ICS 11. 100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0576—2005 哥伦比亚血琼脂基础培养基 Columbia blood agar base medium 2005-12-07发布 2006-12-01实施 发布 国家食品药品监督管理局 数码防伪 YY/T05762005 前 言 本标准全部技术条款为强制性。 本标准是在参考《中华人民共和国药典》（2005年版)基础上，结合中国国情及实际情况和要求而 制定。 本标准附录A为规范性附录。 本标准由国家食品药品监督管理局提出。 本标准由中国药品生物制品检定所归口。 本标准由中国药品生物制品检定所负责起草。 本标准主要起草人：刘艳、孙彬裕、曲守方、高尚先。 I YY/T0576—2005 哥伦比亚血琼脂基础培养基 1范围 本标准规定了哥伦比亚血琼脂基础培养基的质量要求、检验方法、使用说明、标志、标签以及包装、 运输、贮存。 本标准适用于哥伦比亚血琼脂基础培养基。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T191包装储运图示标志 中华人民共和国药典（2005年版） JF1070一2000定量包装商品净含量计量检验规则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 培养基 culturemedium 由人工方法配合而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存使用的混合营养物制品。 3. 2 质控菌株 qualitycontrolstrain 质控菌株通常指用于培养基质量控制和性能测定的微生物。 3. 3 菌落形成单位 colonyformingunit,cfu 菌落形成单位是指在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁 殖所形成的集落，以其表达活菌的数量。 4 培养基配方 单位为g/L。 10.0 g 酪蛋白胰酶消化物 3. 0 g 心胰酶消化物 玉米淀粉 1. 0 g 琼脂 13.0g~15.0g 肉胃酶消化物 5.0 g 5.0 g 酵母浸出粉 氯化钠 5.0 g 1 YY/T0576—2005 5质量要求 5.1理化要求 5.1.1外观 应为均一的浅黄色粉末。 5.1.2装量 应不低于标示量。 5.1.3pH值 灭菌后，20℃～25℃时，该培养基pH值应为7.3士0.2。 5.1.4干燥失重 应不超过6.0%。 5.2生长试验 培养基接种质控菌应生长良好，乙型溶血性链球菌的菌落周围产生β溶血，肺炎链球菌的菌落周围 产生α溶血。 6检验方法 6.1理化检验 6.1.1外观 采用目测法，在自然光线明亮处目视，应符合5.1.1的规定。 6.1.2装量 按定量包装商品净含量计量检验规则，测定装量，应符合5.1.2的规定。 6.1.3pH值 按使用说明配制培养基，取6mL新鲜配制的液体培养基，加新鲜蒸馏水至40mL，灭菌后，在 20℃～25℃时，按《中华人民共和国药典》（2005年版）pH值测定法测定，应符合5.1.3的规定 6.1.4干燥失重 按《中华人民共和国药典》（2005年版）干燥失重测定法，在60℃时压力2.67kPa（20mmHg）以下 干燥至恒重，应符合5.1.4的规定。 6.2生长试验 按附录A试验方法进行，结果应符合5.2的规定。 7使用说明 使用说明至少应当具有下列内容： a) 产品名称、规格； b) 配方； c) 用途； d) 使用方法； e) 注意事项； 贮存条件与失效期； g) 生产单位名称、联系方式。 8标志与标签 标志与标签至少应当具有下列内容： a）执行标准号； 2 YY/T0576—2005 b) 产品注册证号； c) 产品名称、规格、数量、批号； d) 制造厂名称、商标和厂址； e) 贮存条件和失效期。 9 包装、运输、贮存 9. 1 包装 包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。包装容器应保证密封性良好，不易破碎 9.2 2运输 培养基在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸淋，防止与酸碱物质接触 防止内外包装破损。 9.3贮存 产品应置阴凉干燥处贮存。 3 YY/T0576—2005 附录A （规范性附录） 哥伦比亚血琼脂基础培养基生长试验方法 A.1质控菌株 乙型溶血性链球菌（Streptococcushemolytis-β)LCMCC（B）32210] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）［CMCC(B）26001] 大肠埃希菌（Escherichiacoli)[CMCC(B）44113] 肺炎链球菌（Streptococcuspneumoniae)[ATCC6305] 培养基生长试验可采用上述菌株或其他等同的标准菌株，所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌 特性。 不应同时操作2个以上菌株。 A.2方法 A.2.1无菌操作要求 培养基生长试验应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 稀释液、培养基、实验器具等灭菌时，应照中华人民共和国药典（2005年版）灭菌法的要求，采用验 证合格的灭菌程序灭菌。 A.2.2菌种复苏 启开金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌菌种，用0.9%无菌氯化钠溶液0.3mL制成菌悬液，加至营养琼 脂斜面培养基中，启开乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌菌种，用0.9%无菌氯化钠溶液0.3mL制成菌悬 液，加至血琼脂斜面培养基中，30℃～35℃培养24h。 A.2.3菌种传代 刮取上述复苏后的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌新鲜培养物，加至营养琼脂斜面培养基中，刮取乙 型溶血性链球菌、肺炎链球菌新鲜培养物，加至血琼脂斜面培养基中，30℃～35℃培养24h。 A.2.4菌种增菌培养 刮取上述传代后的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物，加至营养琼脂斜面培养基中，刮取 18h~24h。 A.2.5菌悬液制备 将上述增菌培养后的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌的新鲜培养物 分别用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数约相当于100cfu~1000cfu的菌悬液。 A.2.6培养基接种 用蒸馏水或去离子水按说明上的浓度配制待检哥伦比亚血琼脂基础培养基，121℃灭菌15min后， 冷至55℃左右，加人7%10%无菌脱纤维血，混匀后迅速在每个平皿（直径为90mm）中加人约 15mL～20mL，待冷却至室温凝固后进行检测。 基平血做空白对照，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌置30℃～35℃培养18h20h，乙型溶血性链球菌、 肺炎链球菌置30℃35℃培养24h～48h。观察菌落生长情况、有无溶血现象，并记录结果。结果应 符合5.2的要求。 4 YY/T0576—2005 参考文献 [1]GB9969.1—1998 工业产品使用说明书 总则 [2］陈天寿主编.微生物培养基的制造与应用.北京.中国农业出版社.1995年6月 5