SB ICS 67.160 X 66 备案号：201822007 中华人民共和国国内贸易行业标准 SB/T10417--2007 酱油中乙酰丙酸的测定方法 Method for determination of B-acetyipropionic acid in soy sauce 2007-01-25发布 2007-07-01实施 中华人民共和国商务部 发布 139451912 SB/T 10417---2007 目 次 前言 范围 2 内标法 2.1 原理 2.2 试剂和溶液 2.3 仪器和设备 2.4 分析步骤 外标法 3 3. 1 原理 3. 2 试剂 3. 3 仪器和设备 3. 4 分析步骤臻 SB/T10417-2007 前言 本标准是为了配合国家、行业出台的一系列酱油新标准，即：GB18186-2000《酿造酱油》、 SB10336—2000《配制酱油》、SB10338--2000《酸水解植物蛋白调味液》的实施而制定的。 本标准由中国调味品协会提出。 本标准由中华人民共和国商务部归口。 本标准起草单位：北京市食品酿造研究所、广东佛山海天调味食品有限公司。 本标准主要起草人：吴鸥、钟佛生、黄文彪、车有荣、邓嫣容、石欲容、潘淑芬、杨桂菊。 SB/T10417-2007 酱油中乙酰丙酸的测定方法 1范围 本标准规定了用气相色谱法测定酱油中乙酰丙酸的方法。 本标准适用于酱油中乙酰丙酸的测定。 / 本标准方法的检出限：0.010g/kg。 2内标法 2.1原理 样品经酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，以正庚酸作内标物质，用具有氢火焰离子化检测器的气相色 谱仪进行测定，以内标法进行定量。 2.2试剂和溶液 除非另有规定，仅使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水。 2.2.1无水硫酸钠：650℃下灼烧4h，贮于密闭容器中备用。 2.2.2 无水乙醚。 2.2.3 浓盐酸。 2.2.4 饱和氯化钠。 2.2.5 标准品正庚酸：色谱纯，纯度≥99.5%。 2.2.6 标准品乙酰丙酸：色谱纯、纯度>98%。 2.2.7 正庚酸标准溶液：称取0.50g正庚酸标准品（精确至0.0001g)(2.2.5），用乙酸乙酯定容至 100mL。此标准溶液的浓度为0.0050g/mL。 2.2.8 乙酰丙酸标准溶液：称取0.50g乙酰丙酸标准品（精确至0.0001g)（2.2.6），用乙酸乙酯定容 至100mL。此标准溶液的浓度为0.0050g/mL。 2.2.9 标准系列溶液：分别准确吸取乙酰丙鼓标准溶液（2.2.8)0.05mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、 1.5mL、2.0mL于6个10mL容量瓶中，各加入1.0mL正庚酸标准溶液（2.2.7），用乙酸乙酯定容， 即得标准系列溶液，相当于每毫升含25μg，50μg，250μg，500g，750μg，1000ug的乙酰丙酸。 2.3仪器和设备 实验室常规仪器、设备及下列各项： 2.3.1100mL具塞试管。 2.3.2气相色谱仪：配有氢火焰离子化捡测器（FID)。 2.3.31 色谱柱：石英弹性毛细管柱，柱长30m，内径0.25mm，涂膜厚度0.5μm；固定液：Carbwax 20M。或与此相当的色谱柱。 2.3.4250mL圆底烧瓶。 2.3.5浓缩设备（水浴、旋转蒸发仪或氮吹仪）。 2.4分析步骤 2.4.1样品提取 准确称取5.0g试样（精确至0.0001g)于100mL具塞试管（2.3.1)中，加人10mL饱和氧化钠溶 液、1.0mL正庚酸标准溶液（2.2.7）、浓盐酸3.0mL(2.2.3），充分霆摇1min后，加人50.0mL无水乙 醚，霆摇萃取3min～5min，静置约10min～15min。待分层后，吸取上层乙醚萃取液于250mL圆底 烧瓶（2.3.4)中，再重复萃取两次，合并乙醚萃取液，用10mL饱和氯化钠溶液洗涤两次，弃去下层。乙 醚层过过量无水碗酸钠脱水，在45℃左右浓缩至近干，残液用乙酸乙酯定容至10mL，即可上机。 SB/T10417-2007 2.4.2测定 2.4.2.1 气相色谱参考条件 8℃/min 色谱柱温度：120℃，1min +230℃4min a) b) 进样口温度：270℃； c) 检测器温度：270℃； d) 进样方式：分流进样，分流比25：1； e) 进样体积：1μL； f) 氢气流速：30mL/min； g) 空气流速：300mL/min； h) 尾吹气：30mL/min； 载气：高纯氮，纯度大于99.999%，流速：1.0mL/min。 i) 2.4.2.2定量 用进样器分别吸取1μL的标准系列溶液（2.2.9），注入气相色谱仪，在上述色谱条件（2.4.2.1)下 测定乙酰丙酸与内标物质的响应峰面积。