ICS71.100.70 CCSY42 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5707—2025 化妆品中8种脂溶性维生素的测定 高效液相色谱法 Determinationofeightfatsolublevitaminsincosmetics— Highperformanceliquidchromatography 2025-12-11发布 2026-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国上海海关。 本文件主要起草人:钟钰、王粮子、张美金、林海丹、徐惠金、金梦、宋阳、官咏仪。 ⅠSN/T5707—2025化妆品中8种脂溶性维生素的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件描述了膏霜乳类、液体类、粉剂类和蜡基类化妆品中维生素A、维生素A乙酸酯、维生素A 棕榈酸酯、维生素E(α-生育酚)、维生素E乙酸酯(α-生育酚乙酸酯)、维生素D2、维生素D3和维生素K1 的液相色谱检测法及液相色谱-质谱/质谱确证方法。 本文件适用于膏霜乳类、液体类、粉剂类和蜡基类化妆品中维生素A、维生素A乙酸酯、维生素A 棕榈酸酯、维生素E(α-生育酚)、维生素E乙酸酯(α-生育酚乙酸酯)、维生素D2、维生素D3和维生素K1 的定量测定和确证。其他化妆品基质经充分验证后参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 化妆品试样经乙醇或四氢呋喃-乙醇提取,样液经高速离心后,采用液相色谱仪检测,外标法定量。 5 试剂和材料1 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 无水乙醇:色谱纯。 5.1.2 甲醇:色谱纯。 5.1.3 四氢呋喃:色谱纯。 5.1.4 甲酸铵:色谱纯。 5.1.5 甲酸铵甲醇溶液(5mmol/L):称取0.316g甲酸铵(5.1.4),加入适量甲醇(5.1.2)溶解,用甲醇定 容至1L。 5.1.6 甲酸铵溶液(5mmol/L):称取0.316g甲酸铵,加入适量水溶解,用水定容至1L。 1SN/T5707—20255.1.7 维生素A、维生素A乙酸酯、维生素A棕榈酸酯、α-生育酚、α-生育酚乙酸酯、维生素D2、维生素 D3和维生素K1标准物质:标准物质的英文名称、CAS号、分子式见附录A中表A.1,纯度≥95%。 5.1.8 标准储备液:分别准确称取维生素A、维生素A乙酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素D2、维生素 D3和维生素K1各10mg(精确至0.01mg);α-生育酚和α-生育酚乙酸酯标准品各25mg(精确至 0.01mg)于10mL容量瓶中,用无水乙醇(5.1.1)溶解并定容至刻度,摇匀,配制成质量浓度分别为 1000mg/L和2500mg/L的维生素标准储备溶液(临用前进行浓度校正,标准储备液浓度校正方法见 附录B),于-18℃以下避光保存,有效期6个月。 5.1.9 混合标准中间溶液:分别准确吸取适量的标准储备液于25mL容量瓶中,用无水乙醇定容至刻 度,配成混合标准中间溶液,维生素质量浓度分别为:20.0mg/L的维生素A和维生素A乙酸酯、 40.0mg/L的维生素A棕榈酸酯、维生素D2、维生素D3和维生素K1以及500mg/L的α-生育酚和α- 生育酚乙酸酯。于-18℃以下避光保存,有效期3个月。 5.1.10 混合标准工作溶液:取混合标准中间溶液,用适量无水乙醇稀释得混合标准工作溶液,各维生 素质量浓度见表1,现用现配。 表1 8种脂溶性维生素混合标准工作溶液质量浓度 化合物名称 混合标准工作溶液质量浓度/(mg/L) 维生素A 0.100 0.200 0.500 1.00 2.00 5.00 维生素A乙酸酯 0.100 0.200 0.500 1.00 2.00 5.00 维生素A棕榈酸酯 0.200 0.400 1.00 2.00 4.00 10.0 α-生育酚 2.50 5.00 12.5 25.0 50.0 125 α-生育酚乙酸酯 2.50 5.00 12.5 25.0 50.0 125 维生素D2 0.200 0.400 1.00 2.00 4.00 10.0 维生素D3 0.200 0.400 1.00 2.00 4.00 10.0 维生素K1 0.200 0.400 1.00 2.00 4.00 10.0 5.2 材料 5.2.1 具塞比色管:10mL。 5.2.2 容量瓶:10mL、25mL、1000mL。 5.2.3 聚丙烯离心管:1.5mL。 5.2.4 有机相微孔滤膜:0.22μm。