! 7 ,     江苏省市场监督管理局 发　布 中 国 标 准 出 版 社 出　版草莓拟盘根腐病抗性鉴定评价技术规程 Technical code of practice for resistance identification of Neopestalotiopsis crown rot in strawberry 2025 -12-30发布 2026 -01-30实施CCS B 05 DB32/T 5303—2025ICS 65.020.20DB32/T 5303—2025 前言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ 1 范围………………………………………………………………………………………………………… 1 2 规范性引用文件 …………………………………………………………………………………………… 1 3 术语和定义 ………………………………………………………………………………………………… 1 4 室内鉴定 …………………………………………………………………………………………………… 1 5 田间鉴定 …………………………………………………………………………………………………… 2 6 抗性结果 …………………………………………………………………………………………………… 4 7 档案记录 …………………………………………………………………………………………………… 4 附录 A（资料性） 草莓拟盘根腐病病情调查记录表 ………………………………………………………… 5 附录 B（资料性） 草莓拟盘根腐病的田间症状及发病规律 ………………………………………………… 6目　　次 ⅠDB32/T 5303—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由江苏省农业农村厅提出并组织实施 。 本文件由江苏省园艺标准化技术委员会归口 。 本文件起草单位 ：江苏省农业科学院 。 本文件主要起草人 ：吴娥娇、庞夫花、陈晓东、乔玉山、耿中元、关玲、袁华招、王庆莲、蔡伟建、许林林、 梁佳惠、赵密珍、王静、夏瑾。 ⅢDB32/T 5303—2025 草莓拟盘根腐病抗性鉴定评价技术规程 1 范围 本文件规定了草莓拟盘根腐病抗性鉴定中的室内鉴定 、田间鉴定 、抗性结果 、档案记录的技术要求 。 本文件适用于草莓种质资源拟盘根腐病抗性的鉴定与评价 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性的引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注明日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于 本文件。 NY/T 2931　草莓种质资源描述规范 NY/T 4519　热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程　咖啡炭疽病 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 草莓拟盘根腐病 strawberry Neopestalotiopsis crown rot 由新拟盘多毛孢属 （Neopestalotiopsis spp.）病原真菌侵染所致 ，主要危害草莓根颈部 、叶片及萼片等 部位，受害植株矮化瘦弱 、新叶失绿不对称 、叶片现褐色或红褐色病斑等症状的病害 。 4 室内鉴定 4.1 病原菌分离与纯化 田间采集典型发病植株 ，记录采集地点 、品种、时间及病害症状 。采用常规组织分离法从发病植株的 根颈部、叶片等病健交界处分离病原菌 ，对分离物进行单孢分离纯化和致病性测定 ，经形态学和分子鉴 定，确认为草莓拟盘根腐病菌 。 4.2 病原菌回接 将纯化培养 7 d~10 d且经镜检后的病原菌制成浓度为 1×106个/mL孢子悬浮液 ，回接到草莓离体 叶片上，开展致病性测定与科赫氏法则验证 ，叶片和接种体的制备分别按照 NY/T 2931和NY/T 4519 的规定进行 。 4.3 病原菌保存 纯化后的病原菌采用滤纸片干燥法于 -40 ℃低温冰箱中长期保存 。 4.4 病原菌活化 将保存的病 原菌接种至 PDA培养基中 ，26 ℃恒温避光培养 7 d，待菌落长至培养皿面积的 80%时， 1DB32/T 5303—2025 用无菌打孔器在菌落边缘制取直径 5 mm的菌饼，将菌饼（菌丝面朝下 ）接种于 PDA培养基中央 ，培养， 备用。 4.5 离体叶片接种 取大小、叶龄（约2周）一致的新鲜健康草莓叶片 ，置于含 1%琼脂培养基的培养皿 ，每皿放 2片（叶 背朝上） ，用昆虫针在叶背刺一直径约 0.5 mm的孔。