ICS 11. 100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T1165—2009 沙保弱琼脂培养基 Sabouraud's agar medium 2009-12-30发布 2011-06-01实施 国家食品药品监督管理局 发布 YY/T1165—2009 前言 沙保弱琼脂培养基也称为沙氏培养基或沙保弱葡萄糖琼脂培养基，广泛应用于各类真菌的分离培 养，是国际上培养真菌的标准培养基。临床中使用沙保罗培养基分离标本中的酵母及酵母样菌，其成分 在沙保弱琼脂培养基的基础上添加了氯霉素和1%氯化三苯四氮唑的水溶液。 本标准全部技术条款为推荐性条款。 本标准附录A为规范性附录。 本标准由国家食品药品监督管理局提出。 本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会归口。 本标准由中国药品生物制品检定所负责起草。 本标准主要起草人：刘艳，孙彬裕，曲守方，高尚先。 I YY/T1165—2009 沙保弱琼脂培养基 1范围 本标准规定了沙保弱琼脂培养基的质量要求、检验方法、使用说明、标志、标签以及包装、运输、 贮存。 本标准适用于对真菌分离培养的沙保弱琼脂培养基。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T191包装储运图示标志 中华人民共和国药典 JF1070—2000 定量包装商品净含量计量检验规则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 培养基 culturemedium 培养基是指由人工方法配合而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存使用的混合营养物 制品。 3. 2 质控菌株qualitycontrolstrain 质控菌株通常指用于培养基质量控制和性能测定的微生物。 3.3 菌落形成单位 colonyformingunit,cfu 菌落形成单位是指在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁 殖所形成的集落，以其表达活菌的数量。 4 培养基配方 单位：g/L 蛋白陈 10.0 葡萄糖 40.0 琼脂 12.0~16.0 可根据凝胶强度适当调节琼脂的含量。 1 YY/T1165—2009 5 质量要求 5.1理化要求 5.1.1外观 应为均一的淡黄色粉末。 5.1.2装量 应不低于标示量。 5.1.3pH值 灭菌后，20℃～25℃时，该培养基pH值应为5.6士0.2。 5.1.4干燥失重 应不超过6.0%。 5.2生长试验 空白对照平血应无菌生长，接种10cfu～100cfu白色念珠菌生长良好。 6检验方法 6.1理化检验 6.1.1外观 采用目测法，在自然光线明亮处目视，应符合5.1.1的规定。 6.1.2装量 按JJF1070一2000，使用通用量具，测定装量，应符合5.1.2的规定。 6.1.3pH值 按使用说明配制培养基，灭菌后，按《中华人民共和国药典》pH值测定法或其他适宜固体培养基检 测的pH计测定，应符合5.1.3的规定。 6.1.4干燥失重 按《中华人民共和国药典》干燥失重测定法测定，应符合5.1.4的规定。 6. 2 2生长试验 按附录A试验方法进行，接种质控菌株，生长情况应符合5.2的规定。 使用说明书 使用说明至少应当具有下列内容： 产品名称、规格； 配方； b) 用途； (P 使用方法； 注意事项； f) 贮存条件与失效期； g) 生产单位名称、联系方式。 2 YY/T1165—2009 标志与标签 标志与标签至少应当具有下列内容： a) 执行标准号 b) 产品注册证号； c) 产品名称、规格、数量、批号； (P 制造厂名称、商标和厂址； e) 贮存条件和失效期。 包装、运输、贮存 9 9. 1 包装 包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。包装容器应保证密封性良好，不易破碎。 9. 2 运输 培养基在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸淋，防止与酸碱物质接触， 防止内外包装破损。 9. 3 3贮存 产品应置阴凉干燥处贮存。 3 YY/T1165—2009 附录A （规范性附录） 沙保弱琼脂培养基生长试验方法 A.1质控菌株 白色念珠菌（Candidaalbicans）ATCC10231 培养基生长试验可采用上述菌株或其他等同的标准菌株，所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌 种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学 特性。 不应同时操作2个以上菌株。 A.2方法 A.2.1无菌操作要求 培养基生长试验应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 稀释液、培养基、实验器具等灭菌时，应按照《中华人民共和国药典》中灭菌法的要求，采用验证合格 的灭菌程序灭菌。 A.2.2菌种复苏 启开白色念珠菌菌株，用0.9%无菌氯化钠溶液0.3mL制成菌悬液，加至7mL改良马丁培养基中， 25℃～30℃培养24h。 A.2.3菌种传代 取1mL上述复苏后的白色念珠菌新鲜培养物，加至7mL改良马丁琼脂斜面培养基或改良马丁培 养基中，25℃~30℃培养24h。 A.2.4菌种增菌培养 接种上述传代后的白色念珠菌新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂斜面培养基中， 25℃30℃培养18h～24h。 A.2.5菌悬液制备 将上述增菌培养后的白色念珠菌的新鲜培养物分别用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数约 相当于100cfu~1000cfu的菌悬液。 A.2.6待检培养基的制备和接种 用蒸馏水或去离子水按说明上的浓度配制待检沙保弱琼脂培养基，121℃灭菌15min后，稍冷后在 每个平血（直径为90mm）中加入约15mL～20mL，待冷却至室温凝固后进行检测。 检测时，每个平皿加人0.1mL上述菌悬液，每种质控菌株接种2个平皿，并用1个未接种的培养基 平皿做空白对照，置25℃～30℃培养，白色念珠菌培养24h～48h观察菌落生长情况，并记录结果。结 果应符合5.2的要求。 A.2.7启开菌株所使用的培养基可选用其他适于白色念珠菌生长的培养基，如真菌培养基。 4 YY/T1165—2009 参考文献 [1] GB9969.1.-1998 ：工业产品使用说明书总则 [2] 陈天寿主编．微生物培养基的制造与应用.北京：中国农业出版社，1995年 [3] Difco Manual.1lth Edition [4] 李影林主编．中华医学检验全书（上、下卷）.北京：人民卫生出版社，1996年 [5] 卫生部卫生监督中心卫生标准处编．临床检验标准汇编．北京：中国标准出版社，2004年 [6] 中华人民共和国卫生部医政司编．全国临床检验操作规程（第3版)南京：东南大学出版社，2006年 5