以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2329 —2025 代替 SN/T 2329— 2009 进出口化妆品眼刺激性 / 腐蚀性 鸡胚绒毛尿囊膜试验 Ocular irritation and corrosive HET-CAM test for cosmetics of import and export 2025 -12-11发布 2026 -07-01 实施ICS 71.100.70 CCS Y 42 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准 SN/T 2329 —2025I前 言 本文件按照 GB/T 1.1— 2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件代替 SN/T 2329—2009 《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验》 ，与 SN/T 2329— 2009 相比，除编辑性改动外，主要技术变化如下： a） 修改表 1 中“强刺激性”的刺激评分和眼刺激性分类名称； b） 修改表 2 中“强刺激性”的眼刺激性分类名称； c） 修改“终点评价法”中终点评分的计算方式； d） 删除了“附录 B 试验报告” 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：广州海关技术中心。 本文件主要起草人：温巧玲、乔栖梧、鲍佳生、潘芳、席静、潘丙珍、陈德明、黄丽霞、黄雄 俊、张梓龙、刘慧智、潘素华、易蓉、陈文锐。 本文件所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2009 年首次发布为 SN/T 2329— 2009 ； ——本次为第一次修订。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 2329 —2025进出口化妆品眼刺激性 / 腐蚀性 鸡胚绒毛尿囊膜试验 1 范围 本文件规定了化妆品原料和成品眼刺激性 / 腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验方法。 本文件适用于化妆品原料和成品眼刺激性 / 腐蚀性作用的筛选和检测。 本文件可作为毒性试验的一部分，结合其他替代试验方法用于受试物的眼刺激性 / 腐蚀性整体 评价。 本文件也可作为制药、农业和工业化学物质、日化用品、消毒产品和污染物毒性测定的参考方法。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 眼睛刺激性 eye irritation 眼球表面直接接触受试样品后引起的可逆性炎性变化。 3.2 眼睛腐蚀性 eye corrosion 眼球表面直接接触受试样品后引起的不可逆性组织损伤。 3.3 绒毛尿囊膜 chorioallantoic membrane; CAM 鸡胚胚龄 4 日～ 5 日时，由绒毛膜体壁中胚层和尿囊膜脏层中胚层融合而成绒毛尿囊膜，其组织 学结构有 3 层。 3.4 出血 hemorrhage 血液从 CAM 的血管内流出血管外，可以表现为血管外出现点状出血或絮状的弥漫性出血等多种 形式。 3.5 凝血 coagulation 血管内和血管外蛋白的变性，表现为血管内血流变慢或血栓形成，血管呈现棕黑色，血管外出 现混浊和不透明。以正式出版文本为准2 SN/T 2329 —20253.6 血管融解 blood vessel lysis CAM 上血管壁破裂，血管融解消失。 4 缩略语 下列缩略语适应于本文件。 CAM：绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane） ES：终点评分（end point score） IS：刺激评分（irritation score） sec C：凝血时间（coagulation time） sec H：出血时间（hemorrhage time） sec L：血管融解时间（vessel lysis time） Texapon ASV：脂肪醇醚硫酸钠盐混合物（sodium magnesium laury-myristyl-6-ethoxy-sulphate） 5 试验基本原理 CAM 是一个呼吸性膜，血管丰富，包围在鸡胚周围，类似于人和哺乳动物的结膜。鸡胚绒毛尿 囊膜试验 （hen’ s egg test-chorioallantoic membrane, HET-CAM） 利用孵化的鸡胚中期 CAM 血管系统完整、 清晰和透明的特点，将一定量受试物直接与 CAM 作用一段时间后，观察 CAM 毒性效应指标 （如出血、 血管融解和凝血）的变化并进行评分，以评估受试物的眼刺激性。 