ICS 11. 100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T1166-—2009 淋球菌琼脂基础培养基 Neisseria gonorrhoeae agar medium base 2009-12-30发布 2011-06-01实施 国家食品药品监督管理局 发布 YY/T 1166-2009 前 言 淋球菌琼脂基础培养基是临床上用于分离培养淋病奈瑟菌的基础培养基，在使用时需添加适当的 添加剂如抗生素、增菌剂和抑菌剂以满足分离培养淋病奈瑟菌的需要。抗生素的加人的种类和加人量 的多少可根据临床标本的采集情况适当给予注意，提高分离培养的成功率。 本标准全部技术条款为推荐性条款。 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由国家食品药品监督管理局提出。 本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：中国药品生物制品检定所。 本标准主要起草人：刘艳、孙彬裕、曲守方、高尚先。 YY/T1166—2009 淋球菌琼脂基础培养基 范围 本标准规定了淋球菌琼脂基础培养基的质量要求、检验方法、使用说明、标志、标签以及包装、运输、 贮存。 本标推适用于淋球菌琼脂基础培养基，分离培养淋病奈瑟菌时需添加适当的抗生素、增菌剂和抑 菌剂。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T191包装储运图示标志 中华人民共和国药典 JF1070—2000 定量包装商品净含量计量检验规则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 培养基 culturemedium 培养基是指由人工方法配合而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存使用的混合营养物 制品。 3. 2 质控菌株qualitycontrolstrain 质控菌株通常指用于培养基质量控制和性能测定的微生物。 3. 3 菌落形成单位 colonyformingunit,cfu 菌落形成单位是指在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁 殖所形成的集落，以其表达活菌的数量。 4培养基配方 单位：g/L 蛋白陈 15.0 玉米淀粉 1. 0 氯化钠 5. 0 磷酸氢二钾 4. 0 磷酸二氢钾 1. 0 琼脂 12.0~14.0 YY/T1166—2009 可根据凝胶强度适当调节琼脂的含量。 5质量要求 5.1理化要求 5.1.1外观 应为均一的淡黄色粉末。 5.1.2装量 应不低于标示量。 5.1.3pH值 灭菌后，20℃～25℃时，该培养基pH值应为7.4士0.2。 5.1.4干燥失重 应不超过6.0%。 5.2生长试验 空白对照平血应无菌生长，接种淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌生长良好，接种肺炎链球菌生长受到 抑制。 .6检验方法 6.1理化检验 6.1.1.外观 采用目测法，在自然光线明亮处目视，应符合5.1.1的规定。 6.1.2装量 按JF1070—2000，使用通用量具，测定装量，应符合5.1.2的规定。 6.1.3·pH值 按使用说明配制培养基，灭菌后，按《中华人民共和国药典》pH值测定法或其他适宜固体培养基检 测的pH计测定，应符合5.1.3的规定。 6.1.4.干燥失重 按《中华人民共和国药典》干燥失重测定法测定，应符合5，1.4的规定。 6.2生长试验 按附录·A试验方法进行，该培养基接种质控菌株淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌，生长情 况应符合5.2.的规定。 使用说明书 使用说明至少应当具有下列内容： 产品名称、规格； a) b) 配方； c) 用途； d) 使用方法； 2 YY/T1166-2009 e）注意事项； f) 贮存条件与失效期； g）生产单位名称、联系方式。 8 标志与标签 标志与标签至少应当具有下列内容： 执行标准号； a) b) 产品注册证号； ( 产品名称、规格、数量、批号； d) 制造厂名称、商标和厂址； e) 贮存条件和失效期。 9 包装、运输、贮存 9.1包装 包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。包装容器应保证密封性良好，不易破碎。 9.2运输 培养基在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸淋，防止与酸碱物质接触， 防止内外包装破损。 9.3贮存 产品应置阴凉干燥处贮存。 YY/T1166—2009 附录A (规范性附录） 淋球菌琼脂基础培养基生长试验方法 A.1质控菌株 淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae)ATCC43069;[CMCC(B）29106] 脑膜炎奈瑟菌（Neisseriameningitidis)ATCC13090;[CMCC(B）29001] 肺炎链球菌（Streptococcuspneumoniae）ATCC6305；[CMCC(B）31001] 培养基生长试验可采用上述菌株或其他等同的标准菌株，所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌 种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学 特性。 不应同时操作2个以上菌株。 A.2方法 A.2.1无菌操作要求 培养基生长试验应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 稀释液、培养基、实验器具等灭菌时，应按照《中华人民共和国药典》中灭菌法的要求，采用验证合格 的灭菌程序灭菌。 A.2.2菌种复苏 启开淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌菌种，用适量0.9%无菌氟化钠溶液制成菌悬液，分别 加至适宜的培养基（如巧克力琼脂培养基）斜面上，36℃士1℃、5%～8%CO2条件下，培养约24h。培养 淋病奈瑟菌时相对湿度80%以上为宜。 A.2.3菌种传代 用取菌环取适量上述复苏后的淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌新鲜培养物，加至适宜的培 养基（如巧克力琼脂培养基）斜面，36℃土1℃、5%～8%CO2条件下，培养约24h。 A.2.4菌种增菌培养 接种上述传代后的淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌的新鲜培养物至适宜的培养基（如巧克 力琼脂培养基）斜面，36℃士1℃、5%～8%COz条件下，培养约24h。 A.2.5待检培养基的制备和接种 按照附录B配制待检淋球菌琼脂培养基进行检测，检测时，选择增菌培养时生长良好的典型菌落 对每个平血划线接种。每种质控菌株接种2个平血，并用1个未接种的培养基平血做空白对照。将平 血置36℃士1℃、5%～8%CO2条件下，培养约24h～48h，观察菌落生长情况，并记录结果。结果应符合 5.2的要求。 YY/T1166-2009 附录B （资料性附录） 淋球菌琼脂培养基及添加剂的配制 B.1抑菌剂 多粘菌素E7500μg 制霉菌素12500U(或两性霉素B1.5mg/L) 万古霉素3000μg 溶于10mL无菌蒸馏水中，必要时，为抑制变形菌可加人三甲氧苄二胺嘧啶5000μg。过滤除菌 备用。 B.22%血红蛋白溶液 取2g血红蛋白粉放人研钵，加2mL～3mL蒸馏水研成糊状，逐步加人蒸馏水至100mL，121C高压 灭菌20min。 B.3增菌剂 葡萄糖100g，L-半胱氨酸盐酸盐25.9g，L-谷氨酰胺10.0g，L-胱氨酸1.1g，腺嘌呤1.0g，二磷酸吡 啶核苷酸0.25g，维生素B120.01g，硫胺焦磷酸0.1g，鸟嘌呤0.03g，硝酸铁0.02g，P-氨基苯甲酸 0.012g，硫胺0.003mg，蒸馏水1000mL，混合均匀，过滤除菌备用。 B.4淋球菌琼脂培养基的配制 配制双倍浓度的淋球菌琼脂基础培养基100mL，充分混匀，高压灭菌后冷却至55℃待用。无菌操 作，将上述100mL淋球菌基础培养基与100mL2%血红蛋白溶液、抑菌剂2mL、增菌剂2mL混合后倒 人平血。4℃保存备用。 5