适量的尼古丁同位素标准中间液 (1.0μg/mL)(5.13)至10mL容量瓶中,用提取液稀释并定容至刻度,摇匀,配制成质量浓度为 0.0125μg/mL的同位素标准工作液,当天配制。 5.16 尼古丁标准工作液:准确吸取一定量的尼古丁标准工作液(5.11)和尼古丁同位素标准工作液 (5.15),用提取液(5.6)配制成质量浓度为0μg/mL、0.002μg/mL、0.005μg/mL、0.01μg/mL、 0.02μg/mL、0.05μg/mL的标准工作溶液,内标质量浓度均为0.00125μg/mL,当天配制。 5.17 滤膜:0.2μm,尼龙膜。 5.18 离心管:具塞,50mL。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:三重四级杆串联质谱仪,配电喷雾离子源(ESI)。 6.2 超声波清洗仪。 6.3 漩涡振荡器。 6.4 高速离心机。 7 测定步骤 7.1 试样的处理 称取试样约0.5g(精确至0.001g),置于50mL离心管中,加入25μL尼古丁同位素标准中间液 (5.14),加入20mL正己烷(5.3),涡旋分散均匀后,准确加入20mL提取液(5.6),超声提取 20min,4000r/min离心5min。弃去上层正己烷,下层清液经滤膜(5.17)过滤后,供液相色谱-质 谱/质谱仪测定。 7.2 测定 7.2.1 液相色谱-质谱/质谱参考测定条件 液相色谱-质谱/质谱参考测定条件如下: a) 色谱柱:HILLIC柱,2.7μm,3.0mm(内径)×100mm,或相当者; b) 流动相:乙腈+5mmol/L乙酸铵-0.01%甲酸溶液,梯度洗脱,洗脱程序见表1; c) 流速:0.35mL/min; d) 柱温:40℃; e) 进样量:10μL; f) 离子源:电喷雾离子源; 2SN/T5709—2025g) 扫描方式:正离子; h) 检测方式:多反应监测(MRM); i) 质谱参考条件:气帘气压力:275kPa;电喷雾电压:4500V;离子源温度:600℃;雾化器压力: 310kPa;辅助气压力:448kPa;多反应监测条件见附录A中表A.1。 表1 流动相梯度洗脱程序 梯度时间/min 乙腈/% 5mmol/L乙酸铵-0.01%甲酸溶液/% 0 90 10 4 45 55 7 45 55 7.1 90 90 12 90 90 7.2.2 液相色谱-质谱/质谱测定和确证 按照7.2.1液相色谱-质谱/质谱条件测定尼古丁标准工作液(5.16)和样液,作单点或多点校准,按 内标法定量样液中的尼古丁含量。试样溶液中待测物含量应在标准曲线的线性范围之内,超出线性范 围则应稀释后再进行分析。在该条件下,尼古丁的多反应监测总离子流图见附录B中图B.1。 按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样和尼古丁标准工作液,如果试样中待测物质的保留时间与 标准工作液的一致(偏差在±2.5%之内),定性离子对的相对丰度,是用相对于最强离子丰度的强度百 分比表示,应与浓度相当标准工作液的相对丰度一致,相对丰度最大允许偏差不超过表2规定的范 围,则可判断试样中存在对应的待测物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 最大允许偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.2.3 空白试验 除不称取试样外,其他均按7.2.2步骤进行。 8 结果计算和表述 单点校正,结果按式(1)计算,计算结果须扣除空白值: X=Cs×Cis×Ai×A'is×V C'si×As×Ais×m×f×1000 1000……………………(1) 式中: X ———试样中尼古丁含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg); Cs———标准工作溶液中尼古丁浓度的数值,单位为微克每毫升(μ/mL); Cis———试样溶液中同位素内标浓度的数值,单位为微克每毫升(μ/mL); Ai———试样溶液中尼古丁的峰面积; A'is———标准工作溶液中同位素内标的峰面积; V———定容体积的数值,单位为毫升(mL); C'is———标准工作溶液中同位素内标浓度的数值,单位为微克每毫升(μ/mL); As———标准工作溶液中尼古丁的峰面积; 3SN/T5709—2025Ais———试样溶液中同位素内标的峰面积; m———供试试样质量的数值,单位为克(g); f———稀释倍数; 1000———换算系数。 多点校正,结果按式(2)计算,计算结果须扣除空白值: X=C×V m×f×1000 1000…………………………(2) 式中: X ———试样中尼古丁含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg); C———从标准工作曲线上查出的试样溶液中尼古丁浓度的数值,单位为微克每毫升(μg/mL); V———试样定容体积的数值,单位为毫升(mL); m———供试试样质量的数值,单位为克(g); f———稀释倍数; 1000———换算系数。 注:含量小于或等于1mg/kg时,计算结果保留2位有效数字;含量大于1mg/kg时,计算结果保留3位有效 数字。 9 检出限和定量限 本方法的检出限为0.03mg/kg,定量限为0.1mg/kg。 10 回收率 尼古丁的添加浓度及其回收率数据见附录C中表C.1。 4SN/T5709—2025