ICS 67.220.10 X40/49 HS 中华人民共和国海关行业标准 HS/T24—2009 酒花浸膏中α-酸和β-酸的测定方法液 相色谱-串联质谱法 Qualitativeandquantitativemethodforthedeterminationofa-acid andβ-acidinhopconcretes-LC-MS/MSmethod 2009-02-29发布 2009-04-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 HS/T24—2009 前言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由中华人民共和国海关总署关税征管司提出。 本标准由中华人民共和国海关总署政策法规司归口。 本标准起草单位：中华人民共和国大连海关。 本标准主要起草人：尹兵、王恒毅、李大志、孙利。 HS/T24—2009 酒花浸膏中α一酸和β一酸的测定方法液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了酒花浸膏中α-酸和β-酸含量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于进出口酒花浸膏中α-酸和β-酸的定性和定量分析。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准： 3. 1 a-酸 a-acid 酒花浸膏中的草酮类成分，包括合草酮（cohumulone）和加草酮（adhumulone）。 3.2 β-酸 β-acid 酒花浸膏中的蛇麻酮类成分，包括合蛇麻酮（colupulon）和加蛇麻酮（adlupulone）。 4总则 本标准应用了下列方法： 按照本标准规定进行样品制备，通过高效液相色谱对酒花浸膏中的α-酸和β-酸进行分离，使用二 级质谱对α-酸和β-酸进行检测，通过建立标准曲线，对酒花浸膏中α-酸和β-酸进行定性定量分析。 试剂和材料 5 本标准使用下列试剂和材料： a）甲醇：色谱纯； 乙睛：色谱纯； c) 甲酸：色谱纯； (P 8%甲酸：量取8mL甲酸，用水稀释，定容至100mL，水为GB/T6682规定的一级水； e) 酒花浸膏标准品。 安全提示：本标准使用的甲醇和乙睛为有害和易挥发试剂，使用者应当在无明火、通风良好的环境 中进行操作。 仪器和设备 本标准使用下列仪器和设备： a）天平：感量0.1mg; b)元 超声波清洗仪： HS/T24—2009 c) 恒温水浴； (P 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾的离子源。 7试样制备 7.1标准样品溶液的制备 将酒花浸膏标准样品置于30℃恒温水浴中，搅拌均匀。准确称取0.5g（精确至0.001g）标准酒花浸 膏于50mL烧杯中，加入30mL甲醇于超声波中震荡5分钟溶解，将溶解液转移到100mL容量瓶，用甲醇定容， 混匀，用0.45μm滤膜过滤。 7.2试样制备 准确称取约0.5g样品（精确至0.001g）置于烧杯中，加入甲醇溶解，将溶液定量转移入100mL容量 瓶，加入甲醇定容至100mL，移取10mL溶液置于50mL容量瓶中，用甲醇定容至50mL。混匀，用0.45um滤 膜过滤，作为待测溶液。 测定步骤 8 8.1 液相色谱条件 本标准使用下列液相色谱条件： a) 色谱柱：ZORBAXExtend-C-18（5μm，150mmX4.6mm）或相当： b) 柱温：25℃； c) 流动相：乙睛+8%甲酸溶液（85+15）%； (P 流速：0.8mL/min; e) 进样量：10uL； f) 检测器：DAD，检测波长330nm。 质谱条件 8. 2 本标准使用下列质谱条件： a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）： b) 鞘气流速：21L/min； c) 辅助气流速：4.5L/min； (P 喷雾电压：5kV； e) 毛细管温度：350℃； f) 毛细管电压：15V； 检测模式：负离子模式，二级质谱检测； g) h) 质量扫描范围：m/z150-500amu； 定性定量离子对见表1。 表1(-酸和β-酸的定性定量离子对 中文名称 英文名称 定性离子对(amu) 定量离子对(amu) 合草酮 cohumulone 347.3/278.4 347.3/278.4 347.3/235.4 加草酮 adhumulone 361.3/292.5 361.3/292.5 361.3/249.5 合蛇麻酮 colupulone 399.3/330.5 399.3/330.5 398.7/287.5 加蛇麻酮 adlupulone 413.4/344.5 413.4/344.5 413.4/301.6 8.3 液相质谱-串联质谱测定 HS/T24—2009 8.3.1定性分析 按照8.1和8.2的分析条件分析样品，在相同实验条件下，如果检出的色谱峰的保留时间与标准液中 的组分一致，质谱图检测到合草酮、加草酮、合蛇麻酮和加蛇麻酮的准分子离子峰[M-H，并且准 分子离子峰的二级质谱碎片峰与目标成分的裂解规律相符，可判定样品中存在对应的待测物。 8.3.2定量测定 用不同浓度的酒花浸膏标准溶液分别进样，以目标成分的单离子扫描质谱图峰面积为纵坐标，工作 溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。样品溶液待测组分的响应值 均应在仪器测定的线性范围内。在上述的色谱条件和质谱条件下，四种α-酸和β-酸的保留时间见表2， 其标准总离子流图见附录A图A.1。 表2 α-酸和β-酸的参考保留时间 中文名称 保留时间/min 合草酮 4. 76 加蕉草酮 5.52 合蛇麻酮 8. 38 加蛇麻酮 10. 31 8.4平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 9 结果计算 结果按式（1）计算： V100 X=cx- (1) X m1000 式中：X----试样中被测组分含量，单位为百分之百（%)； 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）： C- V---样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL)： Ⅲ----样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g)。 计算结果保留小数点后一位。 10 精密度 实验室平行测定或连续两次测定结果的相对标准偏差不大于5%。 11 实验报告 实验报告应至少包括下列内容： a) 实验依据的标准和参考资料： b) 实验的日期和地点； c) 实验结果； (P 偏离标准的差异： e) 在实验中观察到的异常现象。