从活化 7 d的菌落边缘取直径 5 mm菌饼，倒置接 种于伤孔处 ，每处理 3皿（共6片叶） ，以无菌 PDA菌饼为对照 。于温度 26 ℃、相对湿度 95%、光 16 h / 暗8 h 条件下培养 48 h 后将叶片翻为正面 ，用刻度尺采用十字交叉法测量病斑与叶片面积 。 4.6 抗性水平分析 基于病斑面积占叶片面积的百分比 ，将离体叶片拟盘根腐病抗性水平划分为 6个等级，如图 1和表 1所示。 表1　离体叶片拟盘根腐病抗性评价 抗性等级 免疫（I） 高抗（HR） 抗病（R） 中抗（MR） 感病（S） 高感（HS）病斑面积占叶片面积 % 叶片无病斑 0<病斑面积占叶片面积 ≤10% 10%<病斑面积占叶片面积 ≤25% 25%<病斑面积占叶片面积 ≤50% 50%<病斑面积占叶片面积 ≤75% 病斑面积占叶片面积 >75% 图1　草莓拟盘根腐病离体叶片抗性评价 5 田间鉴定 5.1 病情调查 5.1.1 调查时间 从草莓定植 2周后开始至结果后期结束 ，每2周调查一次 。 5.1.2 调查地选择 选择当地曾有该病发生的典型田块 1个~3个，定为系统调查点 。自首次发现该病发生后 ，至结果 后期结束 ，可进行 2次~3次调查，每个调查田块所在区域至少调查 20个小区（面积 ≥10 m²，草莓植株 30株以上） 。 2DB32/T 5303—2025 5.1.3 调查方法 每田块依据田块形状选择 “梅花形”或“S形”法进行五点取样 ，每垄单行种植时 ，每点顺垄逐株调查 20株，每垄双行种植时 ，每点每行调查 10株，共20株，统计其抗性等级 ，计算病株率 ，结果记录至草莓拟 盘根腐病病情调查记录表 （见附录 A中的 A.1） 。 5.2 严重度分级 严重度分级基于叶片或根颈部病变症状分为 6级，具体分级标准见表 2。草莓拟盘根腐病症状识别 及发病规律见附录 B。 表2　草莓拟盘根腐病严重度 病级 0 1 3 5 7 9 　　注： X表示发病叶片数占叶片总数的百分比 ；S表示变色面积占剖面的百分比 。植株叶片症状 健康植株 ，无症状，X=0 草莓植株叶片现典型症状 ，新叶失去光泽 、失绿、老叶主脉一侧 呈水渍状褐色斑点 ，X≤10% 草莓植株叶片现典型症状 ，新叶失绿 、变黄，老叶呈红褐色网纹 斑，10<X≤25% 草莓植株叶片现典型症状外 ，植株略有矮化 ，主脉一侧现椭圆形 或不规则病斑 ，25<X≤50% 草莓植株叶片现典型症状 ，植株明显矮小 ，不伸展，老叶呈红褐 色或紫红色萎蔫 ，50<X≤75% 草莓植株现枯死症状 ，叶片干枯下垂 ，不结果，甚至整株现急性 凋萎死亡 ，X>75%根颈部症状 根颈部无病变 ，S=0 根颈部横切面有轻度零星变色点状斑 ，S≤ 10% 根颈部横切面有零星变色点状斑 ，10<S≤ 25% 根颈部横切面现变色 ，颜色较浅 ，现红棕色片状 斑，25<S≤50% 根颈部横切面变色 ，颜色中度 ，现红褐色至深褐 色病斑，50<S≤75% 植株地上部基本枯死 ，根颈部横切面现深褐色 病斑，S>75% 5.3 发病程度分级 草莓拟盘根腐病按其发病程度分为 6级，分别为免疫 （0级） 、高抗（1级） 、抗病（3级） 、中抗（5级） 、感 病（7级） 、高感（9级） ，以当地病害流行盛期调查的平均病情指数为分级指标 ，具体见表 3。 表3　草莓拟盘根腐病发病程度分级 抗性等级 免疫（I） 高抗（HR） 抗病（R） 中抗（MR） 感病（S） 高感（HS）病情指数 （DI） DI=0 0<DI≤5 5<DI≤10 10<DI≤30 30<DI≤50 50<DI≤100 其中，病情指数 （DI）按公式（1）计算： DI=∑（Si×Xi）/（Smax×N）×100 ………………………… （ 1 ） 3DB32/T 5303—2025 式中： DI——病情指数 ； Si——病级数； Xi——对应病级 （Si）的病株数或病叶数 ； Smax——病级数最大值 ； N——调查总株数或总叶数 。 6 抗性结果 根据 5.2和5.3确定抗性水平 ，可判定草莓拟盘根腐病抗性等级 。当室内鉴定与田间鉴定结果不一 致时，优先采用田间鉴定结果作为最终依据 。 7 档案记录 记录技术实施过程中参与人员 、时间、地点、品种资源 、样本来源 、病原菌分离 、抗病性鉴定结果及病 害发生情况等 ，相关记录保留 2年以上。 4DB32/T 5303—2025 附 录 A （资料性） 草莓拟盘根腐病病情调查记录表 草莓拟盘根腐病病情调查记录表见表 A.1。 表A.1　草莓拟盘根腐病病情调查记录表 调查 人员调查 时间调查 地点寄主 品种连作 年限生育期总株数 病株数抗性等级 I HR R MR S HS备注 5