ICS 11. 100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T11702009 碱性蛋白陈水培养基 Alkalinepeptone water 2009-12-30发布 2011-06-01实施 技出牌 国家食品药品监督管理局 发布 YY/T1170—2009 前言 碱性蛋白陈水培养基通常用于霍乱弧菌的增菌培养，同时也可用于其他弧菌如副溶血弧菌、溶藻弧 菌的增菌培养，该培养基的pH较高，能抑制其他细菌的生长。 本标准全部技术条款为推荐性条款。 本标准附录A为规范性附录。 本标准由国家食品药品监督管理局提出。 本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会归口。 本标准由中国药品生物制品检定所负责起草。 本标准主要起草人：刘艳，孙彬裕，曲守方，高尚先 I YY/T1170—2009 碱性蛋白陈水培养基 1范围 本标准规定了碱性蛋白陈水培养基的质量要求、检验方法、使用说明、标志、标签以及包装、运输、 贮存。 本标准适用于霍乱弧菌及其他弧菌增菌培养的碱性蛋白陈水培养基。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T191包装储运图示标志 中华人民共和国药典 JJF1070一2000定量包装商品净含量计量检验规则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 培养基 culturemedium 培养基是指由人工方法配合而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存使用的混合营养物制品。 3. 2 质控菌株 卡qualitycontrol strain 质控菌株通常指用于培养基质量控制和性能测定的微生物。 3. 3 菌落形成单位 colonyformingunit,cfu 菌落形成单位是指在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁 殖所形成的集落，以其表达活菌的数量。 4培养基配方 单位:g/L 蛋白陈 10. 0 氯化钠 10.0 5质量要求 5.1理化要求 5.1.1外观 应为均一的淡黄色粉末。 1 YY/T1170—2009 5. 1.2 装量 应不低于标示量。 5.1.3pH值 灭菌后，20℃～25℃时，该培养基pH值应为8.5士0.2。 5.1.4干燥失重 应不超过6.0%。 5.2生长试验 空白对照管应无菌生长，接种10cfu～100cfu霍乱弧菌或副溶血弧菌，生长良好；接种10cfu～ 100cfu大肠埃希菌，生长部分抑制。 6检验方法 6.1理化检验 6.1.1外观 采用目测法，在自然光线明亮处目视，应符合5.1.1的规定。 6.1.2装量 按JJF1070一2000，使用通用量具，测定装量，应符合5.1.2的规定。 6.1.3pH值 按使用说明配制培养基，灭菌后，在20℃～25℃C时，按《中华人民共和国药典》pH值测定法或其他 标准方法测定，应符合5.1.3的规定。 6.1.4干燥失重 按《中华人民共和国药典》干燥失重测定法测定，应符合5.1.4的规定。 6.2生长试验 按附录A试验方法进行，接种各质控菌株，生长情况应符合5.2的规定。 使用说明书 使用说明至少应当具有下列内容： a）产品名称、规格； b）配方； c）用途； 使用方法； 注意事项； f) 贮存条件与失效期； g) 生产单位名称、联系方式。 8 标志与标签 标志与标签至少应当具有下列内容： a）执行标准号 2 YY/T1170—2009 b) 产品注册证号； c) 产品名称、规格、数量、批号； (P 制造厂名称、商标和厂址； e) 贮存条件和失效期。 包装、运输、贮存 9 9.1 包装 包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。包装容器应保证密封性良好，不易破碎。 9.2运输 培养基在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸淋，防止与酸碱物质接触， 防止内外包装破损。 9.3贮存 产品应置阴凉干燥处贮存。 3 YY/T1170—2009 附录A （规范性附录） 碱性蛋白陈水培养基生长试验方法 A.1质控菌株 霍乱弧菌古典生物型（VibriocholeraeO1/classical）ATCC14033[CMCC（B）16147] 霍乱弧菌埃尔托生物型（VibriocholeraeO1/eltor）ATCC14035：[CMCC（B）18003 副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus）ATCC17802 大肠埃希菌（Escherichiacoli）ATCC25922;[CMCC(B）44113] 培养基生长试验可采用上述菌株或其他等同的标准菌株，有条件的实验室可选择一株霍乱弧菌进 行生长试验。所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并 采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 不应同时操作2个以上菌株 A.2方法 A.2.1无菌操作要求 培养基生长试验应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 的灭菌程序灭菌。 A.2.2菌种复苏 启开霍乱弧菌、副溶血弧菌或大肠埃希菌菌种，用少量营养肉汤培养基制成菌悬液，并分别接种至 适量营养肉汤培养基，36℃士1℃培养18h24h。 A.2.3菌种传代 分别取1mL上述复苏后的培养物接种至营养琼脂培养基斜面或平血，36℃士1℃培养18h～24h。 A.2.4菌种增菌培养 分别接种上述传代后的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，36℃士1℃培养18h～24h。 A.2.5菌悬液制备 将上述增菌培养后的霍乱弧菌、副溶血弧菌或大肠埃希菌的新鲜培养物分别用0.9%无菌氯化钠 溶液或碱性蛋白陈水稀释，经比浊后制成每1mL含菌数约相当于100cfu～1000cfu的菌悬液。 A.2.6待检培养基的制备和接种 用蒸馏水或去离子水按说明书的浓度配制待检碱性蛋白陈水培养基，121℃灭菌15min后，稍冷后 分装在中试管（容量为30mL～40mL），9mL/管，进行以下检测。 检测时，每管加人0.1mL上述菌悬液。每种质控菌株接种2管，并用1个未接种的试管做空白对 照，同时将0.1mL上述大肠埃希菌悬液接种2管于营养肉汤培养基中，做为对照管，以上接种管均置于 36℃士1℃培养18h～24h，观察菌落生长情况，并记录结果。结果应符合5.2的要求。 4 YY/T1170—2009 参考文 献 [1] GB 9969.1.-1998 工业产品使用说明书 总则 [2] 陈天寿主编微生物培养基的制造与应用.北京：中国农业出版社，1995 [3] 李影林主编．中华医学检验全书（上、下卷）.北京：人民卫生出版社，1996 5