ICS11.060.10 YY C33 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0127.12—2008 牙科学 口腔医疗器械生物学评价 第2单元：试验方法微核试验 DentistryBiological evaluation of medical devices used in dentistry Part2:Testmethod-Micronucleustest 2009-06-01实施 2008-04-25发布 国家食品药品监督管理局 发布 数码防伪 中华人民共和国医药 行业标准 牙科学口腔医疗器械生物学评价 第2单元：试验方法微核试验 YY/T0127.12—2008 * 中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销 * 开本880×12301/16印张0.5字数8千字 2008年11月第一版 2008年11月第一次印刷 * 书号：155066·2-19187 7定价10.00元 如有印装差错 由本社发行中心调换 版权专有侵权必究 举报电话：（010)68533533 YY/T0127.12—2008 前疗言 《口腔材料生物学评价》第2单元，共分为如下几部分： YY/T0127.1—1993 口腔材料生物试验方法溶血试验 YY/T0127.2—1993 口腔材料生物试验方法 静脉注射急性全身毒性试验 —YY/T0127.3—1998 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法根管内应 用试验 -YY/T0127.4—1998 口腔材料生物学评价 第2单元：口腔材料生物试验方法 骨埋植 试验 ——YY/T0127.5—1999 口腔材料生物学评价 第2单元：口腔材料生物试验方法 吸入毒性 试验 YY/T0127.6—1998 口腔材料生物学评价 第2单元：口腔材料生物试验方法 显性致死 试验 —YY/T0127.7—2001 口腔材料生物学评价 第2单元：口腔材料生物试验方法 牙髓牙本 质应用试验 -YY/T0127.8—2001 口腔材料生物学评价 第2单元：口腔材料生物试验方法 皮下植入 试验 YY/T0127.9—2001 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法 细胞毒性 试验（琼脂覆盖法及分子滤过法） YY/T0127.10—2001 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法 鼠伤寒沙 门氏杆菌回复突变试验（Ames试验） -YY/T0127.11一2001牙科学用于口腔的医疗器械生物相容性临床前评价 个第2单元：口 腔材料生物试验方法盖髓试验 —YY/T0127.12—2007牙科学口腔医疗器械生物学评价第2单元：微核试验 —YY/T02791995 5口腔材料生物试验方法口腔粘膜刺激试验 本部分为YY/T0127的第12部分。 本部分是口腔医疗器械生物学评价系列标准生物试验方法中遗传毒性试验的具体试验方法之一 本部分主要依据ISO10993.3：2003《医疗器械生物学评价第3部分：遗传毒性、致癌性和生殖毒 性试验》中推荐的OECD474的方法，并参考我国GB/T15193.5—2003《食品安全性毒理学评价程序 和方法》而制定。 OECD474骨髓细胞微核试验”的适用范围是化学物质。GB/T15193.5一2003的适用范围是食 水平的选择和采样时间与上述标准不同。 本标准由国家食品药品监督管理局提出。 本标准由全国口腔材料和器械设备标准化技术委员会归口。 本标准负责起草单位：四川医疗器械生物材料和制品检验中心。 本标准参加起草单位：国家食品药品监督管理局北大医疗器械质量监督检验中心。 本标准主要起草人：四川医疗器械生物材料和制品检验中心：朱蔚精、谭言飞、张伶俐、梁洁；国家食 品药品监督管理局北大医疗器械质量监督检验中心：林红、刘文一。 I CHIN OF PRESS S YY/T0127.12—2008 牙科学口腔医疗器械生物学评价 第2单元：试验方法微核试验 1范围 YY/T0127的本部分规定了口腔医疗器械遗传毒性 母髓细胞微核试验方法和技术要求。 本部分适用于检测口腔医疗器械及其组分或其浸提液可能的致突变作用。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通/T0127的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单 泡括勘误 均不适用于本部，然流，鼓励根据本部分达成 修订 协议的各方研究是查可便用这些文 件的最新版本 凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本 部分。 