中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 出口蜂产品中硝基咪唑类药物残留量的 测定　液相色谱 -质谱 /质谱法 Determination of nitroimidazoles residues in bee products for export — LC‑MS/MS methodICS 67.050 CCS C 53 2025 ‑12‑11发布 2026 ‑07‑01实施 中华人民共和国海关总署 　发 布 SN/T 2579 —2025 代替 SN/T 2579 —2010SN/T 2579 —2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 本文件代替 SN/T 2579 —2010《进出口蜂王浆中 10种硝基咪唑类药物残留量的测定　液相色谱 - 质谱 /质谱法》 ，除结构调整和编辑性改动以外 ，主要技术变化如下 ： ——更改了标准名称 ； ——适用范围增加了蜂蜜和蜂花粉 ，检测药物增加了替硝唑 、奥硝唑、塞克硝唑和特硝唑 （见第 1章， 2010年版的第 1章） 。 请注意文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：中华人民共和国杭州海关 、中华人民共和国南京海关 、中华人民共和国秦皇岛海关 技术中心 、中华人民共和国汕头海关 。 本文件主要起草人 ：侯建波、谢文、史颖珠、汪鹏、丁涛、雷美康、崔宗岩、钱艳、毛壬熠、季美泉、陆奕娜。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 ： ——2010年首次发布为 SN/T 2579 —2010； ——本次为第一次修订 。 ⅠSN/T 2579 —2025 出口蜂产品中硝基咪唑类药物残留量的 测定　液相色谱 -质谱 /质谱法 1 范围 本文件描述了蜂蜜 、蜂王浆和蜂花粉中甲硝唑 、二甲硝咪唑 、洛硝哒唑 、替硝唑、异丙硝唑 、2-甲硝咪 唑、奥硝唑、苯硝咪唑 、氯甲硝咪唑 、塞克硝唑 、特硝唑、羟基甲硝唑 、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑残留 量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法 。 本文件适用于蜂蜜 、蜂王浆和蜂花粉中甲硝唑 、二甲硝咪唑 、洛硝哒唑 、替硝唑、异丙硝唑 、2-甲硝咪 唑、奥硝唑、苯硝咪唑 、氯甲硝咪唑 、塞克硝唑 、特硝唑、羟基甲硝唑 、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑残留 量的定量测定和确证 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 方法提要 试样中硝基咪唑类药物经乙酸乙酯提取 ，提取液经固相萃取柱净化后 ，采用液相色谱 -质谱 /质谱法 测定，甲硝唑、二甲硝咪唑 、洛硝哒唑 、替硝唑、异丙硝唑 、羟基甲硝唑 、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑采 用内标法定量 ，2-甲硝咪唑 、奥硝唑、苯硝咪唑 、氯甲硝咪唑 、塞克硝唑和特硝唑采用外标法定量 。 5 试剂和材料 除非另有说明 ，所用试剂均为分析纯 ，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇（CH 3OH） ：色谱纯。 5.1.2 甲酸（HCOOH ） ：色谱纯。 5.1.3 乙酸乙酯 （CH 3COOCH 2CH 3） ：色谱纯。 5.1.4 氯化钠（NaCl） 。 5.1.5 氢氧化钠 （NaOH） 。 5.1.6 二水合磷酸二氢钠 （NaH 2PO 4·2H2O） 。 1SN/T 2579 —2025 5.2 试剂配制 5.2.1 0.1 mol/L氢氧化钠溶液 ：称取 4 g氢氧化钠 （5.1.5） ，用水溶解稀释并定容至 1 L。 5.2.2 磷酸盐缓冲溶液 ：溶解 17.9 g二水合磷酸二氢钠 （5.1.6）于950 mL水中，用0.1 mol/L氢氧化钠 溶液（5.2.1）调节 pH到8.0，用水定容至 1 L。 5.2.3 0.1%甲酸水溶液 ：移取 1 mL甲酸（5.1.2） ，用水稀释并定容至 1 L。 5.2.4 甲醇 -0.1%甲酸水溶液 （15+85，体积比）：移取 15 mL甲醇（5.1.1）和85 mL 0.1%甲酸水溶液 （5.2.3） ，混匀。 5.2.5 10%甲醇溶液 ：移取 10 mL甲醇（5.1.1） ，用水稀释并定容至 100 mL。 5.3 标准物质 5.3.1 硝基咪唑类药物标准物质 ：甲硝唑、二甲硝咪唑 、洛硝哒唑 、替硝唑、异丙硝唑 、氯甲硝咪唑 、苯硝咪 唑、2-甲硝咪唑 、奥硝唑、塞克硝唑 、特硝唑、羟基甲硝唑 、羟基二甲硝咪唑和羟基异丙硝唑 ，化合物的中英 文名称，CAS号，分子式和相对分子质量见附录 A表A.1，纯度大于或等于 98.5%。或具有有证标准物 质证书的标准物质 。 