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪:配二极管阵列检测器。 6.2 液相色谱-质谱/质谱联用仪:配电喷雾离子源(ESI)。 6.3 分析天平:感量0.01g和0.00001g。 6.4 高速离心机:转速≥10000r/min。 6.5 紫外可见分光光度计。 6.6 涡旋振荡器。 2SN/T5707—20257 测定步骤 7.1 样品预处理 警示———操作过程应避免紫外线光照,尽可能避光操作进行。 7.1.1 膏霜乳类、液体类、粉剂类试样 准确称取试样1.0g(精确至0.01g)于10mL具塞比色管中,加入无水乙醇定容至刻度,摇匀,涡旋 提取15min,移取样液至1.5mL聚丙烯离心管(5.2.3)中,10000r/min离心5min,经0.22μm有机相 微孔滤膜(5.2.4)过滤后供高效液相色谱仪测定或液相色谱-质谱/质谱确证。 7.1.2 蜡基类试样 准确称取试样1.0g(精确至0.01g)于10mL具塞比色管中,加入2mL四氢呋喃(5.1.3),涡旋使 样品分散,再加入无水乙醇定容至刻度,摇匀,涡旋提取15min,移取样液至1.5mL聚丙烯离心管 中,10000r/min离心5min,经0.22μm有机相微孔滤膜过滤后供高效液相色谱仪测定或液相色谱-质 谱/质谱确证。 7.2 测定 7.2.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下: a) 色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm(内径),5μm,或性能相当者。 b)柱温:35℃。 c)流动相:甲醇-水,梯度洗脱程序及流速见表2。 d)检测波长:325nm(维生素A、维生素A乙酸酯、维生素A棕榈酸酯),294nm(α-生育酚); 286nm(α-生育酚乙酸酯);264nm(维生素D2、维生素D3);271nm(维生素K1)。 e)进样量:20μL。 表2 梯度洗脱程序及流速 时间/min 甲醇/% 水/% 流速/(mL/min) 0.00 95 5 1.0 12.0 95 5 1.0 14.0 100 0 1.0 15.0 100 0 1.8 24.0 100 0 1.8 25.0 95 5 1.8 26.0 95 5 1.0 30.0 95 5 1.0 3SN/T5707—20257.2.2 测定 取试样溶液和相应的标准溶液分别进行色谱分析,作单点或多点校准,按外标法定量。试样溶液中 待测物的响应值应在仪器线性响应范围内,超出线性范围则应稀释后再进行分析。在7.2.1所述色谱 条件下,8种脂溶性维生素标准品的液相色谱图见附录C中图C.1~图C.5。 7.2.3 空白试验 不称取试样,按样品分析步骤操作,应不含有干扰待测组分的物质。 8 结果计算和表述 8.1 试样中待测组分的含量单点校正,结果按式(1)计算。 X=Cs×V×Ai×1000 As×m×1000…………………………(1) 式中: X ———试样中待测组分含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg); Cs———标准溶液中待测组分质量浓度的数值,单位为毫克每升(mg/L); Ai———试样溶液中待测组分的峰面积; As———标准溶液中待测组分的峰面积; V———试样定容体积的数值,单位为毫升(mL); m———供试试样质量的数值,单位为克(g); 1000———换算系数。 计算结果保留3位有效数字。 8.2 试样中待测组分的含量多点校正,结果按式(2)计算获得。 X=C×V×1000 m×1000…………………………(2) 式中: X ———试样中待测组分的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); C———从标准工作曲线得到的试样溶液中待测组分的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L); V———试样定容体积,单位为毫升(mL); m———试样质量,单位为克(g); 1000———换算系数。 计算结果保留3位有效数字。 9 检出限、定量限、回收率 9.1 检出限和定量限 本方法中维生素A、维生素A乙酸酯的检出限为0.6mg/kg,定量限为2.0mg/kg。维生素A棕榈 酸酯、维生素D2、维生素D3和维生素K1的检出限为1.2mg/kg,定量限为4.0mg/kg。α-生育酚和α- 生育酚乙酸酯的检出限为15mg/kg,定量限为50mg/kg。 9.2 回收率和精密度 本方法对膏霜乳类、液体类、粉剂类和蜡基类等化妆品基质进行添加回收率试验,不同基质的回收 4SN/T5707—2025