GB/T16886 医疗器械 生物学识 部分：样品制 备与参照样品GB/T16886.12— 第12 2005,SO1099312:202,IDT) S 3-器具 S 解剖器械、 專微镜、载玻 R P 4试剂 试剂均用分析纯献剂，试验用水为蒸罐 水。 S 4.1小牛血清 经过滤灭菌的血清，置56 灭活。保存于℃冰箱内。也可用 淘0. 小鼠或大鼠血清代公 4.2Giemsa储备液O 取Giemsa染料3.8 乳钵内，加甲醇375mL，研磨，待染料全部溶解质，再加人甘油125mL，置 37℃温箱保温48h，振摄数饮 八过滤后室温放置两周或更长时间。备用。 4.3Giemsa应用液 取1份Giemsa储备液，加份磷酸盐缓冲液（nH6-8~7.0）混含，临用时配制。 4.4磷酸盐缓冲液（pH6.8~7.0） 2/15mol磷酸氢二钠； 2/15mol磷酸二氢钾。 4.5甲醇 5试验动物 5.1种系选择：推荐使用小鼠或大鼠，也可使用其他合适的哺乳动物种系。 试验使用健康年青的成年小鼠。通常使用7周～12周龄，体重25g～30g昆明种小鼠，或体重 150g~200g的Wistar大鼠或用130g~170g的SD大鼠。 5.2每组若用两种性别的动物，至少雌、雄各5只。若用单一雄性动物，每组至少6只。动物购买后至 少适应环境3d。 1 YY/T0127.12—2008 6给药剂量和分组 剂量水平、采样时间和次数：根据需要可从6.1、6.2、6.3剂量选择方法中选择其中的一种。 6.1对遗传毒性的初始（期）评价，可使用一个剂量的受试物。该剂量为最大耐受剂量或产生一些细胞 毒性指标的剂量。采样次数和时间：应采样三次，第一次采样时间不得早于给试验物质后18h24h， 第三次采样不得晚于72h。 当有科学实验或初期评价数据证明出现细胞毒性改变时，也可采用附加的剂量水平。若为了确认 而使用微核试验时，至少应增加2个附加剂量水平。同时设溶剂（或浸提介质）对照组和阳性对照组，阳 性对照物可用环磷酰胺40mg/kg体重经口或腹腔注射。也可采用其他已知能产生微核细胞数增加的 物质为阳性对照物。 6.2以最大耐受剂量为最高剂量，下设2个剂量组，中剂量组为最高剂量的1/2，低剂量组为高剂量组 的1/5。其采样时间为第二次给试验物质后6h。 6.3按GB/T16886.12的规定制备溶液或浸提液 6.3.1若试验物质为可溶性，则用适宜的介质制备成溶液或稀释液。40mg/kg为最高剂量组，中剂量 组为高剂量组的1/5，低剂量组为中剂量组的1/5。其采样时间与6.2相同。 6.3.2若试验物质为浸提液，以浸提液原液（0.2g/mL浸提液）为最高剂量组，中剂量组为高剂量组的 1/5，低剂量组为中剂量组的1/5。浸提介质采用生理盐水。其采样时间与6.2相同。 7试验步骤 7.1试样制备 试验物（受试物）：固体或液体受试物应能在等渗溶液中溶解，如不能溶解，应能在适当的介质中溶 解或混悬，或按GB/T16886.12制备浸提液。应采用新鲜制备的试验液进行试验（固化类材料应按说 明书制样后，并在室温固化2h制备浸提液。浸提液应在制备后24h内使用）。 7.2试验物与动物接触 采用等容给药法。受试物与阴性或阳性对照物采用经口灌胃、腹腔注射或静脉注射50mL/kg体重。 7.3采样时间 根据细胞周期和不同受试物的作用特点，确定取材时间。常采用两次给受试物方法，即30h给药 两次，间隔24h，于第二次给试验物后6h，颈椎脱白处死动物，采样。 8骨髓涂片的制备 8.1于清洁载玻片上，滴加小牛血清1～2滴，取动物的胸骨或股骨，挤压或剪碎胸骨或股骨，与小牛血 清混匀，常规推片，或用小牛血清冲洗股骨骨髓腔，制成细胞悬液，推片。涂片自然干燥后，放人甲醇中 固定10min~15min。 8.2将涂片固定后保存。 8.3染色方法：常用Giemsa染色法，也可用荧光染色法。 8.3.1Giemsa染色法：染色临用时，用Giemsa应用液染色或将固定后的涂片放人Giemsa应用液中染色 15min～20min，立即用pH6.8～7.0的磷酸盐缓冲液或用蒸馏水冲洗。作好标记，置阴凉干燥处保存。 8.3.2荧光染色法：采用1/10000吖啶橙染色。 9涂片观察 9.1显微镜观察：选择细胞完整、分散均匀、着色适当的涂片区域，在油镜下观察。每一动物至少计数 1000个嗜多染红细胞，观察计数含有微核的嗜多染红细胞数。微核细胞率以10-"表示。用Giemsa染 色，嗜多染红细胞被染成深蓝色，成熟红细胞呈粉红色。典型的微核为单个的、圆形、边缘光滑整齐，着 2 YY/T0127.12—2008 色与细胞核一致，呈紫红色或蓝紫色。其直径通常为细胞的1/201/5。 嗜多染红细胞与正染红细胞的比例（PCE/RBC)可作为细胞毒性指标之一。一般计数200个细胞 中正染红细胞所占的比例。试验组嗜多染红细胞的总数应不小于对照组的20%。否则应降低最高剂 量组的剂量。