ICS 11.100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0665—2008 MH琼脂培养基 Mueller hinton agar medium 2008-04-25发布 2009-06-01实施 国家食品药品监督管理局 发布 YY/T0665—2008 前言 本标准是在参考《中华人民共和国药典》2005年版（二部）、WS231一2002《用于纸片扩散法抗生素 敏感试验的脱水Mueller-Hinton琼脂的检验规程》及临床和实验室标准协会[CLSI,原美国国立临床实 验室标准化委员会（NCCLS)发布的抗微生物药物敏感性试验执行标准（第15版）的基础上，结合中国 国情及实际情况和要求而制定。 本标准附录A为规范性附录。 本标准由国家食品药品监督管理局提出 本标准由中国药品生物制品检定所归口。 本标准由中国药品生物制品检定所负责起草。 本标准主要起草人：孙彬裕、康国华、曲守方、刘艳、高尚先。 I YY/T0665—2008 MH琼脂培养基 1范围 本标准规定了MH琼脂培养基的质量要求、检验方法、使用说明、标志、标签以及包装、运输、贮存。 本标准适用于MH琼脂培养基。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T191包装储运图示标志 中华人民共和国药典2005年版（二部） JJF1070一2000定量包装商品净含量计量检验规则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 培养基culturemedium 培养基是指由人工方法配合而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存使用的混合营养物制品。 3.2 质控菌株 qualitycontrolstrain 质控菌株通常指用于培养基质量控制和性能测定的微生物。 3. 3 菌落形成单位 colonyformingunit,CFU 菌落形成单位是指在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁 殖所形成的集落，以其表达活菌的数量。 4培养基配方 单位：g/L 酸水解酪蛋白 17.5 1. 5 可溶性淀粉 牛肉浸出粉 2. 0 琼脂 13.0~17.0 参考配方中琼脂的含量均可根据凝胶强度适当调节。 5质量要求 5.1理化要求 5.1.1外观 应为均一的浅黄色粉末。 1 YY/T0665—2008 5.1.2装量 应不低于标示量。 5.1.3 pH值 灭菌后，20℃～25℃时，该培养基pH值应为7.4士0.2。 5.1.4干燥失重 应不超过6.0%。 5.2药敏试验 按照临床和实验室标准协会[CLSI，原美国国立临床实验室标准化委员会（NCCLS)]发布的抗微生 物药物敏感性试验执行标准（第15版）要求，培养基接种质控菌应生长良好，抑菌圈应符合表1的要求。 表1药敏试验抑菌圈允许范围 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希氏菌 纸片抗生 抗生素名称 (ATCC25922) (ATCC25923) (ATCC27853) (ATCC35218) 素含量 抑菌圈直径/mm 抑菌圈直径/mm 抑菌圈直径/mm 抑菌圈直径/mm 氨苄青霉素 10 μg 16~22 27~35 纸片直径： (Ampicillin) 哌拉西林 100 μg 24~30 25~33 12~18 (Piperacilin) 庆大霉素 10 μg 19~26 19~27 16~21 (Gentamycin) 环丙沙星 5 μg 30~40 22~30 25~33 (Ciprofloxacin) 氯霉素 30 μg 21~27 19~26 (Chloramphenicol) 青霉素 10 units 26~37 (Penicillin) 四环素 30 μg 18~25 24~30 (Tetracycline) 头孢他啶 30 μg 25~32 16~20 22~29 (Ceftazidime) 氧氟沙星 5 μg 29~33 24~28 17~21 (Ofloxacin) 复合磺胺 1. 25/ (Trimethoprim-Sulf 23~29 24~32 23.75 μg amethoxazole) a临床和实验室标准协会[CLSI,原美国国立临床实验室标准化委员会（NCCLS)]发布的抗微生物药物敏感性试 验执行标准（第15版）中规定为6mm，这也是美国所采用的纸片的直径，即该抗生素对该菌无抑制作用，不产 生抑菌圈。但是由于菌株产生变异，会被抑制，该项实验一定要进行以确证菌株未产生变异。