ICS 65.020.01 CCS B 05 41 河南省 地方标准 DB41/T 3027—2025 花椒组织培养快繁技术规程 2025 - 10 - 30发布 2026 - 01 - 29实施 河南省市场监督管理局 发布 DB41/T 3 027—2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 1 5 培养前准备 ................................ ................................ ......... 2 6 培养基配制 ................................ ................................ ......... 2 7 外植体处理 ................................ ................................ ......... 2 8 芽诱导 ................................ ................................ ............. 2 9 增殖培养 ................................ ................................ ........... 2 10 生根培养 ................................ ................................ .......... 3 11 炼苗与移栽 ................................ ................................ ........ 3 12 档案管理 ................................ ................................ .......... 3 附录A（资料性） WPM培养基成分 ................................ ....................... 4 附录B（资料性） MS营养液成分 ................................ ........................ 5 DB41/T 3027 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由河南省林业局提出并归口。 本文件起草单位：河南省林业科学研究院、河南农业大学。 本文件主要起草人：王文君、翟晓巧、任媛媛、王念、侯志华、何威、董玉山、陈超、王星斗。 DB41/T 3027 —2025 1 花椒组织培养快繁技术规程 1 范围 本文件规定了花椒组织培养快繁的术语和定义、缩略语、培养前准备、培养基配制、外植体处理、 芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗与移栽、档案管理等内容。 本文件适用于花椒的组织培养快繁育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 花椒 花椒（ Zanthoxylum bungeanum Maxim.）为芸香科花椒属落叶小乔木，枝具短刺，小叶对生。顶生 花序，花被片黄绿色， 雌花常无发育雄蕊。果紫红色， 分果瓣具油点。 花期4～5月， 果期 8～9月或10月。 外植体 从植株上切取下来用于建立组织培养体系的离体植物器官或组织。 芽诱导 将培养材料在诱导培养基中进行培养，诱导分化出不定芽的过程。 增殖培养 将诱导产生的不定芽转移到增殖培养基进一步扩大培养的过程。 生根培养 将诱导产生的芽转移到生根培养基中诱导生根从而形成完整植株的过程。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 6-BA：六苄氨基腺嘌呤（ 6-Benzylaminopurine ） NAA：萘乙酸（ Naphthalene Acetic Acid ） DB41/T 3027 —2025 2 TDZ：噻苯隆（ Thidiazuron ） IBA：吲哚丁酸（ Indolebutyric Acid ） WPM：WPM基本培养基（ Woody Plant Medium ） MS：MS培养基（ Murashige and Skoog culture medium ） 5 培养前准备 器械灭菌 将培养容器瓶、剪刀、镊子、解剖刀等接种器械用灭菌袋包好，置于高压蒸汽灭菌锅中 121 ℃灭菌 20 min。 无菌水准备 根据生产需要，取适量蒸馏水于三角瓶等容器中，高压蒸汽灭菌锅 121 ℃灭菌20 min，之后取出备 用。 6 培养基配制 以WPM为基本培养基进行培养基配置（ WPM培养基成分见附录 A）。 芽诱导及增殖培养基为 WPM+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.003 mg/L TDZ+20 g/L蔗糖+5.0 g/L琼脂。 生根培养基为 WPM+1.5 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+35 g/L蔗糖+4.5 g/L琼脂。 将配置好的培养基分装至培养瓶中 （常用容量为350 mL，1 L培养基可分装 10～12瓶），分装后封口、 标记，置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌。培养基的 配制程序 按照LY/T 1882 的规定执行。 7 外植体处理 外植体选择 宜选生长健康的花椒当年生嫩枝，取叶柄 1.0 cm～1.5 cm为外植体。 外植体处理 取花椒叶片的叶柄，用清水清洗干净后，先用 75%乙醇浸泡 1 min，再用7.5%次氯酸钠溶液浸泡 15 min～30 min，最后在无菌环境中用无菌水冲洗 4～6次。 8 芽诱导 将处理好的叶柄两端各剪掉 1.0 mm～2.0 mm后，将其接种于芽诱导培养基上，培养瓶放置于培养室 中。培养温度为 25±2 ℃，光照强度 1 500 lx～3 000 lx。光周期通常采用光照 16 h、黑暗8 h。培养30 d左 右分化出芽。 9 增殖培养 DB41/T 3027 —2025 3 当诱导出的芽高 1.5 cm～3.0 cm时接种于增殖培养基上。培养瓶放置于培养室中，培养条件同 芽诱 导。通常增殖芽高 1 cm左右时更换增殖培养基 继续培养 。 10 生根培养 当诱导出的丛生芽长到 2.5 cm～3.0 cm高时，从茎基部切下，接种于生根培养基上进 行生根培养。 培养瓶放置于培养室中，培养条件同 芽诱导。 11 炼苗与移栽 当花椒幼苗在生根培养基上根长到约 3.0 cm～3.5 cm高时，在自然光下先闭口炼苗 7 d左右，然后 敞 口炼苗7 d左右。炼苗后取出生根苗，清洗 掉根部培养基，移入装有基质（蛭石 +草炭土按 1:1比例混合后 用5%高锰酸钾消毒处理或 121 ℃高温灭菌 20 min）的穴盘（可选穴径和穴深为 6.5 cm）中，放到 温室中培 养，用MS营养液（ MS营养液成分见附录 B）浇灌保持基质湿润，初始 14 d内空气湿度保持 85%以上，温度 25 ℃～28 ℃，14 d后湿度逐渐降低与室外环境相同， 约30 d后移栽到大田中。 12 档案管理 建立花椒组织培养基本情况档案，包括以下内容：品种名称、材料来源、培养过程、培养照片等。 档案由组培人员填写，档案填写后，及时整理归档。 DB41/T 3027 —2025 4 A A 附录 A （资料性） WPM培养基成分 表A.1给出了花椒组织培养 WPM培养基成分。 表A.1 花椒组织培 养WPM培养基成分表 名称 成分 含量（mg/L） 大量元素 硫酸钾K2