ICS 11. 060.10 C 33 YY 中华人民共和国医药行业标准 YY/T 0127.16—2009 口腔医疗器械生物学评价 第2单元：试验方法 哺乳动物细胞体外染色体畸变试验 Biological evaluation of medical devices used in dentistry Part 2:Test method In Vitro mammalian chromosome aberration test 2009-12-30发布 2011-06-01实施 国家食品药品监督管理局 发布 YY/T0127.16—2009 19 前言 本标准是口腔医疗器械生物学评价系列标准中的一项标准。 口腔医疗器械生物学评价系列标准中的第一单元，YY/T0268：2008《牙科学口腔医疗器械生物 学评价第1单元：评价与试验》是口腔医疗器械生物学评价与试验项目的选择，为指南性标准。 该系列标准的第2单元是口腔医疗器械具体生物试验方法。共分为如下几部分： 1.YY/T0127.1一93口腔材料生物试验方法溶血试验 2.YY/T0127.2一2009口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法急性全身毒性试验：静 脉途径 3.YY/T0127.3-1998 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法 根管内应用 试验 4.YY/T0127.4-2009 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法骨埋植试验 5.YY/T0127.5-1999 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法 吸人毒性 试验 6.YY/T0127.6-1998 口腔材料生物学评价 第2单元：口腔材料生物试验方法 显性致死 试验 7.YY/T0127.7-2001 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法 牙髓牙本质 应用试验 8.YY/T0127.8-2001 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法 皮下植入 试验 9.YY/T0127.9-2009 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法细胞毒性试验：琼脂扩 散法及滤膜扩散法 10.YY/T0127.10-2009 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法鼠伤寒沙门氏杆菌 回复突变试验（Ames试验） 11.YY/T0127.11一2001牙科学用于口腔的医疗器械生物相容性临床前评价第2单元：口 腔材料生物试验方法盖髓试验 12.YY/T0127.12一2008牙科学口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法微核试验 13.YY/T0127.13—2009 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法口腔黏膜刺激试验 14.YY/T0244一1996口腔材料生物试验方法短期全身毒性试验：经口途径 15.YY/T0127.14-2009 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法急性经口全身毒性 试验 16.YY/T0127.15—2009 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法亚急性和亚慢性全 身毒性试验：经口途径 17.YY/T0127.16—2009 口腔医疗器械生物学评价 第2单元：试验方法哺乳动物细胞体外 染色体畸变试验 本标准为YY/T0127系列标准的第16部分。 本标准为非等效采用OECDguidelineforthetestingofchemicalsInVitroMammalianChromo- someAberrationTest”473-1997方法。 I YY/T 0127.16—2009 本标准主要参照GB/T16886.3-2008（ISO10993.3-2003）“医疗器械生物学评价试验第3部分 遗传毒性、致癌性和生殖发育毒性试验”中推荐的OECDguidelineforthetestingofchemicals“InVitro MammalianChromosomeAberrationTest”473-1997方法制定。 本标准给出了具体的染色体畸变观察指标和判断标准。 本标准由国家食品药品监督管理局提出。 本标准由全国口腔材料和器械标准化技术委员会(SAC/TC99)归口。 本标准负责起草单位：四川医疗器械生物材料和制品检验中心（四川大学）。 本标准参与起草单位：北京大学口腔医学院口腔医疗器械检验中心、上海生物材料研究测试中心。 本标准主要起草人：梁洁、谭言飞、袁、邹文、詹杨、朱蔚精、郝鹏、张金、孙姣、陆华。 YY/T0127.16—2009 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法 哺乳动物细胞体外染色体畸变试验 1范围 本标准规定了口腔医疗器械哺乳动物细胞体外染色体畸变试验方法的技术要求。 