而各国的纸片直 径会有所不同，故此按表中所述进行规定。 2 YY/T0665—2008 6检验方法 6.1理化检验 6.1.1外观 采用目测法，在自然光线明亮处目视，应符合5.1.1的规定。 6.1.2装量 按JF1070一2000，使用通用量具，测定装量，应符合5.1.2的规定。 6.1.3pH值 按使用说明配制培养基，灭菌后，在20℃～25℃时，按中华人民共和国药典pH值测定法或其他适 宜固体培养基检测的pH计测定，应符合5.1.3的规定。 6.1.4干燥失重 按《中华人民共和国药典》干燥失重测定法测定，应符合5.1.4的规定。 6.2 2药敏试验 按附录A试验方法进行，结果应符合5.2的规定。 7使用说明 使用说明至少应当具有下列内容： a）j 产品名称、规格； b) 配方； 用途； d) 使用方法； e) 注意事项； f) 贮存条件与失效期； g) 生产单位名称、联系方式。 8 标志与标签 标志与标签至少应当具有下列内容： a） 执行标准号； 产品注册证号； c) 产品名称、规格、数量、批号； 制造厂名称、商标和厂址； e) 贮存条件和失效期。 9 包装、运输、存 9.1包装 包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。包装容器应保证密封性良好，不易破碎。 9.2运输 培养基在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸淋，防止与酸碱物质接触， 防止内外包装破损。 9.3贮存 产品应置阴凉干燥处贮存。 YY/T0665—2008 附录A （规范性附录） MH琼脂培养基药敏试验方法 A.1质控菌株 大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）（ATCC25922） 金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）（ATCC25923） 铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）（ATCC27853） 大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）（ATCC35218） 培养基药敏试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第 0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 不应同时操作2个以上菌株。 A.2方法 A.2.1无菌操作要求 培养基药敏试验应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 稀释液、培养基、实验器具等灭菌时，应按照中华人民共和国药典中灭菌法的要求，采用验证合格的 灭菌程序灭菌。 A.2.2菌种复苏 启开质控菌种，用0.9%无菌氯化钠溶液0.3mL制成菌悬液，加至营养琼脂斜面培养基中，置 36℃±1℃培养18h20h。 A.2.3菌种传代 刮取上述复苏后的质控菌种的新鲜培养物，加至营养琼脂斜面培养基中，36℃士1℃培养24h。 A.2.4菌种增菌培养 刮取上述传代后的质控菌种的新鲜培养物，加至营养琼脂斜面培养基中，36℃士1℃培 养18 h~24 h。 A.2.5菌悬液制备 将上述增菌培养后的质控菌种的新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀菌液，并稀释至浊 度为0.5麦氏标准单位（即约1.5X10°CFU/mL）的菌悬液，作为工作菌液。 A.2.6培养基制备 将待检MH琼脂培养基，用蒸馏水或去离子水按照说明上标出的浓度配制成溶液，121℃灭菌 15min后，冷却至45℃～50℃左右，混匀后迅速加人每个平皿（直径为90mm），制成4mm厚度的平 皿。待冷却至室温凝固后进行检测。 A.2.7培养基接种 检测时，用无菌棉拭浸取工作菌液（在管壁内轻轻转压除去过多菌液）轻轻均匀涂抹到待检MH琼 脂培养基表面，每一平血涂抹三次，每次涂抹后均需将平血转动60°，再行下一次涂抹，最后沿平血壁圆 周涂抹一次，使细菌呈融合的菌苔生长。每一质控菌株接种2～3个平皿。 A.2.8放置药敏纸片 上述平血于室温放置片刻，待培养基表面稍干后，用无菌镊子将药敏纸片均匀贴布于培养基表面 表面，即不可移动。在15min～30min内将接种过质控菌并加好药敏纸片的培养基，置36℃士1℃培养 4 YY/T0665—2008 培养18h~20h。 A.2.9 观察记录结果 观察抑菌圈大小，同时测量并记录抑菌圈直径 5