以乙酰丙酸蜂面积/内标物质峰面积为纵坐标，以乙酰丙酸浓 度为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。 用进样器吸取1μL的试样（2.4.1），注人气相色谱仪，在上述色谱条件（2.4.2.1）下测定试样。根 据标样保留时间，确定乙酰丙酸和内标物质的峰位置，并记录乙酰丙酸峰面积和内标物质峰面积，计算 样品中乙酰丙酸含量。 在上述色谱条件(2.4.2.1)下，通常保留时间为：乙酰丙酸约为14.6min，内标物质约为9.7min。 标准系列溶液的气相色谱图如图1： 1. 210 9. 699 14. 587 图1标准系列溶液的气相色谱图 2.4.3空白试验 用5.0mL蒸馏水代替试样，按5.1～5.2的步骤做空白试验。 2.4.4结果计算 样品中乙酰丙酸的含量X，按式（1)计算： (1 ) m×1000 式中： X样品中乙酰丙酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 一测定用样品中乙酰丙酸含量，单位为微克每毫升（ug/mL）； V样品的定容体积，单位为毫升（mL)； m.-样品质量，单位为克（g）。 结果表述：计算结果保留两位有效数字。 2 SB/T 10417---2007 2.4.5精密度 同-样品，两次平行测定结果之差，不得超过平均值的10%。 3外标法 3.1原理 样品经酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，以 外标法（标准曲线法）跟系列标准进行比较定量。 3.2试剂 如非特别说明，本标准方法所用的水为蒸馏水，所用试剂均为分析纯。 3.2.1无水乙醚：不含过氧化物。 3.2.2 无水硫酸钠：650℃以下灼烧4h，贮于密闭容器中备用。 3.2.3 乙酸乙酯：经重蒸馏处理。 3.2.4 6mol/L盐酸溶液：量取50mL浓盐酸，用水稀释至100mL。 3.2.5 乙酰丙酸标准品：色谱纯，纯度≥99.5%。 3.2.6 乙酰丙酸标准贮备液：准确称取乙酰丙酸标准品（3.2.5)0.50g（精确至0.0001g），置于 100mL容量瓶中，室温下用乙酸乙酯（3.2.3）溶解稀释并定容至刻度。此标准溶液浓度相当于 5.0mg/mL乙酰丙酸。 3.2.7乙酰丙酸标准系列溶液：吸取适量的乙酰丙酸标准贮备液(3.2.6)，以乙酸乙酯（3.2.3)稀释成 每毫升相当于25μg，50μg，100μg，500μg，750pg，1000μg的乙酰丙酸。 3.3仪器和设备 实验室常规仪器、设备及以下各项： 3.3.1气相色谱仪：配备氢火焰离子化检测器。 3.3.2色谱柱J&WDB-FFAP色谱柱（柱长30m，内径0.25mm，内膜厚度0.25μm，固定液：TPA 改性聚乙二醇)或与之相当的色谱柱。 3.3.3浓缩设备（旋转蒸发器、恒温水浴、真空泵）。 3.3.425mL具塞试管。 3.3.5100mL.梨形浓缩瓶。 3.4分析步骤 3.4.1样品提取 室温下准确吸取充分均匀的酱油样品5.0g(精确至0.0001g)于25mL具塞试管中，加人6mol/L 盐酸溶液（3.2.4)1mL，充分囊播均匀，往试管中加人25mL无水乙醚（3.2.1)，充分覆摇萃取1min，静 置约10min～15min，待上层乙醚与下层样品充分分层后，吸取上层乙醚提取液于100mL浓缩瓶中， 之后重复进行上述的萃取操作两次，每次加人无水乙醚的量均为20mL，三次的乙醚萃取液合并后经无 于室温下定容至5mL，摇匀后静置，待气相色谱进样检测。 3.4.2色谱参考条件 10℃/min-230℃,12min; 色谱温度：60℃，1min 进样口温度：260℃； 检测器温度：280℃； 进样方式：不分流进样； 进样体积：1μL； 氢气流速：35mL/min； SB/T 10417--2007 空气流速：200mL/min； 载气：氮气，纯度大于99.999%，流速：2.2mL/min； 尾吹气：氮气，纯度大于99.999%，流速：27.8mL/min。 3.4.3测定 以乙酰丙酸标准系列溶液（3.2.7)分别进样1μL于气相色谱仪中，测得不同的标准浓度下乙酰丙 酸的响应峰面积，以乙酰丙酸的浓度为横坐标，相应的蜂面积为纵坐标，作一标准曲线并计算其回归 方程。 在相同的色谱条件下以上述处理后的样品溶液(3.4.1)进样1μL。测得的峰面积与标准曲线比较 定量。 在上述色谱条件(3.4.2)下，标准系列溶液的气相色谱图如图2： t vd Lev Acid 300 250 12.516. 200 150 100 50 10 15 min 图2 标准系列溶液的气相色谱图 3.4.4结果计算 样品中乙酰丙酸的含量按式(2)进行计算。 m×1000 (2) 式中： 一样品中乙酰丙酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； X- -测定用样品中乙酰丙酸含量，单位为微克每毫升（ug/mL）； 一样品的定容体积，