本标准适用于测定口腔医疗器械可能造成的遗传学危害。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所 有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方 研究确定是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T16886.3医疗器械生物学评价第3部分：遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验（GB/T 16886.3-2008,ISO10993-3:2003,IDT) GB/T16886.12医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照样品（GB/T16886.12- 2005,ISO10993-12:2002,IDT) YY/T0127.10口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试 验（Ames试验） GB15193.6 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 OECDguideline for the testing of chemicals 473-1997"In Vitro Mammalian Chromosome Aberra- tion Test" 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 染色单体型畸变chromatid-typeaberration 染色体结构损伤，表现为一条染色单体断裂或染色单体间的结合。 3. 2 染色体型畸变chromosome-typeaberration 染色体结构损伤，表现为断裂或重接或两条染色单体在同一位置的损伤和重接。 3. 3 核内复制endoreduplication DNA复制一个S期后的过程，核没有进入有丝分裂，直接开始另一个S期。 3. 4 有丝分裂指数mitoticindex 观察到的发生有丝分裂的细胞数除以观察的细胞总数。 YY/T0127.16—2009 3.5 染色体结构畸变structuralaberration 显微镜下观察到的中期分裂细胞中可识别的结构改变，如缺失、断片、内交换或移位等。 3. 6 染色体数畸变 numericalaberration 染色体数目的改变。 3. 7 多倍体polyploidy 单倍体染色体数目（n）的倍数，但不包括二倍体（即3n，4n等等）。 3. 8 裂隙gap 染色单体损伤的长度小于染色单体的宽度。 4仪器及试剂 4.1实验室常用设备：洁净工作台，CO2恒温培养箱，恒温水浴箱，低温高速离心机，低温冰箱（一80℃ 以上)或液氮罐等。 4.2培养基和试剂 4.2.1DMEM、RPMI1640培养基或其他合适的培养基。 4.2.20.1%秋水仙素：置于棕色瓶中，冰箱保存。 4.2.3pH7.2磷酸盐缓冲液：称取NaCI8.5g；KCl0.2g；NazHPO，·12HzO2.85g（或NazHPO4， 2H2O1.13g）；KHzPO40.27g；溶于1000mL蒸馏水中，用pH计测定并调节至7.2。高压灭菌，冷却后 冰箱保存。 4.2.4D*-Hanks液：称取NaCl8.0g;KCl0.4g;Na2HPO4·HzO0.06g;KH2PO0.06g;NaHCO 0.35g；酚红0.02g；溶于1000mL蒸馏水中，高压灭菌，冷却后冰箱保存。 4.2.50.075mol/LKCl溶液：称取KCl2.795g，加蒸馏水500mL，灭菌后冰箱保存。 4.2.6固定液：取甲醇3份，冰醋酸1份，混匀，临用时配制。 4.2.7Giemsa储备液：称取Giemsa染料1g，逐渐加入少许甘油在研钵中研细溶解，共加人甘油66mL 混匀。于60℃温箱中保温90min。冷却后加入66mL甲醇混匀。于室温中静置1～2周，过滤，用棕色 瓶储存备用。 4.2.8Giemsa应用液：取Giemsa储备液1份，加pH7.2磷酸盐缓冲液9份，混匀，临用时配制。 5试样制备 5.1按产品说明书制备样品，根据GB/T16886.12中的10.3.2的原则，制备试样。 5.2按5.1制备的试样不能用于试验系统时应按GB/T16886.12的原则制备浸提液。 注：固化类材料应考固化后放置时间对试验结果的影响。 5.3浸提介质可选用水、生理盐水、无血清培养基等。 5.4适当时，应使用两种适宜的浸提介质，一种是极性溶剂，另一种是非极性溶剂或适合于医疗器械性 质和使用的液体，两种溶剂均应与试验系统相容。 注：常用的非极性溶剂，如DMSO等。 2 YY/T0127.16—2009 6试验方法 6.1细胞系 本标准推荐使用V79细胞（中国仓鼠肺细胞）、CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）和CHL细胞（中国 仓鼠肺细胞）。这三种细胞均为已建株的细胞，具有能在体外条件下生长形成单层、核型稳定、染色体数 目少（V79细胞2n=22士1;CHO细胞2n=22；CHL细胞2n=25士1）、细胞倍增时间短等特点。也可 采用原代细胞或其他已建株的细胞。 6.2体外代谢活化系统 体外染色体畸变试验应在