6 试剂、材料与设备 6.1 试剂 除非另有说明，本文件所使用的试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 6.1.1 0.9 % 氯化钠（0.9 % NaCl） （w/v） 。 6.1.2 1% 十二烷基硫酸钠（1 % sodium dodecyl sulfate , 1 % SDS） （w/v） 。 6.1.3 0.1 mol/L 氢氧化钠（0.1 mol/L NaOH） 。 6.1.4 橄榄油或花生油（使用经验证证实无眼刺激性反应的橄榄油或花生油） 。 6.2 材料 6.2.1 玻璃器皿：小烧杯。 6.2.2 pH 计或 pH 试纸。 6.2.3 牙科锯齿弯镊或弯头镊。 6.2.4 一次性适配吸头。 6.3 设备 6.3.1 微量加样器。 6.3.2 电子计时器。 6.3.3 照蛋器。 6.3.4 带自动翻蛋装置的孵化器。 6.3.5 体视显微镜（最好带 CCD 摄像头） 。 6.3.6 电子天平：感量 0.1 g。以正式出版文本为准3 SN/T 2329 —20257 试验准备 7.1 鸡胚 7.1.1 品系和来源 选用白莱杭鸡（White Leghorn chicken）等品种的受精鸡胚，优先选用 SPF 鸡胚，且来源于有资 质的合格供应商，质量符合国家标准的要求。 7.1.2 运输与贮存 转移或运输鸡胚不能影响胚胎活性和发育。转移或运输时，应将鸡胚气室朝上贮存于蛋托上，尽 量避免对鸡胚进行摇动、不必要的倾斜、敲打以及其他机械性刺激。 7.1.3 质量要求 购买 7 日龄以内的鸡胚。鸡胚应新鲜、干净、完好，重量 50 g ～ 60 g。孵化至 9 日龄时，应进 行照蛋检查，舍弃未受精、无活性或有缺陷的鸡胚，也不能使用严重畸形、破壳或薄壳鸡胚。 7.1.4 孵化条件 室温 20 ℃～ 25 ℃，相对湿度 45 % ～ 70 %。 孵化温度 37.5 ℃ ± 0.5 ℃，相对湿度 55 % ～ 70 %， 翻蛋频率每 3 h ～ 6 h 一次。鸡胚孵化至 9 日龄时不必再翻蛋。 7.1.5 CAM 制备 7.1.5.1 鸡胚孵化至 9 日龄时，用照蛋器进行照蛋检查，在蛋壳表面标记气室位置。 7.1.5.2 用牙科锯齿弯镊剥去带标记的蛋壳部分，暴露白色蛋膜，小心操作避免破坏蛋膜完整性。 7.1.5.3 用吸管滴加 1 mL ～ 2 mL 0.9 % 氯化钠溶液使蛋膜湿润，然后立即进行下一步操作。如暂时 无法操作，应将鸡胚置于孵化器或灯光下以防止鸡胚温度降低，但放置时间不应超过 20 min。 7.1.5.4 将 0.9 % 氯化钠溶液倾出或吸干，用镊子小心地除去内膜，确保不损伤血管膜。再次观察鸡 胚血管系统的结构，选择血管系统完好、没有缺陷的鸡胚用于试验。 7.2　受试物及制备 7.2.1　液体受试物 透明液体受试物一般无需稀释，可直接使用原液，采用反应时间法进行试验；不透明液体受试 物（如混浊和有颜色的悬浮液体）应采用终点评价法进行试验，不透明的浑浊液体受试物可用适当溶 剂溶解 / 稀释成为最高浓度透明溶液，采用反应时间法进行试验。 7.2.2　固体受试物 7.2.2.1 固体受试物应采用终点评价法进行试验。膏状、微粒状或颗粒样受试物或产品无需稀释，应 以原样进行试验；固体受试物试验前应研磨成细微的颗粒状（或粉状） ，粉状受试物可在刻度容器中 （如微量离心管）经轻度挤压至体积为 0.3 mL。 7.2.2.2 如有必要对固体受试物进行稀释，可选择一级水、0.9 % 氯化钠溶液、橄榄油或花生油作为 稀释剂。如果使用其他的稀释剂 / 介质，应当证明不同稀释剂 / 介质的使用是合理的。固体受试物的 稀释液应在试验当天制备。 7.2.2.3 如受试物为膏状物，应将受试物涂布于塑料薄膜（如封口膜）表面成薄层，再将其覆盖在 CAM 上使受试物能与 CAM 直接接触，作用时间结束后除去薄膜。以正式出版文本为准4 SN/T 2329 —20257.2.2.4 固体受试物也可用一级水溶解，以其能达到的最大溶解度的透明溶液采用反应时间法进行 试验。 7.3　对照物质及制备 7.3.1 阴性对照 7.3.1.1 0.9 % 氯化钠溶液通常用于作为阴性对照和受试物作用后冲洗。 7.3.1.2 每次受试物测试均应设置 0.9 % 氯化钠溶液作为阴性对照，确保试验条件不会导致发生刺激 性反应。 7.3.2　溶剂 / 载体对照 7.3.2.1 如果受试物用橄榄油（或花生油）进行稀释，应设置橄榄油（或花生油）作为溶剂对照。 7.3.2.2 如果使用一级水、0.9 % 氯化钠溶液、橄榄油或花生油以外的其他溶剂或