5.3.2 硝基咪唑类药物同位素内标标准物质 ：甲硝唑 -13C2，15N2、二甲硝咪唑 -D3、洛硝哒唑 -D3、替硝 唑-D5、异丙硝唑 -D3、羟基甲硝唑 -D2、羟基二甲硝咪唑 -D3和羟基异丙硝唑 -D3，化合物的中英文名称 ， CAS号，分子式和相对分子质量见附录 A表A.1，纯度大于或等于 98%。或具有有证标准物质证书的 标准物质 。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备液 （1.0 mg/mL） ：准确称取适量经折算的各硝基咪唑类药物标准物质 （5.3.1，精确至 0.1 mg） ， 分别用甲醇溶解 ，配制成质量浓度为 1.0 mg/mL 标准储备液 ，0 ℃~ 4 ℃下避光保存 ，有效期 6个月。 5.4.2 中间混合标准溶液 （10 μg/mL） ：分别吸取 100 μL各硝基咪唑类药物标准储备液 （5.4.1） ，移入 10 mL 容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制质量浓度为 10 μg/mL混合标准溶液 。0 ℃~ 4 ℃避光保存 ，有效 期3个月。 5.4.3 中间混合工作液 1（100 ng/mL） ：吸取 100 μL的中间混合标准溶液 （5.4.2） ，移入 10 mL容量瓶， 用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制质量浓度为 100 ng/mL混合标准溶液 ，使用前配制 。 5.4.4 中间混合工作液 2（10 ng/mL） ：吸取 1 000 μL的中间混合工作液 1（5.4.3） ，移入 10 mL容量瓶， 用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制质量浓度为 10 ng/mL混合标准溶液 ，使用前配制 。 5.4.5 同位素内标储备液 ：准确称取适量经折算的各硝基咪唑类药物同位素 内标标准物质 （5.3.2，精确至 0.1 mg） ， 分别用甲醇溶解 ，配制成质量浓度为 1.0 mg/mL 同位素内标储备液 。 5.4.6 同位素内标中间混合标准溶液 （10 μg/mL） ：分别吸取 100 μL各硝基咪唑类药物同位素内标储备 液（5.4.5） ，移入 10 mL容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制质量浓度为 10 μg/mL同位素内标中间混 合标准溶液 。 5.4.7 同位素内标混合工作液 （10 ng/mL） ：分别吸取 100 μL的同位素内标 中间混合标准溶液 （5.4.6） ， 移入 100 mL容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制质量浓度为 10 ng/mL同位素内标混合标准溶液 ， 使用前配制 。 5.4.8 空白基质溶液 ：将不含各硝基咪唑类药物的空白样品 ，按照 8.1和8.2前处理后得到的溶液 。 5.4.9 标准工作溶液 ：根据需要用空白基质溶液 （5.4.8）将中间混合工作液 1和中间混合工作液 2（5.4.3， 5.4.4）稀释成为 0 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL 和10 ng/mL（甲硝唑、替硝唑、 塞克硝唑 、特硝唑）和0 ng/mL、0.4 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、10 ng/mL和20 ng/mL（二甲硝咪唑 、 2SN/T 2579 —2025 洛硝哒唑 、异丙硝唑 、2-甲硝咪唑 、奥硝唑、苯硝咪唑 、氯甲硝咪唑 、羟基甲硝唑 、羟基二甲硝咪唑 、羟基异 丙硝唑）的混合标准工作溶液 ，同位素内标浓度均为 1.0 ng/mL，使用前配制 。 5.5 材料 5.5.1 HLB（亲水 -疏水平衡 ）固相萃取小柱 （500 mg， 6 mL）或性能相当者 ，使用前依次用 5 mL甲醇和 5 mL 水活化。 5.5.2 C18固相萃取小柱 （500 mg，3 mL）或性能相当者 ，使用前用 3 mL甲醇活化 。 5.5.3 微孔滤膜 ：0.22 μm，有机相。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -质谱 /质谱仪：配电喷雾离子源 （ESI） 。 6.2 分析天平 ：感量为 0.01 g、0.001 g和0.000 1 g。 6.3 粉碎机。 6.4 固相萃取装置 。 6.5 高速离心机 ：最大转速不低于 10 000 r/min。 6.6 pH计。 6.7 涡旋振荡器 。 6.8 旋转蒸发仪 。 6.9 具塞离心管 ：15 mL和50 mL。 7 试样制备与保存 7.1 蜂蜜 取500 g代表性蜂蜜样品 ，未结晶的样品将其用力搅拌均匀 ，有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧 后，置于不超过 60 ℃的水浴中温热 ，等样品全部熔化后搅匀 ，迅速冷却至室温 。在熔化时必须注意